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生物芯片法检测解脲脲原体

    解脲脲原体是最小、最简单的原核生物，球杆状，直径<150gm，细胞内有1环状DNA分子、游离的RNA及核糖体，缺少线粒体、溶酶体和内质网等各种细胞器。近年来发现解脲脲原体引起的泌尿生殖系感染并不少见。解脲支原体寄生于患者或带菌者的尿道和阴道黏膜，一般通过性接触而被感染；婴儿出生时可由产道获得，甚少宫内感染。临床上常采用生物芯片技术对解脲脲原体抗体进行检测。

    [检测方法]  生物芯片法

    [方法学原理]  以微孔滤膜为载体，利用微阵列技术将纯化的解脲脲原体(Uu)I群、Ⅱ群特异性蛋白固定于同一膜片上，并利用微孑L滤膜的渗滤、浓缩、凝集作用，使抗原抗体反应在固相膜上快速进行，再以免疫胶体金作为标记物直接在膜上显色。显色后的芯片放人芯片识别仪，在专用软件的支持下对不同点阵的灰度值进行分析。

    [标本准备]  取新鲜末梢血或静脉血。如采血后24h内不能进行试验，分离血清后将其保存于一20℃环境中。检测时，使样本恢复至室温。

    [试剂]

    1．蛋白芯片

    2．试剂A(洗涤液)

    3．试剂B(金溶胶试剂)

    [仪器]  蛋白芯片检测系统

    [检测步骤]

    1．在芯片上标记样品编号。

    2．在芯片盒窗口内滴加4滴试剂A，使膜表面完全浸湿。

    3．待完全渗入后，室温环境下放置lmin，加待检血清100~1。

    4．待血清完全渗入后，滴加6滴试剂5．待试剂B完全渗入后，滴加6滴试剂

    6．反应完毕后30min内，将芯片放人饼片阅读系统进行分析。

    [结果判断]

    检测结果1：Uul群、Uu 2群均为阴性，提示没有被感染。

    检测结果2：Uul群阳性、Uu 2群阴性，提示被Uul群感染。

    检测结果3：Uu 2群阳性、Uul群阴性，提示被Uu 2群感染。

    检测结果4：Uu 1群和Uu 2群均为阳性，提示被Uu感染，并且是复合感染。

    [正常参考值]  解脲脲原体阴性

    [注意事项]

    1．从2～8℃环境取出的芯片须在室温环境下平衡至少lOmin后方可使用。

    2．采取血样时患者无须禁食。

    3．新鲜血样在2—8℃环境下存放不要超过48h；长期保存的样本应在一20℃以下环境中冻存，避免反复冻融。

    4．芯片反应窗口中的膜不能损伤或受潮。

    5．芯片应在有效期内使用。若阳性控制点不显色说明芯片已失效，换新的芯片重做。

    6．残余的标本与使用过的芯片盒按生物危险晶进行消毒处理。

    7．操作时要戴手套，检测完毕彻底洗手。

    8．如不慎让任何试剂接触眼部，立即用大量清水冲洗。

    [临床意义]  解脲脲原体(Uu)分为两大群14型，第l群为1、3、6、14型，占UU感染的90％-92％；第2群为2、4、5、7、8、9、10、13型，占UU感染的8％～10％。UU不侵入组织和血液，只能黏附于泌尿生殖道的上皮细胞表面，从细胞膜获得脂质和胆固醇，引起细胞损伤，并且解脲脲原体中的脲酶可以水解尿素产生大量的氨，对细胞有毒害作用。同时可吸附于精子表面，阻碍精子的运动。其产生的神经氨酸酶样物质可干扰精子与卵子的结合，引起不育不孕；还可引起尿道结石；也可通过胎盘感染胎儿，引起流产、早产、死胎。

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