来宝网 2015/3/11点击3160次
实现核酸、蛋白质的定量检测的方法目前有三种：
1、紫外分光法：
核酸、核苷酸及衍生物都具有共轭双键系统'' 能吸收紫外光'' RNA、DNA 的紫外吸收高峰在260 nm 波长处。一般在260 nm 波长下'' 每1 ml 含1 μg RNA 的溶液光吸收值为0.022 '' 每1 ml 含1 μg DNA 的溶液光吸收值约为0.020 '' 故测定未知浓度RNA 或DNA 溶液在260 nm 的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。此法操作简便、迅速。若样品内混有大量的核苷酸或蛋白质等能吸收紫外光的物质'' 则测定误差较大'' 故应该先除去。
推荐仪器：美卡希斯Mecasys超微量分光光度计
2、地衣酚显色法：
RNA 与浓盐酸共热时发生降解'' 产生的核糖又可转变为糖醛'' 在FaCl3 或CuCl2 催化下'' 糖醛与3 '' 5-二羟基甲苯( 地衣酚、苔黑酚)反应形成绿色复合物'' 该产物在670 nm 处有最大吸收。当RNA 浓度为20～250 μg/ ml 时光密度与RNA 浓度成正比。
3、二苯胺法：
DNA 分子中2-脱氧核糖残基在酸性溶液中加热降解'' 产生2-脱氧核糖并形成ω-羟基-γ-酮基戊醛'' 后者与二苯胺试剂反应生成蓝色化合物'' 其反应为：
蓝色化合物在595 nm 处有最大吸收峰'' 且DNA 在40～400 μg 范围内时'' 光密度与DNA 浓度呈正比。在反应液中加入少量乙醛'' 可以提高反应灵敏度。
★紫外分光光度法检测的仪器又叫：超微量紫外可见分光光度计，就是超微量分光光度计
美卡希斯Mecasys超微量分光光度计技术参数
波长：波长可调
样品最少检测量：0.5μL
光源：LED
检测器类型：硅光二极管
吸光度范围：0-150Abs
检出限：4ng/μL
最大检出浓度：7500ng/μL
重现性：3%（在1000ng/μL）
检测时间：＜5s
测量周期：＜10s
样品基座材料：303不锈钢和石英光纤
电压：12VDC
兼容软件：mecasys独立操作系统/安卓系统
尺寸：148（W）×179（D）×110（H）mm
重量：1.5kg
美卡希斯Mecasys超微量分光光度计仪器特性
QUICK
（1）真正的两个步骤：自动覆盖样品盖，无需检测空白
实现真正的两个步骤：滴定样&测定
（2）快速开机：标准LED光源，启动迅速，运行稳定
（3）无需选择光程：根据样品的浓度进行不同光程的扫描，实现样品的快速分析
（4）快捷键：可以灵活的切换仪器的各种工作模式
完美样品检测
（1）高清摄像头，可随时观察样品的位置和形状，防止其影响数据的准确性
（2）人性化加样支架，独家专利设计，保证加样过程中样品放置的准确性
节能环保
（1）使用低耗能的LED光源，待机模式智能调控，全面降低能源的消耗
EASY
（1）样品池：具有细胞培养（OD600）测量功能
（2）可连接多种设备：U盘/手机/（通过蓝牙连接）
/ 电脑（用于升级系统）
（3）独立操作：内置独立操作系统，无需外接电脑
4.3寸全彩色触摸屏，功能强大，
便于操作
（4）全自动样品盖：简化操作步骤
精确自动控制
