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柯萨奇病毒抗体IgG(CXV Ab-IgG)检测

    [测定方法]  ELISA法

    [方法学原理]  在微孔板上预包被纯化的柯萨奇病毒抗原，样本中的CXVAb-IgG可与微孔板上抗原结合，加入酶标抗体后，与抗原抗体复合物结合，在显色剂作用下显色，颜色的深浅与样本中抗体含量呈正相关。

    [标本准备]  静脉抽血2ml，不抗凝。

    [试剂]

    1．微孔板

    2．样品稀释液

    3．酶联试剂

    4．阴性对照

    5．阳性对照

    6．洗涤剂

    7．TMB显色液

    8．终止液

    [仪器设备] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。

    [测定步骤]

    1．取标本稀释液100yl，加入反应孔内(阴性对照、阳性对照直接加入100ul对照血清)，待检血清各取10ul加入反应孔内，置37℃环境中反应20min。

    2．用洗板机洗涤5次，拍干。

    3．每孔加入100tA酶结合物，置37℃环境中反应20min。

    4．洗板5次，拍干。

    5．将底物A、B各50u1加入反应孔内，置避光显色lOmin。

    6．每孔加入终止液50rtl，混匀终止反应。

    7．空白对照孔调零，用450nm波长检测各孔 OD值，取临界值(cut off)＝0．10+阴性对照平均OD值(阴性对照<0．05按o．05计算)。检测标本OD值<临界值时，检测结果为阴性；标本检测值≥临界值时，检测结果为阳性。

    [正常参考值]  CXVAb-IgG阴性

    [注意事项]

    1．使用前试剂盒应预先在室温环境中平衡30min。

    2．试剂盒在2～8C避光保存，启用后应尽快用完。

    3．不同批次的试剂组分不能混用。

    4．实验后试剂、血清标本均应视为有传染性物质。   

    5．用滴瓶滴加时，滴瓶应垂直，用力和速度应均匀，加样后充分混匀。

    [临床意义]  柯萨奇病毒特异性抗体IgM出现早，消失也快，该抗体阳性提示现症感染，有早期诊断价值。柯萨奇病毒特异性IgG为中和抗体，阳性提示既往感染，但检测患者急性期及恢复期双份血清抗体效价升高4倍有诊断意义。

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