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EB病毒抗体IgM(EBVAb-IgM)检测

    EB病毒(epstein-barr virus，EBV)属疱疹病毒科，有学者提出此病毒为第1个人类肿瘤病毒的候选者。EBV直径为90～180nm，为20面体核衣壳，有162个衣壳体，含有1个蛋白核心和DNA分子，病毒基因组为线性双链DNA。原发性感染发生在幼儿时，多为隐性感染，此后终身带病毒；若原发感染发生在青春期后，则相当一部分为显性感染。EBV感染患者后可出现传染性单核细胞增多症、X—连锁淋巴增殖综合征，以及与EBV相关的恶性疾病如鼻咽癌、霍奇金淋巴瘤等。

    [测定方法]  ELISA法

    [方法学原理]  将纯化的EB病毒抗原预包被于微孔板上，加入稀释过的患者血清于相应微孔板中，若存在EBVAb-IgM则可与微孔板上包被抗原相结合。洗去未结合部分后，再加入酶联结合物，与抗原抗体复合物结合，在显色剂作用下发生显色反应，颜色强度与样本中EBVAb-IgM含量呈正相关。

    [标本准备]  静脉抽血2ml，不抗凝。

    [试剂]

    微孔板

    样品稀释液

    HRP-抗人IgM酶结合物

    阴性对照

    阳性对照

    洗涤剂

    TMB显色液

    终止液

    [仪器设备] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。

    [测定步骤]

    1．将待检血清编号，用样品稀释液作1；100稀释。

    2．根据用量取出相应孔数的微孔板条，其余部分密封后4℃环境中保存。

    3．加人已稀释的待检血清、阴性对照，阳性对照各lOOgI至反应孔内，阴性对照、阳性对照设复孔，设空白对照1孔(空白孔不加任何试剂)，振荡混匀，37℃环境中温育1h。

    4．弃去孔中液体，用洗涤液洗涤5次，拍干。   

    5．每孔加入酶标记物lOOtA，混匀，37℃环境中水浴1h。

    6．弃去孔中液体，用洗涤液洗涤5次，拍干。

    7．向每孔加入底物A液和底物B液各2滴，置室温环境中10min，每孔再加终止液50gl终止反应。

    8．以空白对照(只加蒸馏水200g1)校零，在波长450nm处读取各孔的OD值，凡样品孔OD大于或等于阴性对照孔2倍，该样品即为阳性。

    [正常参考值]  EBVAb-IgM阴性

    [注意事项]

    1．使用前试剂盒应预先在室温环境中平衡30min。

    2．试剂盒在2—8℃避光保存，启用后应尽快用完。

    3．不同批次的试剂组分不能混用。

    4．实验后试剂、血清标本均应视为有传染性物质。

    5．用滴瓶滴加时，滴瓶应垂直，用力和速度应均匀；加样后，充分混匀。

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