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DNA 片段化代表晚期细胞凋亡的特征。我们的 Cell Meter™ TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒使用专有的不含二甲胂酸钠的缓冲系统。该试剂盒基于将我们独特的专有荧光染料掺入细胞凋亡过程中形成的 DNA 片段中。该测定法经过优化，可在不使用抗体的情况下直接检测分离或附着细胞的细胞凋亡。该试剂盒提供了所有基本成分和优化的检测方案。

实验方案如下：

简要概述

1. 用测试化合物准备细胞。

2. 与TUNEL工作溶液在37°C下孵育30分钟至1小时。

3. 洗涤细胞。

4. 用4％甲醛（可选）固定细胞。

5. 用带FITC滤光片的荧光显微镜或带FITC通道的流式细胞仪。读取Ex / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）处的荧光强度。

注意：在开始实验之前， 在室温下解冻所有组件。

工作溶液配制

将0.5μL的100X Tunnelyte Green（组分A）添加到50μL的反应缓冲液（组分B）中，使总体积为50.5μL的TUNEL工作溶液。 避光。 注意：应单独评估每个细胞系，以确定细胞密度。

实验步骤

1.根据您的特定协议，将细胞培养至密度以诱导凋亡。 对于在96孔板培养物中生长的贴壁细胞，我们建议大约30,000至50,000个细胞/孔，对于非贴壁细胞，建议大约1至2 x 106细胞/ mL。 同时，在每种标记条件下，用诱导群体相同的密度培养非诱导阴性对照细胞群体。 注意：我们用100 nM-1 µM星形孢菌素处理HeLa细胞4小时，以诱导细胞凋亡。

2.染色和固色：

2.1取出细胞培养基。
2.2向每个样品中添加50µL TUNEL工作溶液。
2.3在37°C下孵育30-60分钟。
2.4除去TUNEL工作溶液，并用200 µL /孔的PBS洗涤细胞1-2次。
2.5向每个样品中添加100uL反应缓冲液（组分B）。
2.6使用Ex / Em = 550/590-650 nm（Cut off= 570 nm）的荧光酶标仪，带TRITC滤光片的荧光显微镜或带FL3通道的流式细胞仪检测荧光强度。
2.7可选：从步骤5中移出反应缓冲液，并向每个孔中添加100 µL /孔/ 96孔板的4％甲醛固定缓冲液（未提供）。注意：对于非贴壁细胞，请添加所需量（例如2X106细胞/ mL）的4％甲醛固定液。
2.8在室温下将平板孵育20至30分钟。
2.9去除固定剂。
2.10用PBS洗涤细胞2-3次，并用100µL PBS /孔/ 96孔板替换。
2.11使用Ex / Em = 550/590-650nm（Cut off= 570 nm）的荧光酶标仪，带TRITC滤光片的荧光显微镜或带FL3通道的流式细胞仪检测荧光强度。
2.12可选：用1X Hoechst（组分C）在Ex / Em = 350/460 nm处染色细胞核，以进行图像分析

                    图为Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒红色荧光光谱图