来宝网 2013/11/29点击1260次
洗板机是ELISA检测法中的重要工具,其洗涤效果直接影响到检测结果的准确性.DEM一,自动酶标洗板机在使用过程中,虽然洗涤效果很好,但还有值得改进的地方我们进行了有关方面的改进,报告如下:
1材料和方法
1.1材料XD7n酶标仪(上海迅达),DEM一,自动酶标洗板机(北京拓普),酶标板(96孔),未包被的微孔板条、负压泵、硅胶管、塑料三通管、止血钳、废液瓶、缓冲瓶。
1.2方法
1.2.1洗液瓶与蒸馏水瓶的改进:在主机正压气嘴和主机进液嘴上各接一段scm硅胶管,硅胶管的另一端各接一塑料三通管(可从一次性翰液器上剪得)。主机正压气嘴上三通的另外两头分别与洗液瓶和蒸馏水瓶盖上的正压口相连,主机进液嘴上三通的另外两头分别与洗液瓶和蒸馏水瓶盖上的出液口相连。当清洗管路时,用止血钳将洗掖瓶盖上的两根硅胶管夹住,蒸馏水便进人管路;当洗板时,将夹在洗液瓶上的止血钳松开,夹住蒸馏水瓶上的两根硅胶管,洗涤液便流人管路进行洗板。
1.2.2载物台的改进:
1.2.2.1从洗板机上小心拆下载物台,在载物台底部放酶标板的位置画一长方形,使每边各缩进smm。用Zmm钻头延着划线钻眼,把画好的长方形挖掉,然后用锉刀锉平切口。
1·2.2.2找一块有机玻璃板,作成酶标板底部样大小,最好一边高,一边低。然后用三抓甲烷将其粘在载物台底部外面,正好能补上载物台被挖掉的部分,使载物台底部形成一个水池。在低的一边钻一小孔,插人一根长3~4。m、外径2mm的粗针头(去掉针头座),作为出液口,然后用三抓甲烷粘牢。L2.么3按原样将载物台装在洗板机上,取一硅胶管,一头与载物台出液口针头相连,另一头与废液瓶的进口相连;再取一根硅胶管将废液瓶的出口与缓冲瓶的进口相连;取第三根硅胶管将缓冲瓶的出口与负压泵的进气嘴相连。开动负压泵就能将流人载物台水池中的液体吸走。
1.2.3清洗头长针的改进:将一次性塑料小吸咀(4mmX49mm)的尖端插人每个长针头出口端,插紧后,用手术刀在长针头末端Zmm处切断小吸咀,并使插在长针头内的小吸咀保持同一水平.这样改进的长针头的内径约在。
2实验与结果
2.1在酶标板上插人干净微孔,位置如下:Al,AZ;Bll,B12;Cl~C4;Dg~D12;El~E7;F4~F12;Gl~G12;Hl~H12。么2在洗板机上,用改进后的清洗头,用蒸馏水洗板.洗涤参数:平底、板式、底部、两点吸、6次、8条、浸泡、605、每孔40。川、吸液0.55.洗涤时,同时开动负压泵,吸走流人载物台底部的液体.
2.3完毕后,取下酶标板,每孔加人0.01mol/LHCI159川,混匀后,在酶标仪上比色,以空气高零,450nm波长,读取各孔A值。结果见表1中呈色前吸光度值。么4取出醉标板,洗板6次后,每孔加人0.029/dl酚红一滴,混匀后,再洗板6次.完毕后,按2.3步骤进行,结果见表1中洗涤后吸光度值。
3讨论
自动酶标洗板机具有自动化程度高,污染小,洗涤时间、次数、浸泡时间自动控制等优点。但我们在便用中发现有些不足之处:第一,在洗板与冲洗管路时,洗液瓶盖与燕馏水瓶盖互换不如改用三通方便.第二,洗涤酶标板,当微孔不是正好为一整条(12孔)时,须用废的微孔填满一整条,一个目的是用来防止洗涤液加到外面;另一个更重要的目的是保持每个吸液针头内的负压不减低。但这样在第二次加试剂或最后比色时,很容易将废的微孔与检测孔混淆,造成检测结果的误判。由此,我们有了能否不加废的微孔而达到吸净残液同时排出载物台内多余的液体的想法。要想达到上述目的,关键是在吸液时检测微孔中的残液量小于规定的要求(2川)。经实验,用原来的清洗头达不到上述要求,每次吸液完毕后,在有检测微孔与无检测微孔交界处,检测微孔中有较多的残液存留。如AZ、Bll、Dg、E6、E7、F4、F6等;而整条的检侧微孔中无残液存留,如G条和H条。分析原因是,如果无孔处不填加废的微孔,无孔处的针头吸不到液体,始终吸人空气,当有孔处的针头吸到液体时,两种针头内的负压不一样,有检测微孔处的针头内的负压比原来降低,特别是靠近无孔处的针头。为了保持负压,我们将清洗头吸液针头内径变细后,就无上述情况发生了。半条和整条的吸液效果一样,见表1.在此基础上,我们试图从抽液嘴处接一塑料三通管,并使三通管的另外两头分别与清洗头的吸液口和载物台底部的出液口连接,共用洗板机内的气泵抽吸液体。但这样由于负压分散,有的检测微孔内有较多的残液存留。所以只好另外用一台负压泵及缓冲液和废液瓶单独与载物台出液口相连。经过我们改进后的洗板机,使用起来既能发挥洗板机原来的优点,又能进一步减轻操作人员的劳动和避免差错.小小改进,供同道和厂家参考.在此对拓普公司的大力支持表示衷心的感谢。