来宝网 2009/8/24点击1702次
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猪乙型脑炎病毒抗体IgG ELISA试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
药品名称：
通用名：猪乙型脑炎病毒抗体IgG 酶联免疫分析试剂盒
使用目的：
本试剂盒用于测定猪血清、血浆、或其它组织液中乙型脑炎病毒抗体IgG 含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中猪乙型脑炎病毒抗体IgG 水平。用纯化的猪乙
型脑炎病毒IgG 抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被抗原的微孔中依次加入乙型脑炎
病毒抗体IgG，再与HRP 标记的乙型脑炎病毒IgG 抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合
物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作
用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的乙型脑炎病毒抗体IgG 呈正相关。用酶标
仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中猪乙型脑炎病毒抗体IgG
浓度。
试剂盒组成
1 20 倍浓缩洗涤液 30ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（225ng/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
标本要求
1．标本采集后尽早进行实验。
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。
3．可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10 孔，在第一、第二孔中分别加标
准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二
孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，
混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉，再各取50μl 分别加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各
取50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混
匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准
品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，
浓度分别为（150ng/L，100ng/L ，50ng/L，25ng/L，12.5ng/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl （样
品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水20 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。
注意事项
1 推荐仪器
