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人乙肝表面抗原（HBsAg）酶联免疫分析（ELISA）

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称：

通用名：人乙肝表面抗原（HBsAg）酶联免疫分析试剂盒

使用目的：

本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中乙肝表面抗原（HBsAg）含量。

实验原理

本试剂盒应用间接法测定标本中人乙肝表面抗原（HBsAg）水平。用纯化的人乙肝表面抗原（HBsAg）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的乙肝表面抗原（HBsAg）标准品和未知浓度的HBsAg待检样品，温育后，加入生物素标记的抗IgG抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的乙肝表面抗原（HBsAg）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人乙肝表面抗原（HBsAg）浓度。

试剂盒组成

标本要求

1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

操作步骤

1.       根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

2.       加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品，生物素标记的抗-IgG抗体，链霉亲和素-HRP，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl，在样本反应孔中先加入待测样品10μl再加入样品稀释液40μl（样品最终稀释度为5倍），盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。

3.       配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

4.       洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复4次，拍干。

5.       加生物素标记的抗-IgG 推荐仪器