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人雄烯二酮(A2)ELISA试剂盒说明书

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称：

通用名：人雄烯二酮(A2)酶联免疫分析试剂盒

英文名：Human  A2  ELISA  Kit

使用目的：

本试剂盒用于测定人血清、血浆、或相关组织液中雄烯二酮(A2)的含量。

实验原理

本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中人雄烯二酮(A2)水平。用纯化的人雄烯二酮(A2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入雄烯二酮(A2)，和HRP标记的羊抗人抗原，使它们竞争结合，，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。样本颜色的深浅和样品中的雄烯二酮(A2)的含量呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人雄烯二酮(A2)的含量。

试剂盒组成

标本处理及要求

1．血清、血浆标本可直接测定；

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

3．采集后尽早进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

操作步骤

1.         标准品的稀释与加样：在酶标包被板上按序设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；再各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后，在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉；再各取50μl分别加到第五、第六孔中；再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中；再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中；再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（ 稀释后各孔加样量都为50μl，浓 度分别为 12          μg /L，8μg /L ，4μg /L，2μg /L，1μg /L）。

2.         加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，轻轻晃动混匀。

3.         加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

4.         温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。  

5.         配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

6.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

7.         显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

8.         终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

9.         测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算

  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔OD值的），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5． 严格按说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

6．本试剂不同批号组分不得混用。

7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．底物请避光保存。

检测范围：

0.8μg /L -15μg /L

规格：

48人份/盒

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月

厦门慧嘉生物科技有限公司专业代理众多国际生命科学领域的知名品牌。致力于各种ELISA试剂盒、免疫组化试剂盒、一抗二抗、细胞因子、生物试剂、移液器、耗材的销售推广及服务工作。
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