来宝网 2009/7/30点击1926次
白细胞介素10（IL-10）ELISA试剂盒
使用说明书
本试剂仅供研究使用
目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关
液体样本中白细胞介素10（IL-10）含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素10 （IL-10）水平。用纯化的人白 细胞介素10 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素10， 再与HRP 标记的羊抗猪抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的IL-10 呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），
通过标准曲线计算样品中人白细胞介素10 （IL-10）浓度。
简介：
人和小鼠IL-10 基因都定位于第1 号染色体，其基因组包括5 个外显子和4 个内含子，并可
能有NF- κB 和AP-1 的结合位置。人和小鼠IL-10 在DNA 和氨基酸水平上分别有81%和
73%的同源性。DNA 序列分析表明，IL-10 与EB 病毒基因组中开放读框区Ⅰ(BCRF- Ⅰ)有
70%左右的同源性。有人把BCRF- Ⅰ的基因产物称为病毒IL-10 （vIL-10 ），提示EBV 可能
摄取了哺乳动物IL-10 的基因，以求自身的生存。IL-10 的拮抗剂可能具有抗EB 病毒的
作；而IL-10 通过促进单核细胞表达IL-1ra 而可能成为抗炎症的治疗手段，动物实
验表明，IL-10 可有效地避免LPS 诱导小鼠休克而造成的死亡。
试剂盒组成：
试剂盒组成 48 孔配置 96 孔配置 说明
酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
封板膜 2 块（48 ） 2 块（96）
标准品：360μg /L 1 瓶×0.5ml 1 瓶×0.5ml 2-8℃保存
标准品稀释液 1 瓶×1.5ml 1 瓶×1.5ml 2-8℃保存
酶标试剂 1 瓶×3 ml 1 瓶×6 ml 2-8℃保存
样品稀释液 1 瓶×3 ml 1 瓶×6 ml 2-8℃保存
显色剂A 液 1 瓶×3 ml 1 瓶×6 ml 2-8℃保存
显色剂B 液 1 瓶×3 ml 1 瓶×6 ml 2-8℃保存
20 倍浓缩洗涤液 1 瓶×30ml 1 瓶×50ml 2-8℃保存
终止液 1 瓶×3ml 1 瓶×6 ml 2-8℃保存
说明书 1 份 1 份
样本处理及要求：
1，血清：室温血液自然凝固10-20 分钟，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集
上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2，血浆：应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20 分钟
后，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，
应该再次离心。
3，尿液：用无菌管收集，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4，细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转
/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS （PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞
浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分
钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5，组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存
备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS （PH7.4），用手工或匀浆
器将标本匀浆充分。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份
待检测，其余冷冻备用。
操作步骤
1. 1、标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10 孔，在第一、第二孔中分别加
标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第
二孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液
50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉，再各取50μl 分别加到第五、
第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六
孔中各取50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，
混匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标
准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，
浓度分别为240μg /L，160μg /L ，80μg /L，40μg /L，20μg /L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测
样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl
（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃
动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水20 倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
