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柯萨奇病毒抗体IgM(CXV Ab-IgM)检测

    柯萨奇病毒(coxsackie virus，CXV)属微小核糖核酸病毒科的肠道病毒属。病毒颗粒为球形或卵圆形，直径22～30nm，基因组为单股线性RNA，构成病毒核心。患者和健康带毒者是柯萨奇病毒的主要传染源，粪口途径是主要传播途径。该病毒经胃肠道或鼻咽部侵人人体后，可导致上呼吸道感染、疱疹性咽炎、肺炎、脑膜炎、肝炎、皮疹、腹泻、普通感冒、淋巴结炎、心包炎、心肌炎、流行性肌痛及瘫痪性疾患等。妊娠妇女感染可致多种胎儿畸形。柯萨奇病毒的实验室诊断主要是其相应抗体检测。

    [测定方法]  ELISA法

    [方法学原理]  将纯化的柯萨奇病毒抗原预包被于微孔板上，若待测样本中存在CXVAb—IgM，可与微孔板上抗原相结合。再加人酶联试剂与抗原抗体复合物结合，在显色剂作用下发生显色反应，颜色的深浅与样本中抗体含量呈正相关。

    [标本准备)  静脉抽血2ml，不抗凝。

    [试剂]

    1．微孔板

    2．样品稀释液

    3．酶联试剂

    4．阴性对照

    5．阳性对照

    6．洗涤剂

    7．TMB显色液

    8．终止液

    [仪器设备] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。

    [测定步骤]

    1．取标本稀释液100ul，加入反应孔内(阴性对照、阳性对照直接加入100gl对照血清)，将待检血清用PBS或生理盐水进行1：20稀释后取10gl加入反应孑L内，置37℃环境中反应20min。

    2．用洗板机洗涤5次，拍干。

    3．每孔加入100gl酶结合物，置37℃环境中反应20rain。

    4．洗板5次，拍干。

    5．将底物A、B各50u1加入反应孔内，置避光显色10min。

    6．每孔加入终止液50gl，混匀终止反应。

    7．空白对照孔调零，用450nm波长检测各孔OD值。临界值(cut off)：0．2十阴性对照平均OD值(阴性对照<0．05按0．05计算)。检测标本OD值<临界值时，检测结果为阴性；检测标本值≥临界值时，检测结果为阳性。

    [正常参考值)  CXVAb—IgM阴性

    [注意事项]

    1．使用前试剂盒应预先在室温环境中平衡30min。

    2．试剂盒在2～8℃避光保存，启用后应尽快用完。

    3．不同批次的试剂组分不能混用。

    4．实验后试剂、血清标本均应视为有传染性物质。

    5．用滴瓶滴加时，滴瓶应垂直，用力和速度应均匀，加样后充分混匀。

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