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巨细胞病毒抗体IgG(CMVAb-IgG)检测

    [测定方法]  ELISA法

    [方法学原理]  在微孔表面包被纯化的巨细胞病毒抗原。被稀释过的患者血清加入微孔中。如存在巨细胞病毒抗体-IgG可与微孔上抗原相结合。然后洗去未结合物质，再加入酶联液，与抗原抗体复合物结合。洗去过量的酶联液。最后加入底物和色原(显色液)。在特定时间终止酶联液的催化反应。所产生的颜色强度与标本中巨细胞病毒抗体-IgG含量呈正相关。通过酶标仪与校正和对照相比，读出结果。

    [标本准备]  静脉抽血2ml，不抗凝。

    [试剂]

    1．微孔板

    2．样品稀释液

    3．HRP-抗人IgG酶结合物

    4．阴性对照

    5．阳性对照

    6．洗涤剂

    7．TMB显色液

    8．终止液

    [仪器设备]  酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。

    [测定步骤]

    1．吸取5u1血清标本加入250gl标本稀释液中，做1：51稀释。

    2。吸取l00ull稀释过的血清、阳性对照、阴性对照和校正液(不稀释)，加人微孔板内，设空白对照l孔。振荡，混匀，去除孔内液体中气泡，室温环境中孵育20min。

    3，弃去孔内液体，用洗涤液洗5次。

    4。每孔再加入100gl酶联结合物，室温环境中孵育20min。

    5。弃去孔中酶联液，用洗涤液洗5次。

    6，每孔加入100ul TMB显色液，室温环境中孵育10min。

    ?。每孔加入100ul终止液，终止反应，充分混匀。

    8。用酶标仪(波长为450nm)读取吸光度。以待测样本吸光度大于校正液孔吸光度为阳性。

    [注意事项]

    1．整个检测过程应符合实验室质量手册和生物安全守则规定，严防交叉污染。

    2．所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。

    3．试剂应保存于2～8℃冰箱，使用前应在室温环境中平衡30min。

    4．洗涤时各孔均应加满洗涤液，防止孔内有游离酶未洗净，每次洗板后均应在吸水纸上拍干。

    5．血标本应分离出血清保存，2～8℃可保存?d，冷冻保存可至6个月，避免反复冻融。

    6．试剂在储存或使用过程中，禁止过热、曝晒或强光。   

    [正常参考值]  CMVAb—IgG阴性

    [临床意义]  巨细胞病毒可引起先天性和后天性多种感染。原发性感染可引起肝炎、传染性单核细胞增多症或输血后综合征。宫内感染则是由于孕妇体内的CMV通过胎盘使胎儿在宫内受染所致，是人巨细胞病毒感染的重要途径之一。受染胎儿多数为隐性感染，但有时后果较为严重，尤其是在怀孕早期，更易造成胎儿损害。出现小头畸形、肢体畸形、先天性心脏病、斜眼、失明、流产、死胎、早产等。

    CMVAb—IgM阳性表明新近存在CMV感染，对于婴幼儿患者可用于早期诊断。由于孕妇外周血IgM型抗体不能通过胎盘屏障，所以若新生儿脐血CMVAb—IgM检测阳性则可诊断CMV宫内感染(采集脐血标本时应注意避免母血污染)。婴幼儿外周仅血清单—CMV Ab-IgM检测阳性者，应连续随访6～12个月，观察其滴度是否有显著意义的升高。成人人群中CMV Ab-IgG检出率很高，CMVAb-IgG仅用于成人流行病学调查。

    另外，少部分患者再次感染巨细胞病毒时，可再次出现CMVAb-IgM阳性。特别是器官移植患者再次发生CMV感染时，CMVAb-IgM重新出现阳性的比例非常高。

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