来宝网 2011/10/5点击2660次
在啤酒生产中,压缩气体直接接触到麦汁,啤酒.啤酒的污染,气体是主要的来源之一.因此,啤酒厂必须定期对无菌空气,氮气,二氧化碳进行检查,以提供必要的参考数据,减少污染.目前,国家没有一个统一的压缩气体检测标准,每个啤酒厂只能根据原理制定检测方法,但有的很难准确地定量检测压缩气体的含菌量.下面对几种压缩气体检测方法进行比较.
实验器材及试剂
实验器材:压缩气体取样器,环境空气取样器,压缩气体收集装置,真空抽滤系统,培养皿,φ0.22μm无菌膜片
试剂:固体营养培养基,液体营养培养基,0.9%生理盐水
常用用的压缩气体检测方法
2.1 平板直接吹气法
将熔化的固体培养基倒入培养皿制成平板,倒置几小时去除表面水分后,将气体取样阀灭菌,缓缓放出适量气体,几秒钟后增加气体流速,打开培养皿盖,让平板培养基暴露在气体流中,并缓缓地旋转培养皿,使培养基的所有表面与气体流接触,暴露10分钟,盖上盖,直接置37℃恒温培养2天,进行菌落计数,即为10分钟气体含菌量.
2.2 气体膜过滤法
在无菌室以无菌操作方法把φ0.22μm的无菌膜片装到高温杀菌过的压缩气体取样器.将气体取样阀灭菌,缓缓地放适量气体,等气流稳定后,把取样器橡皮管接到取样口,使气体通过膜片(如图1),10分钟后,拆下取样器,在无菌操作下,把膜片取下,置固体培养基平板上,37℃恒温培养2天,进行菌落计数,即为10分钟气体含菌量.
2.3 液体培养基吹气法
将300ml液体营养培养基装入500ml带橡皮塞的广口瓶,瓶口连接一个能耐高温的橡片管(气体入口),并接一根玻璃管插到液面下,同时瓶口接一个排气口(如图2),置高温蒸汽灭菌.取样方法同气体膜过滤法,10分钟后取样结束.用止血钳夹紧进气口,直接置37℃恒温培养,观察培养基是否变混浊及时间,判断气体是否污染及污染程度.
改进的气体检测方法(真空抽滤富集法)
将300ml0.9%生理盐水装入500ml带橡皮塞的空气富集装置(如液体培养基吹气法装置),高温蒸汽灭菌后取样,方法同液体培养基吹气法(如图3).10分钟后取样结束,用止血钳夹紧进气口,以无菌操作方法,用φ0.22μm的无菌膜片进行真空抽滤富集收集液中的微生物,把膜片置固体培养基平板上,37℃恒温培养2天,进行菌落计数,即为10分钟气体含菌量.
结果与讨论
4.1不同检测方法检测结果对比
控制相同的气体流速,取样时间相同(10分钟),用不同的方法对压缩空气进行微生物检测,同时用环境空气取样器(可以设定取样空气量)对环境空气进行微生物检测.结果如下表:
取样次数
样品名称
细菌总数(个/10分钟)
环境空气细菌总数(个/200升)
平板吹气法
气体膜滤法
液体吹气法
抽滤富集法
1
粗滤前空气
97
14
20hr混浊
36
101
2
粗滤前空气
76
6
30hr混浊
12
98
3
粗滤后空气
103
1
48hr混浊
6
122
4
粗滤后空气
52
2
52hr混浊
3
63
5
精滤后空气
64
0
不混浊
0
87
6
精滤后空气
80
0
不混浊
0
53
4.2讨论
4.2.1 从上表可以看出:同一种压缩气体,取样方法不同,检测结果相差较大.用平板直接吹气法检测,细菌总数最多;气体膜滤法检测细菌总数最少;液体吹气法不能定量计数.因为用平板直接吹气法检测,在检测过程中,受外界环境空气影响较大.在吹气中,外界环境空气形成很强的气流,把环境空气中的微生同时也带入平板中,所以检测的细菌总数会比实际气体的细菌总数高;气体膜过滤法,在取样过程中,虽然不受环境空气影响,但很多气体从排气口排掉,相应气体中的一部分微生物没有被滤在膜上,而直接被排出去的空气带走.且捕集到的微生物可能会因没有及时检测而干燥死亡,所以检测的细菌总数会比实际低.
4.2.2 平板直接吹气法检测的误差大小,跟环境空气的含菌量多少关系较大.环境空气的含菌量越高,检测的细菌总数越多,误差越大.
5 结论
5.1 平板直接吹气法,操作方便,简单,但受外界环境空气影响较大,检测结果大大偏离实际(除环境空气无菌),此方法不可取;气体膜过滤法检测结果也有误差,一般不提倡.两种检测方法检测结果都不能正确地指导生产.
5.2 在没有真空抽滤富集设备的厂家,可以采用液体培养基吹气法.虽然液体培养基吹气法检测不能定量地计数,但只要固定气体流速,固定时间,可以很快地判断压缩气体是否污染及污染程度,同样可以指导生产.
5.3抽滤富集检测法,集几种检测方法的优点,只要固定气体流速,固定时间,可以准确地对压缩气体进行定量检测,正确指导生产,同样也适应于其它压缩气体如:氮气,二氧化碳的微生物检测.是一种较理想的压缩气体检测方法.
