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                定量蛋白质组学之SILAC技术有关内容

     研究人员使用SILAC标记的细胞作为“spike-in”对照，解决了标记问题，因为通过与对照比较，可进行每种组织样品的定量。日本科学家曾将标记的Neuro2A细胞裂解液加入小鼠的脑组织裂解液中，开展小鼠脑组织的定量蛋白质组研究。
然而，考虑到组织的复杂度，以单个细胞系来代表组织似乎是不够的。此外，若样品是多样性的，如肿瘤样品，则单个细胞系也无法代表这种多样性。为了克服这些挑战，Matthias Mann教授及其同事将多个SILAC标记的细胞系混合在一起，作为“spike-in”对照，这就是Super-SILAC(超级SILAC)。

SILAC培养基 & 血清
所有的SILAC培养基都不含有L-赖氨酸和L-精氨酸。对于经典的RPMI-1640和DMEM，赛默飞世尔提供了液体(500mL)和粉剂(可配成10L)的包装。除此之外，它还有专门用于SILAC的MEM、DMEM:F12、F12、IMDM、McCoy’s 5A等培养基。当然，这些还不够。为了满足干细胞研究的需求，它还推出了用于SILAC的小鼠干细胞扩增DMEM，低渗透压小鼠干细胞DMEM。而无酚红MEM培养基适用于易受雌激素刺激的细胞，如乳腺癌细胞系MCF7，而不会产生人为的雌激素反应。此外，赛默飞世尔还提供透析过的FBS、干细胞专用的透析FBS以及血清替代物。
重型 & 轻型氨基酸
赛默飞世尔还单独提供了同位素标记的氨基酸，可与上面提到的缺陷型培养基共同使用。重型和轻型L-赖氨酸和L-精氨酸是SILAC分析中最常用的氨基酸。利用氨基酸的不同同位素，可轻松分析三种不同的实验条件。以赖氨酸为例，4,4,5,5-D4 L-赖氨酸和13C6 15N4标记的L-赖氨酸与轻型赖氨酸相比分别有4-和8-Da的分子量变化。而13C6 L-精氨酸和13C6 15N4 L-精氨酸则分别比轻型精氨酸的分子量高了6-和10-Da。L-亮氨酸也是SILAC中很常用的氨基酸。此外，赛默飞世尔还提供了L-脯氨酸作为培养基添加剂，以防止同位素标记的精氨酸代谢转换成脯氨酸。

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