来宝网 2011/9/27点击1090次
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人白三烯人白三烯E4(LTE4)酶联免疫分析酶联免疫分析
人人白三烯白三烯 酶联免疫分析酶联免疫分析
试剂盒使用说明书试剂盒使用说明书
试剂盒使用说明书试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用本试剂盒仅供研究使用
本试剂盒仅供研究使用本试剂盒仅供研究使用
产品编号产品编号：：CSB-E05176h
产品编号产品编号：：
检测范围检测范围：：12.5 ng/ml - 800 ng/ml
检测范围检测范围：：
最低检测限最低检测限：：3 ng/ml
最低检测限最低检测限：：
特异性特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的： 人LTE4，且与其他相关蛋白无交叉反应。
特异性特异性：：
有效期有效期：：6 个月
有效期有效期：：
预期应用预期应用：：ELISA 法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中LTE4 含量。
预期应用预期应用：：
说明说明
说明说明
1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造
成任何影响。
实验原理实验原理
实验原理实验原理
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗LTE4 抗体的微孔中依次加入标本
或标准品、生物素化的抗LTE4 抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB 显
色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的
深浅和样品中的LTE4 呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度 （OD 值），计算样
品浓度。
试剂盒试剂盒组成及试剂配制组成及试剂配制
试剂盒试剂盒组成及试剂配制组成及试剂配制
1. 酶联板酶联板(Assay plate )：一块（96 孔）。
酶联板酶联板
2. 标准品标准品 （Standard）：2 瓶(冻干品)。
标准品标准品
3. 样品稀释液样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。
样品稀释液样品稀释液
4. 生物素标记抗体稀释液生物素标记抗体稀释液（（Biotin-antibody Diluent）：）1×10ml/瓶。
生物素标记抗体稀释液生物素标记抗体稀释液（（ ））
5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （（HRP-avidin Diluent）：）1×10ml/瓶。
辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （（ ））
6. 生物素标记抗体生物素标记抗体（（Biotin-antibody）：）1×120μl/瓶（1：100）
生物素标记抗体生物素标记抗体（（ ））
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素辣根过氧化物酶标记亲和素 （（HRP-avidin）：）1×120μl/瓶（1：100）
辣根过氧化物酶标记亲和素辣根过氧化物酶标记亲和素 （（ ））
8. 底物溶液底物溶液 （（TMB Substrate）：）1×10ml/瓶。
底物溶液底物溶液 （（ ））
9. 浓洗涤液浓洗涤液 （（Wash Buffer）：）1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25 倍。
浓洗涤液浓洗涤液 （（ ））
10. 终止液终止液（（Stop Solution）：）1×10ml/瓶（2N H SO4）。
终止液终止液（（ ）） 2
需要而未提供的试剂和器材需要而未提供的试剂和器材
需要而未提供的试剂和器材需要而未提供的试剂和器材
1. 标准规格酶标仪
2. 高速离心机
3. 电热恒温培养箱
4. 干净的试管和Eppendof 管
5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器
6. 蒸馏水，容量瓶等
标本的采集及保存标本的采集及保存
标本的采集及保存标本的采集及保存
1. 血清：全血标本请于室温放置2 小时或4℃过夜后于1000g 离心20 分钟，取上清即可
检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
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2. 血浆：可用EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后30 分钟内于2 - 8°C 1000 g 离心15
分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000g 离心20 分钟，取上清即可检测，或将标本放
于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：注：标本溶血会影响最后检测结果标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测，因此溶血标本不宜进行此项检测。。
注注：：标本溶血会影响最后检测结果标本溶血会影响最后检测结果，，因此溶血标本不宜进行此项检测因此溶血标本不宜进行此项检测。。
标本的稀释原则标本的稀释原则：：
标本的稀释原则标本的稀释原则：：
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准
曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度
时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。
标准品的稀释原则标准品的稀释原则：：2 瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10 分钟以上，
标准品的稀释原则标准品的稀释原则：：
然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为800 ng/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释800 ng/ml，
400 ng/ml，200 ng/ml，100 ng/ml，50 ng/ml，25 ng/ml，12.5 ng/ml，样品稀释液直接作为标
准浓度0 ng/ml，临用前15 分钟内配制。
如配制400 ng/ml 标准品：取0.5ml （不要少于0.5ml）800 ng/ml 的上述标准品加入含0.5ml
样品稀释液的Eppendorf 管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
生物素标记抗体生物素标记抗体的稀释原则的稀释原则：：
生物素标记抗体生物素标记抗体的稀释原则的稀释原则：：
临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制
（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl 生物素标记抗体加990μl 生物素标
记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则的稀释原则：：
辣根过氧化物酶标记亲和素辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则的稀释原则：：
临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的
总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl 辣根过氧化物酶标记亲和
素加990μl 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内
配制。
操作步骤操作步骤
操作步骤操作步骤
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。
每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试
剂盒的检测范围。
1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加
标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触
及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120 分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl （取1μl 生物素标记
抗体加99μl 生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），
37℃,60 分钟。
3. 温育60 分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3 次，每次浸泡1-2 分钟，200μl/每孔，甩
干。
4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液 （同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，
60 分钟。
5. 温育60 分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5 次，每次浸泡1-2 分钟，200μl/每孔，甩
干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色 （（30 分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4
（（
孔有明显的梯度蓝色，后3-4 孔显色不明显，即可终止）。
7. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量
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与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入
终止液。
8. 用酶联仪在450nm 波长依序测量各孔的光密度 （OD 值）。 在加终止液后15 分钟以内
进行检测。
注：注
注注
1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2N H SO4。
2
测量时先用此孔调OD 值至零。
3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
4. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过
氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准
品、生物素标记抗体工作液、或辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
洗板方法洗板方法
洗板方法洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，
酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml 注入孔内，浸泡1-2 分钟。根据需
要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算计算
计算计算
以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD 值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘
出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物
的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样
品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项注意事项
注意事项注意事项
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3. 一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。
6. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
7. 底物请避光保存。
8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
厦门慧嘉生物经营ELISA试剂盒及抗体、细胞因子、生化试剂、耗材等生物试剂产品。诚信经营，价格实惠，服务周到，质量有保证。咨询电话:18906011628 0592-6020891 QQ:1048735792 http://www.biohj.com/download.aspx(说明书下载网站) 该说明书是PDF格式转化的，固排版有所变化， 欢迎老师QQ或电话或邮箱索取原版说明书
