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钙检测对于许多生物学研究至关重要。荧光探针显示结合钙的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离钙浓度的变化。Rhod-2 AM最常用于红色荧光钙指示剂之一。然而，Rhod-2 AM在酯酶水解后仅在活细胞中发生中度荧光，并且具有非常小的细胞钙反应。

百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供的钙Cal-590?很好的改善了RHOD-2 AM细胞负载和钙反应，同时保持Rhod-2 AM的相似的光谱波长，使其与TRITC / Cy3^?滤波器组集合。在CHO和HEK细胞中，Cal-590 TM的细胞钙反应比Rhod-2 AM敏感得多。Cal-590?的光谱与fitc、alexa fluor?488和gfp的光谱很好地分离，使其成为一种理想的钙离子探针，可与gfp细胞系或fitc/alexa fluor?488标记抗体复合进行细胞内分析。

图1. Cal-590 在氯化钙（5 mM）存在下的激发和发射光谱

图2. Cal-590?在含有0至39μM游离Ca ²⁺溶液中的荧光发射光谱

图3.在相同条件下用Cal-590 TM AM（红色曲线，Cat＃20510）和Rhod-2，AM（蓝色曲线）孵育的CHO-K1细胞中内源性P2Y受体的ATP刺激的钙响应。将CHO-K1细胞在96孔黑壁/透明底板中以每100μL/孔50,000个细胞的细胞密度接种过夜。向细胞中加入100μL的5μg/ mL Cal-590 TM AM或具有2.5mM丙磺舒的Rhod-2AM，并将细胞在37℃下孵育1小时。ATP（50μL/孔）通过FlexStation^?加入（Molecular Devices）中，以达到最终的指定浓度。

图 4.CHO-K1细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。在Costar 96孔黑壁/透明底板中以每孔100μL40,000个细胞接种CHO-K1细胞过夜。100微升的4μM的校准- 590?AM（货号：20510）在HHBS用1mM丙磺舒加入到孔中，并且将细胞在37℃下温育2小时。将染料上样培养基替换为100μLHHBS和1mM丙磺舒，然后在添加50μL300μMATP之前和之后使用TRITC通道用荧光显微镜（Olympus IX71）成像。

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