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小鼠钩端螺旋体IgG ELISA试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称：

通用名：小鼠钩端螺旋体IgG酶联免疫分析试剂盒

使用目的：

本试剂盒定性测定小鼠血液、或其它相关组织中钩端螺旋体IgG

实验原理：

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中小鼠钩端螺旋体IgG。用纯化的小鼠钩端螺旋体IgG抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中小鼠钩端螺旋体IgG相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中小鼠钩端螺旋体IgG的存在与否。

试剂盒组成：

标本处理及要求：

1．标本处理：（1）血清或血浆：可直接用于检测

            （2）细胞培养物：移去细胞培养液，收集培养瓶中的细胞加入离心管中。

2500转/分离心5分钟，弃上清。向细胞团中加入500μl生理盐水，室温孵育1小时（期间不时旋涡混合）后待测。

2．标本要求：不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤：

1.         编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2.         加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照（标准品）50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3.         温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

4.         配液：将20倍浓缩洗涤液加蒸馏水至1000ml后备用

5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶标试剂50μl(或一滴)，空白孔除外。

7.         温育：操作同3。

8.         洗涤：操作同5。

9.         显色：每孔先加入显色剂A 50μl(或一滴)，再加入显色剂B 50μl(或一滴)，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟

10.     终止：每孔加终止液50μl(或一滴)，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.     测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

结果判定：

  试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.15

 临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.20

 阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为小鼠钩端螺旋体IgG阴性

 阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为小鼠钩端螺旋体IgG阳性

注意事项

1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物请避光保存。

6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm

7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。

8. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准..

规格：

     96人份/盒

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月

厦门慧嘉生物科技有限公司专业代理众多国际生命科学领域的知名品牌。致力于各种ELISA试剂盒、免疫组化试剂盒、一抗二抗、细胞因子、生物试剂、移液器、耗材的销售推广及服务工作。
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