来宝网 2009/10/12点击2137次
风疹病毒抗体IgG(RUVAb-IgG)检测
[测定方法] ELISA法
[方法学原理] 在微孔表面包被纯化的风疹病毒抗原。被稀释过的患者血清加入微孔中。如存在风疹病毒抗体IgG可与微孔上抗原相结合。然后洗去未结合物质，再加入酶联液，与抗原抗体复合物结合。洗去过量的酶联液。最后加入底物和色原(显色液)。在特定时间终止酶联液的催化反应。所产生的颜色强度与标本中风疹病毒抗体IgG含量呈正相关。通过酶标仪与校正和对照相比，读出结果。
[标本准备] 静脉抽血2ml，不抗凝。
[试剂]
1．微孔板
2．样品稀释液
3．HRP-抗人IgG酶结合物
4．阴性对照
5．阳性对照
6．洗涤剂
7．TMB显色液
[仪器设备] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。
(测定步骤)
1．吸取5ul血清标本加入250u1标本稀释液中，做1：51稀释。
2．吸取100ul稀释过的血清、阳性对照、阴性对照和校正液(不稀释)，加入微孔板内，设空白对照1孔。振荡，混匀，去除孔内液体中气泡，室温环境中孵育20min。
3．弃去孔内液体，用洗涤液洗5次。
4．每孔再加入100t~l酶联结合物，室温环境中孵育20min。
5．弃去孔中酶联液，用洗涤液洗5次。
6．每孔加入100u1 TMB显色液，室温环境中孵育10min。
7．每孔加入100ul终止液，终止反应，充分混匀。
8．用酶标仪(波长为450nm)读取吸光度。以待测样本吸光度大于校正液孔吸光度为阳性。
[注意事项]
1．整个检测过程应符合实验室质量手册和生物安全守则规定，严防交叉污染。
2．所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。
3．试剂应保存于2—
4．洗涤时各孔均应加满洗涤液，防止孔内有游离酶未洗净，每次洗板后均应在吸水纸上拍干。
5．血标本应分离出血清保存，2～
6．试剂在储存或使用过程中，禁止过热、曝晒或强光。
[正常参考值] RUV Ab-IgG阴性
[临床意义] 风疹病毒为呼吸道传播，人类普遍易感，育龄期妇女风疹抗体阴性率各地报道不一，为0～12．4％。
一般认为它主要引起青少年轻度发病，约70％为显性感染，表现为斑丘疹、发热、淋巴结肿大、白细胞升高，为自限性疾病。但母体感染，可通过胎盘传给胎儿，引起先天性风疹病毒感染，此病可诱发胎儿发生慢性心脏病、生长迟缓、肝脾大、畸形和其他异常症状。若为CRS患儿，则病死率较高，尤其是出生
后头几个月，出生1年内死亡者可达10％～20％。婴儿出生可无症状，也可在以后发育中出现异常。精确的血清学方法检测育龄妇女血清状态对于减少此类并发症具有重要意义。若血液中存在风疹病毒抗体，可抵抗此种病毒感染；缺乏此类抗体，可通过接种疫苗而获得。抗体效价升高，说明是急性风疹病毒感染，并有助于与其他疱疹病毒区别。风疹病毒感染的孕妇应留意可导致胎儿先天性感染的危险。
RUV Ab-IgM抗体在疹后5—14d阳性率最高，此后检出率下降，有报道最晚疹后66d仍阳性。患先天性风疹综合征患儿IgM抗体阳性持续时间更长，持续1年者占50％，持续1～2年者占5％～10％。IgM抗体阳性，表示患者近期感染。因此，测定血清中风疹IgM抗体，对于风疹早期诊断以及决定患风疹的孕妇是否需要终止妊娠非常重要。须注意的是，风疹再感染者虽少数能查到IgM抗体，但滴度低，持续时间短；风疹病毒活疫苗接种后，绝大多数也能测出IgM抗体。
风疹患者测出RUV Ab—IgM抗体的同时，几乎均可检出RUVAb—IgG抗体，并持续升高，1～2个月内仍有所上升，以后逐渐下降，·4～12个月降低至基线水平，抗体持续时间可达数年至数十年，甚至终身。恢复期血清比急性期血清的抗体滴度有4倍或4倍以上升高，可作出近期风疹感染的诊断。测定风疹IgG抗体，可以了解人群风疹隐性感染水平和考核疫苗的免疫效果。
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