来宝网 2009/9/23点击1664次
EIASA法检测白细胞介素-8
IL-8来源于单个核细胞，其主要的生物学活性有：引导嗜中性粒细胞趋化、脱粒、释放溶菌酶，加强炎症防护；促进嗜碱性粒细胞趋化、脱粒、释放组胺，加强过敏反应；使T细胞趋化、游走，加强免疫。HBV感染能诱导肝细胞合成大量TNF-a，而TNF-a又可诱导肝细胞合成IL-8，IL-8促进肝内炎症反应，介导肝细胞损伤，诱导各类细胞分化增殖，从而使慢性肝脏炎症持续存在，并导致纤维化形成。HCV感染能使机体细胞毒T淋巴细胞产生TNF-a、IL-8等多种促炎细胞因子，从而诱导肝损伤。
[检测方法] EIASA法
[方法学原理] 在微孔反应板上包被抗人IL-8单克隆抗体，待测标本和标准晶中的IL-8会与抗人IL-8单克隆抗体结合，游离的成分被洗去，同时加入生物素化的抗人IL-8抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。生物素与亲和素特异结合，抗人IL-8抗体与结合在单克隆抗体上的人IL-8结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色剂，若反应孔中有IL-8，HRP会使五色的显色剂呈现蓝色，加终止液变黄色。在波长450nm处测吸光度，IL-8浓度与吸光度成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中的IL-8浓度。
[标本准备] 静脉采血2ml，不抗凝
[试剂]
1．预包被微孔反应板
2．浓缩酶结合物
3，酶结合物稀释液
4．标准品和标本稀释液
5．浓缩生物素化抗体
6．IL-8标准晶
7．浓缩洗涤液
8．显色剂A、B
9．终止液
[仪器] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。
[检测步骤]
1．在微孔反应板相应孔中分别加入待测样本、不同浓度标准品100ul，再加生物素化抗体工作液50ul。
2．振荡混匀，置20～
3．将孔内液体吸干，用洗涤液充分洗涤5次，干燥。
4．除空白孔外，加入酶结合物工作液100ul。
5．振荡混匀，置20
6．将孔内液体吸干，用洗涤液充分洗涤5次，干燥。
7．每孔加入显色剂A、B各50ul，轻轻振荡混匀，
8．加入终止液50ul后，轻轻振荡混匀。用酶标仪(450nm波长)测定各孔吸光度，与标准曲线对照，求出IL-8水平。
[正常参考值] 各实验室可根据检测方法的不同确立正常参考值。
[注意事项]
1．试剂盒从冷藏环境中取出时应在室温环境中平衡30min后方可使用，未用完的微孔条用自封袋密封保存。
2．酶标板洗涤时各孔均需加满洗涤液，防止孔内有游离酶不能洗净。应设定30～60s的洗涤浸泡时间。
3．滴加试剂前应将滴瓶翻转数次，使液体混匀。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。
4．所有样品和废弃物都应按传染源处理。终止液为2mol／L硫酸，使用时应注意安全。
5．每批样本应同时做标准曲线。
[临床意义] 慢性活动性肝炎患者血清IL-8水平上升，且与病情相一致。急性白血病患者外周血IL-8水平明显高于正常人；动态观察骨髓移植患者血清IL-8水平有助于预测干细胞移植后粒细胞的恢复期；监测血清IL-8水平还可预测感染。
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