高效缩短时长，确保质量！Onepot mRNA Transcription工艺全新升级！
来宝网 2023/7/26点击502次
高效缩短时长，确保质量！Onepot mRNA Transcription工艺全新升级！
近年来，mRNA技术的发展应用持续得到关注。mRNA药物是通过将编码抗原蛋白的mRNA接种到人体，利用人体细胞内的遗传物质进行表达合成抗原蛋白，通过抗原蛋白诱导和激活机体的免疫系统产生免疫反应，从而达到预防和治疗疾病的目的。mRNA药物以安全、高效、周期短等的优势，能够同时诱导产生体液免疫和细胞免疫，目前已经应用在肿瘤、传染病、罕见病、心血管疾病等多种不同适应症。
※图片来源于沙利文
mRNA药物开发的整个流程大致可以分为几步：
序列确定&设计—mRNA体外转录—包封制备
mRNA体外转录（In Vitro Transcription, IVT）步骤：
质粒DNA 提取&线性化—体外转录（共转录加帽）—纯化—mRNA原液
目前现有的工艺大都是质粒DNA在酶切后进行一步纯化，在进行IVT步骤。翌圣生物基于成熟的mRNA 应用开发中心，开发出：“Onepot mRNA Transcription” 工艺，环状质粒DNA在酶切后不进行纯化，直接投料进行体外转录操作，也可以得到高质量的mRNA原液产品。整个工艺在确保产品和工艺质量的前提下，减短了现有工艺的时长。
工艺优势
工艺优化，减少IVT步骤，操作更简单； 物料成本降低，不需酶切后纯化物料以及质检； mRNA质量&得率未降低。
数据展示
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1、 产量数据
*：20ul反应体系下的mRNA产量
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2、完整度检测
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3、mRNA加帽率检测
上图：HPLC 紫外色谱图
下图：解卷积分子量图谱
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4、mRNA加尾率检测
上图：液质检测 TIC 图谱
下图： 解卷积分子量图谱
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5、mRNA细胞活性检测
使用one-pot工艺和普通工艺合成的mRNA产物转染293T细胞24h后，荧光表达无差异。
产品列表
| 流程 | 定位 | 产品名称 | 货号 |
| 体外转录 （试剂盒） | RNA体外转录 | Hifair® T7 High Yield RNA Synthesis Kit | 10623ES |
| 一步法mRNA 体外转录 | T7 High Yield RNA Synthesis Kit for Co-transcription | 10673ES | |
| 体外转录 （单组分） | 限制性内切酶 | BspQI GMP-grade (10 U/μL) | 10664ES |
| BsaI GMP-grade (20 U/μL) | 10661ES | ||
| 10×Digestion buffer 3 GMP-grade | 10667ES | ||
| T7 RNA 合成酶 | T7 RNA Polymerase GMP-grade（250 U/μL） | 10625ES | |
| 无机焦磷酸酶 | Pyrophosphatase,Inorganic GMP-grade(1 U/μL) | 10620ES | |
| Pyrophosphatase, Inorganic GMP-grade (0.1 U/μL) | 10672ES | ||
| RNA 抑制剂 | Murine RNase inhibitor GMP-grade (40 U/μL) | 10621ES | |
| 转录buffer | 10×Transcription Buffer GMP-grade(Mg2+ free) | 10669ES | |
| 10× Transcription Buffer 2 GMP-grade | 10670ES | ||
| NTP | ATP Tris Solution GMP-grade (100 mM) | 10652ES | |
| CTP Tris Solution GMP-grade (100 mM) | 10653ES | ||
| UTP Tris Solution GMP-grade (100 mM) | 10654ES | ||
| GTP Tris Solution GMP-grade (100 mM) | 10655ES | ||
| Pseudo UTP Tris Solution GMP-grade (100 mM) | 10656ES | ||
| N1-Me-Pseudo UTP Tris Solution GMP-grade (100 mM) | 10657ES | ||
| DNA消化 | 模板DNA 消化 | Deoxyribonuclease I (DNase I) GMP-grade | 10611ES |
| RNA纯化 | RNA纯化 | Hieff NGS® RNA Cleaner | 12602ES |
| mRNA修饰 | 二步法加帽技术 | mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade | 10614ES |
| mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase GMP-grade | 10612ES | ||
| 10× Capping Buffer GMP-grade | 10666ES | ||
| Murine RNase inhibitor GMP-grade (40 U/μL) | 10621ES | ||
| GTP Tris Solution GMP-grade (100 mM) | 10655ES | ||
| S-adenosylmethionine (SAM)（32mM） | 10619ES | ||
| 共转录帽类似物 | Cap1-GAG m7(3'OMeG)(5')ppp(5')(2'OMeA)pG (100mM) | 10677ES | |
| Cap1-GAG m7G(5’)ppp(5’)(2’OMeA)pG(100 mM) | 10678ES | ||
| Cap AU-GAUm7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pU GMP-grade (100 mM) | 10679ES | ||
| 加尾酶 | E.coli poly(A) Polymerase (5 U/μL） | 14801ES | |
| mRNA标准品 | mRNA原液标准品 | Firefly Luciferase-mRNA(3-O-Me-GAG, N1-Me-Pseudo UTP) | 17101ES |
| eGFP-mRNA(3-O-Me-GAG, N1-Me-Pseudo UTP) | 17102ES | ||
| OVA -mRNA(3-O-Me-GAG, N1-Me-Pseudo UTP) | 17103ES | ||
| mCherry-mRNA(3-O-Me-GAG, N1-Me-Pseudo UTP) | 17104ES | ||
| 环状RNA | 线性RNA 去除 | RNase R (20U/μL) | 14606ES |
推荐仪器
