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材料：

小鼠腹腔液涂片（重点观察巨噬细胞）。

 

试剂：

（1）．10％中性福尔马林（pH6．8～7．1）甲醛 10ml 蒸馏水 90ml 醋酸钠 2g

（2）．酸性磷酸酶作用液

　　 蒸馏水 90ml 0．2mol／L醋酸缓冲液（pH4．6） 12ml 5％硝酸铅 2ml

（3）．2％β—甘油磷酸钠 4ml

　　 先将蒸馏水和醋酸缓冲液混合，随后分成大致相等的两份，一份中加硝酸铅溶液，另一份加甘油磷酸钠溶液，然后再将两者缓缓混合，边混边搅匀后若酸碱度值不到pH5．0，可加少量醋酸的调整。此作用液最好在临用前配制，不能贮存。配好后的作用液应透明无絮状悬浮物和沉淀，否则将严重影响实验结果。

 

（4）．1％硫化胺溶液

　　 硫化胺 1ml 蒸馏水 9ml

 

（5）．姬姆萨染液（1：30）

　　姬姆萨原液 3滴 磷酸盐缓冲液（pH6．8） 5ml

 

（6）．6％淀粉肉汤

　　牛肉膏 0．3g 蛋白胨 1.0g 氯化钠 0．5g 蒸馏水 100ml

　　高压灭菌9．9×104pa（15磅）20min，再加入可溶性淀粉6g，水温浴，促使溶解后置冰箱保存备用。

实验方法

 

（1）．取小白鼠一只，每日腹腔注射6％淀粉肉汤1ml，连续注射三天。

（2）. 在第三天注射后3～4h，再向腹腔注射生理盐水1ml，过3min后在原注射部位抽取腹腔液0．1～0．2ml。请注意!注射和抽液的进针部位和深度要保持一致。否则可能抽不出腹腔液。

 

（3）．将腹腔液滴在预冷的载玻片上，每片1～2滴，涂片，将玻片垂直插入玻片架，迅速放到冰箱内（4℃），让细胞自行铺展。

 

（4）．30min后，将玻片转入10％中性福尔马林，冰箱内4℃固定30min。

 

（5）．自来水漂洗5min，把水甩干。

 

（6）．转入酸性磷酸酶作用液中，37℃处理30min。

 

（7）．自来水漂洗片刻。

 

（8）．1％硫化胺处理3～5min。

 

（9）. 自来水冲洗，甩干。

 

（10）. 用1∶30的姬姆萨染液染色15min。

 

（11）．自来水冲去染液，用磷酸盐缓冲液临时封片，镜检。

 

（12）．对照实验：

 

　　将第3步的腹腔液涂片置50℃温箱中处理30min，使酶失活，再进行6～11步的同样实验。

 

4.实验结果

 

　　巨噬细胞的细胞质中，出现许多棕色或棕黑色的颗粒和斑块。部分细胞内，酸性磷酸酶极为丰富。整个细胞质区域都有黑色沉淀。中性粒细胞呈现阴性反应。