来宝网 2009/8/16点击1506次
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IL-4拮抗IFN的抗病毒活性测定
IL-4能阻断IFN对L929细胞的保护作用，其拮抗程度与IL-4浓度相关，据此可通过对L929细胞保护作用的抑制率来反映样本中IL-4的含量。
(1)取生长良好的L929细胞倾去培养液，加入0．25％胰酶消化后，充分洗涤细胞，调整细胞浓度至1×105—3×105／mL，每孔加1001~L，37℃，5％C02温箱中培养24h。
(2)采用9—10日龄鸡胚，制备成纤维细胞单层培养，接种适量VSV病毒。当细胞病变达+++—++++时，收获病毒，并进行病毒TCID50测定。
(3)将待检上清和rlL-4分别与4U／mL IFN混合，在L929细胞培养孑L内加100／zL。37~C，5％c02温箱中孵育24h。
(4)VSV攻击：每孔加100uL病毒悬液，含200TCIDso；置37~C，5％C02温箱培养48h，待病毒对照孔病变达+++—++++，细胞对照正常时，测定结果。
(5)将培养液全部倒出，用Hanks液洗3次；每孔加入100bL0．5％结晶紫染色液，染10—20rain弃去，Hanks液洗3次，加入95％酒精。放小型振荡器上振摇15min左右，待细胞内染料完全溶解。用分光光度计540nm波长测OD值，以准确客观地反映细胞存活数量。
(6)注意事项：①L929细胞在营养条件不良时，可呈圆形漂浮状，此时更换培养液可使其恢复为梭形贴壁细胞；②L929细胞要均匀分散于培养板孔中，否则可能造成某个部位细胞过密，另一部分过稀，将影响细胞单层的形成。
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