来宝网 2009/9/28点击1844次
ELISA法检测沙眼衣原体抗体
沙眼衣原体有3个生物学变种，其中2个与人类疾病有关，引起沙眼及包涵体结膜炎。沙眼是世界范围流行的眼病，是致盲的重要原因。此外，沙眼衣原体、人型支原体、解脲脲原体是引起人类泌尿生殖系统感染的重要病原体，尤以沙眼衣原体更重要。常用检查方法有ELISA和生物芯片法检测沙眼衣原体抗体。
[检测方法] ELISA法
[方法学原理) 在已包被沙眼衣原体抗原的微孔板孑L内，加入待测血清和HRP-抗人Ig，再加入酶底物显色。根据显色强度可判定沙眼衣原体抗体的有无及水平。
[试剂]
1．预包被微孔板
2．洗涤液
3．HRP-抗人IgG
4．阴性对照、阳性对照
5．底物液
6．终止液
[仪器] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。
[检测步骤]
1．从试剂盒中取出已包被沙眼衣原体抗原的微孔板和所有试剂，预温至室温。
2．将待检血清、校准血清、阴性和阳性质控血清用稀释液作1：20稀释。分别加至相应的微孔内，每孔100u1。空白孔加稀释剂100ul。
3．室温环境中温育20min后用洗涤液洗3次，每次洗涤量250ul。
4．各孔分别加HRP-抗人IgGl00~1，室温环境中温育20min，同上法洗涤3次。
5．各孔加底物溶液100rtl，室温环境中温育10min显色，每孔加终止液100gl终止反应。
6．在酶联免疫测定仪上测定450nm波长的吸光度。
[正常参考值] 沙眼衣原体抗体阴性。
[结果判断]
1．将吸光度用下列公式换算成ISR值：
ISR＝样品的吸光度÷（校准物的平均吸光度×校正因子）
(校正因子在校准血清的标签上)
2．待测血清ISR值≤0．9为阴性。
3．待测血清ISR值为0．91一1. 09为可疑阳性，应重新检测或随诊。
4．待测血清ISR值≥1．10为阳性。
[注意事项]
1．每次试验均须设置阳性与阴性质控血清和校准血清测定孔。
2．用450nm波长，试剂空白的吸光度必须<0．15；阴性质控血清的吸光度必须<0．25；阳性质控血清的吸光度必须≥0．50；校准血清的吸光度必须≥0．25。
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