来宝网 2010/4/25点击1397次
鸡孕酮(PROG)ELISA试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用
检测范围:0.2 ng/ml-100 ng/ml
最低检测限:0.1 ng/ml
特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的PROG,且与其他相关蛋白基本无交叉反应。
有效期:6个月(2-8℃避光保存)
预期应用:ELISA法定量测定鸡血清,血浆及其它相关生物液体中PROG含量。
说明
1. 浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
2. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
实验原理
采用竞争酶联免疫法法检测PROG含量。首先用一株单抗体包被微孔板,制备成固相抗体,然后加入待测标本或标准品,辣根过氧化物酶标记的PROG以及抗PROG抗体,使之形成包被抗体-抗PROG抗体-PROG(HRP)复合物。经显色后在酶标仪测定吸光值(OD值),通过计算机或作图拟合浓度-吸光度曲线,反算出待测标本中PROG含量。
试剂盒组成及试剂配制
1. 酶联板(Assay plate ): 一块(96孔)。
2. 标准品(Standard): 5瓶(冻干品)。
标准品为冻干品,使用前分别用0.5ml蒸馏水溶解,溶解后浓度分别为:
Standard 1 |
Standard 2 |
Standard 3 |
Standard 4 |
Standard 4 |
0.2 ng/ml |
1ng/ml |
5 ng/ml |
20 ng/ml |
100 ng/ml |
4. 酶结合物(HRP-conjugate): 1×6ml/瓶。
5. 显色剂A(Substrate A): 1×7ml/瓶。
6. 显色剂B(Substrate B): 1×7ml/瓶。
7. 浓洗涤液(Wash Buffer): 1×15ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。
8. 终止液(Stop Solution): 1×7ml/瓶
需要而未提供的试剂和器材
1. 标准规格酶标仪
2. 高速离心机
3. 电热恒温培养箱
4. 干净的试管和Eppendof管
5. 系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器
6. 蒸馏水,容量瓶等
标本的采集及保存
1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或
2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于
注:以上标本置4℃保存应小于1周,-20℃或-80℃均应密封保存,-20℃不应超过1个月,-80℃不应超过2个月;标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
操作步骤
1. 将各种试剂至室温〔18-25℃〕平衡半小时,取浓缩洗涤液,根据当批检测数量,用蒸馏水上1:20稀释,混匀后备用。
2. 标准品Standard 1- Standard 5,第一次使用前先用0.5ml蒸馏水溶解,放置混匀后使用。
3. 将酶标板取出,设一个空白对照孔、不加任何液体;每个标准点依次各设两孔,每孔加入相应标准品50ul;其余每个检测孔直接加待测标本50ul。
4. 每孔加入酶结合物50ul(空白对照孔除外),再各加入抗体50 ul,充分混匀,贴上不干胶封片,置37℃温育1小时。
5. 手工洗板,弃去孔内液体。洗涤液注满各孔,静置10秒甩干,重复三次后拍干;洗板机洗板,选择洗涤三次程序,洗板后拍干。
6. 每孔加显色剂A液50μl,显色剂B液50μl,振荡混匀后,37℃避光显色15分钟,每孔加终止液50μl。
7. 用酶标仪读数,取波长450nm,先用空白孔调零点,然后测定各孔OD值。
数据处理
1. 手工作图:用双对数坐标纸,以标准品浓度为横轴,以对应的0D值为纵轴,画出平滑曲线或直线,在曲线上按照待测血清OD值找到对应的浓度值。
2. 计算机:使用线性拟合功能,应将标准品S1-S5 推荐仪器