来宝网 2011/9/27点击1410次
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猪皮质醇猪皮质醇(Cortisol)ELISA(Cortisol)ELISA 快速检测试剂盒快速检测试剂盒
猪皮质醇猪皮质醇(Cortisol)(Cortisol)ELISAELISA 快速检测试剂盒快速检测试剂盒
使用说明书使用说明书
使用说明书使用说明书
本试剂盒仅供研究使用本试剂盒仅供研究使用
本试剂盒仅供研究使用本试剂盒仅供研究使用
产品编号产品编号：CSB-E06811p
产品编号产品编号
检测范围检测范围：：0.31 ng/ml -80 ng/ml
检测范围检测范围：：
最低检测限最低检测限：：0.2 ng/ml
最低检测限最低检测限：：
特异性特异性：：本试剂盒可同时检测天然或重组的猪皮质醇，且与其他相关蛋白基本
特异性特异性：：
无交叉反应。
有效期有效期：6 个月 （2-8℃避光保存）
有效期有效期
预期应用预期应用：：ELISA 法定量测定猪血清，血浆及其它相关生物液体中皮质醇的含
预期应用预期应用：：
量。
说明说明
说明说明
1. 浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
2. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验
结果造成任何影响。
实验原理实验原理
实验原理实验原理
采用竞争酶联免疫法法检测皮质醇含量。首先用羊抗兔包被微孔板，制备成
固相二抗，然后加入待测标本及辣根过氧化物酶标记的睾酮和抗睾酮抗体，使之
形成包被二抗-抗皮质醇抗体-酶标记皮质醇的复合物。经显色后在酶标仪测定吸
光值 （OD 值），通过计算机或作图拟合浓度-吸光度曲线，反算出待测标本中皮
质醇含量。
试剂盒组成及试剂配制试剂盒组成及试剂配制
试剂盒组成及试剂配制试剂盒组成及试剂配制
1. 酶联酶联板板(Assay plate )： 一块（96 孔）。
酶酶联联板板
2. 标准品标准品 （Standard）： 5×0.5ml/瓶。
标准品标准品
1
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标准品 S1 S 2 S3 S4 S5
浓度
0.31 1.25 5 20 80
(ng/ml)
3. 酶结合物酶结合物 （（HRP-conjugate）：） 1×6ml/瓶。
酶结合物酶结合物 （（ ））
4. 抗体抗体 （（Antibody ）：） 1×6ml/瓶
抗体抗体 （（ ））
5. 显色剂显色剂A （（Substrate A）：） 1×7ml/瓶。
显色剂显色剂 （（ ））
6. 显色剂显色剂B （（Substrate B）：） 1×7ml/瓶。
显色剂显色剂 （（ ））
7. 浓洗涤液浓洗涤液 （（Wash Buffer ）：） 1×15ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释20 倍。
浓洗涤液浓洗涤液 （（ ））
8. 终止液终止液 （（Stop Solution）：） 1×7ml/瓶
终止液终止液 （（ ））
需要而未提供的试剂和器材需要而未提供的试剂和器材
需要而未提供的试剂和器材需要而未提供的试剂和器材
1. 标准规格酶标仪
2. 高速离心机
3. 电热恒温培养箱
4. 干净的试管和Eppendof 管
5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器
6. 蒸馏水，容量瓶等
标本的采集及保存标本的采集及保存
标本的采集及保存标本的采集及保存
1. 血清：全血标本请于室温放置2 小时或4℃过夜后于 1000 x g 离心20 分钟，
取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：可用EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后30 分钟内于2 - 8° C 1000
x g 离心 15 分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：注：以上标本置以上标本置4℃保存应小于℃保存应小于 1 周，周，-20℃或℃或-80℃均应密封保存℃均应密封保存，，-20℃不应℃不应
注注：：以上标本置以上标本置 ℃℃保存应小于保存应小于 周周，， ℃℃或或 ℃℃均应密封保存均应密封保存，， ℃℃不应不应
超过超过 1 个月个月，，-80℃不应超过℃不应超过2 个月个月；标本溶血会影响最后检测结果；标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血，因此溶血
超过超过 个月个月，， ℃℃不应超过不应超过 个月个月；；标本溶血会影响最后检测结果标本溶血会影响最后检测结果，，因此溶血因此溶血
标本不宜进行此项检测标本不宜进行此项检测。。
标本不宜进行此项检测标本不宜进行此项检测。。
操作步骤操作步骤
操作步骤操作步骤
1. 将各种试剂至室温 〔18-25℃〕平衡半小时，取浓缩洗涤液，根据当批检测数
量，用蒸馏水上 1：20 稀释，混匀后备用。
2. 将酶标板取出，设一个空白对照孔、不加任何液体；每个标准点依次各设两
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孔，每孔加入相应标准品 50ul；其余每个检测孔直接加待测标本50ul。
3. 每孔加入酶结合物 50ul （空白对照孔除外），然后再各加入 50ul 抗体，充分
混匀，贴上不干胶封片，置37℃温育 1 小时。
4. 手工洗板，弃去孔内液体。洗涤液注满各孔，静置 10 秒甩干，重复三次后
拍干；洗板机洗板，选择洗涤三次程序，洗板后拍干。
5. 每孔加显色剂 A 液 50 μl，显色剂B 液 50 μl，振荡混匀后，37℃避光显色
15 分钟，每孔加终止液50 μl。
6. 用酶标仪读数，取波长450nm，先用空白孔调零点，然后测定各孔OD 值。
数据处理数据处理
数据处理数据处理
1. 手工作图：用双对数坐标纸，以标准品浓度为横轴，以对应的0D 值为纵轴，
画出平滑曲线或直线，在曲线上按照待测血清OD 值找到对应的浓度值。
2. 计算机：使用线性拟合功能，应将标准品S1-S5 的浓度取对数 （Log(浓度)）
作为X，将对应的OD 值减去空白对照孔 OD 值后取对数（Log(OD 值-NSB)）
作为Y，进行线性拟合。再从拟合线上计算出待测血清浓度。
注意事项注意事项
注意事项注意事项
1. 从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及所需预包被板条应置室温
（18-25℃）平衡30 分钟后方可使用，余者应及时封好口，放回2-8℃中避光保
存，以备后用。
2. 使用前试剂应摇匀。
3. 结果判断须在反应终止后 10 分钟内完成。
4. 不同批号的试剂不可混用。
5. 加样时应注意避免所用各试剂及样品之间的交又污染。
6. 操作时，试剂盒内每种试剂各使用一个吸头，每一种标准品使用一个吸头，
每一个样品各使用一个吸头，吸头最好一次性使用。
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