来宝网 2010/3/30点击1968次
小鼠雌二醇（E2）ELISA试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用
特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的雌二醇，且与其他相关物质基本无交叉反应。
有效期：6个月（2-8℃避光保存）
预期应用：ELISA法定量测定小鼠血清，血浆及其它相关生物液体中雌二醇含量。
说明
1. 浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
2. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理
采用竞争酶联免疫法法检测雌二醇含量。首先用羊抗兔包被微孔板，制备成固相二抗，然后加入待测标本、辣根过氧化物酶标记的雌二醇以及抗雌二醇抗体，使之形成包被二抗-抗雌二醇抗体-雌二醇（HRP）复合物。经显色后在酶标仪测定吸光值（OD值），通过计算机或作图拟合浓度-吸光度曲线，反算出待测标本中雌二醇含量。
试剂盒组成及试剂配制
1. 酶联板(Assay plate )： 一块（96孔）。
2. 标准品（Standard）： 5瓶（冻干品）。
标准品为冻干品，使用前分别用0.5ml蒸馏水溶解，溶解后浓度分别为：
|
标准品 |
S1 |
S2 |
S3 |
S4 |
S5 |
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浓度 (pg/ml) |
20pg/ml |
80pg/ml |
200pg/ml |
550pg/ml |
1000pg/ml |
3. 酶结合物（HRP-conjugate）： 1×6ml/瓶。
4. 抗体（Antibody）： 1×6ml/瓶。
5. 显色剂A（Substrate A）： 1×7ml/瓶。
6. 显色剂B（Substrate B）： 1×7ml/瓶。
7. 浓洗涤液（Wash Buffer）： 1×15ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。
8. 终止液（Stop Solution）： 1×7ml/瓶
需要而未提供的试剂和器材
1. 标准规格酶标仪
2. 高速离心机
3. 电热恒温培养箱
4. 干净的试管和Eppendof管
5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器
6. 蒸馏水，容量瓶等
标本的采集及保存
1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或
2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2个月；标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
操作步骤
1. 将各种试剂至室温〔18-25℃〕平衡半小时，取浓缩洗涤液，根据当批检测数量，用蒸馏水上1：20稀释，混匀后备用。
2. 标准品Standard 1- Standard 5，第一次使用前先用0.5ml蒸馏水溶解，放置混匀后使用。
3. 将酶标板取出，设一个空白对照孔、不加任何液体；每个标准点依次各设两孔，每孔加入相应标准品50ul；其余每个检测孔直接加待测标本50ul。
4. 每孔加入酶结合物50ul（空白对照孔除外），再按同样顺序每孔加入抗体50ul，充分混匀，贴上不干胶封片，置37℃温育2小时。
5. 手工洗板，弃去孔内液体。洗涤液注满各孔，静置10秒甩干，重复三次后拍干；洗板机洗板，选择洗涤三次程序，洗板后拍干。
6. 每孔加显色剂A液50μl，显色剂B液50μl，振荡混匀后，37℃避光显色15分钟，每孔加终止液50μl。
7. 用酶标仪读数，取波长450nm，先用空白孔调零点，然后测定各孔OD值。
数据处理
1. 手工作图：用双对数坐标纸，以标准品浓度为横轴，以对应的0D值为纵轴，画出平滑曲线或直线，在曲线上按照待测血清OD值找到对应的浓度值。
2. 计算机：使用线性拟合功能，应将标准品S1-S5的浓度取对数（Log(浓度) 推荐仪器
