来宝网 2009/10/13点击2465次
弓形虫抗体IgG(TOX Ab-IgG)检测
[测定方法] ELISA法
[方法学原理] 在微孔表面包被纯化的弓形体抗原。被稀释过的患者血清加入微孔中。如存在弓形虫抗体IgG可与微孔上抗原相结合。然后洗去未结合物质，再加入酶联液，与抗原抗体复合物结合、洗去过量的酶联液。最后加入底物和色原(显色液)。在特定时间终止酶联液的催化反应。所产生的颜色强度与标本中弓形虫抗体IgG含量呈正相关。通过酶标仪与校正和对照相比，读出结果。
[标本准备] 静脉抽血2ml，不抗凝。
[试剂]
1．微孔板
2．样品稀释液
3．HRP-抗人IgG酶结合物
4．阴性对照
5．阳性对照
6．洗涤剂
7．TMB显色液
[仪器设备] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。
[测定步骤)
1．吸取5ul血清标本加入250t．tl标本稀释液中，做1：51稀释。
2．吸取100gl稀释过的血清、阳性对照、阴性对照和校正液(不稀释)，加入微孔板内，设空白对照1孔。振荡，混匀，去除孔内液体中气泡，室温环境中孵育20min。
3．弃去孔内液体，用洗涤液洗5次。
4．每孔再加入100~1酶联结合物，室温环境中孵育20min。
5．弃去孔中酶联液，用洗涤液洗5次。
6．每孔加入100gl TMB显色液，室温环境中孵育10min。
7．每孔加100ul终止液，终止反应，充分混匀。
8．用酶标仪(波长为450nm)读取吸光度。以待测样本吸光度大于校正液孔吸光度为阳性。
[注意事项]
1．整个检测过程应符合实验室质量手册和生物安全守则规定，严防交叉污染。
2．所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。
3．试剂应保存于2～
4．洗涤时各孔均应加满洗涤液，防止孔内有游离酶未洗净，每次洗板后均应在吸水纸上扣干。
5．血标本应分离出血清保存，2—
6．试剂在储存或使用过程中，禁止过热、曝晒或强光。
[正常参考值] TOXAb-IgG阴性
[临床意义] 弓形虫孕妇感染率为3％～5％，可引起胎儿先天性感染。妊娠期感染者可出现虫血症，弓形虫速殖子(滋养体)经胎盘感染胎儿，即垂直传播。一般在妊娠早期宫内感染概率为10％一25％，可导致流产、死胎或早产以及胎儿严重感染；妊娠中期和妊娠后期宫内感染概率为30％～60％，其中约10％可致多种先天性缺陷，而以脑和眼损害为多见，如小头畸形、大脑发育障碍、脑积水、视神经炎、视神经萎缩、眼组织缺损等。重症者新生儿期即可诊断，轻型无症状者在青春期后出现脉络膜视网膜炎、斜视、失明、精神障碍或弱智等。获得性感染即后天感染主要传播途径为经消化道及损伤的皮肤、黏膜以及输血和器官移植等，仅约10％的患者出现症状，可有无痛性淋巴结肿大、发热、咽痛、肌痛或腹痛，也可出现肺炎、心肌炎、多发性肌炎、眼结膜炎、脑膜脑炎等。
TOXAb—IgM用于弓形虫急性感染的诊断，弓形虫IgG用于弓形虫既往感染的诊断，双份血清IgG抗体滴度4倍以上增高或单份血清IgG抗体滴度≥1：512，近期感染可能性大。
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