来宝网 2009/9/29点击1620次
ELISA法检测肺炎支原体
肺炎支原体可引起支原体肺炎，曾被称为“非典型肺炎”。支原体肺炎通常起病缓慢，病情严重，体征轻微，肺炎常为间质性。此外，肺炎支原体与人脑组织有共同抗原，故亦可引起中枢神经系统症状。临床上一般通过检查肺炎支原体抗体IgG、IgM诊断支原体肺炎。
(一)肺炎支原体抗体IgG检测
[检测方法] ELISA法
[方法学原理] 在微孔反应板上包被纯化的肺炎支原体抗原，加入待测标本孵育后，使之发生反应，然后去除未结合的抗体，加人结合有过氧化物酶的抗人IgG抗体，使之与已结合的抗体反应，结合的过氧化物酶与发色底物发生反应产生颜色。最后，终止底物反应，在酶标仪上读出吸光度值。
[标本准备] 取新鲜末梢血或静脉血。如采血后24h内不能进行试验，分离血清后将其保存于一
[试剂]
1．预包被微孔板
2．阳性对照
3．弱阳性对照
4．阴性对照
5．标本稀释液
6．浓缩酶联物
7．底物A、B
8．终止液
[仪器] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪
[检测步骤]
1．配制洗涤液 1瓶浓缩洗涤液加475ml蒸馏水。配好的洗涤液短期内可置室温环境中，长期可存于2～
2．配制酶联物 按1：101倍稀释，取10gl浓缩酶联物，加酶联物稀释液1 000ul(根据检测标本数量确定稀释量)，未用完的丢弃。
3．待试剂盒平衡至室温后，待测标本用标本稀释液按1：201稀释，即取1P1血清与200gl标本稀释液混合。
4．各加100gl阳性、弱阳性、阴性对照及已稀释待测标本上清液于相应孔中，空白对照孔加100~I标本稀释液，盖好反应板，
5．甩尽板中液体，每孔用200—300ul洗涤液洗5次，每次均需拍干。
6．每孔加酶联物100ul，盖好反应板，
7．甩尽板中液体，洗5次，每次拍干。
8．加底物A、B各1滴或各50gl，混匀，
9．取出，加终止液1滴，用酶标仪450nm测其OD值，若肉眼观察则不加终止液。
[结果判断]
1．阴性对照平均OD值须小于0．20。
2．弱阳性对照平均OD值须在0．20～0.65
3．弱阳性对照和阴性对照的平均OD值之比须≥2。符合以上3个条件时本试验结果可信，否则重复试验。
4．若待测标本孔显色比弱阳性对照孔深，则判为阳性，反之为阴性。但若在弱阳性对照值上下10％范围内最好再测1次，如确实高于弱阳性对照时可判为阳性。
[注意事项] 本试验结果须结合临床表现、病史作出诊断后，方可采取适当临床处理。
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