转化率99.8%！翌圣亚硫酸氢盐转化试剂盒重磅上市！

DNA甲基化是一种重要的表观遗传修饰，通过甲基化转移酶的作用下，形成5-甲基胞嘧啶（5-mC）；多项研究表明，DNA甲基化与肿瘤早期发生及肿瘤微小残留相关，已成为极具潜力的早筛及MRD的标志物。

什么是亚硫酸氢盐转化？

弱酸性条件下，亚硫酸氢根结合到未甲基化的C碱基的6位，甲基化的C碱基不会结合。然后，通过碱处理，结合了亚硫酸氢根的非甲基化的C被脱氨基和脱亚硫酸根，成为U碱基。即，用亚硫酸氢盐处理DNA可将胞嘧啶（C）转化为尿嘧啶（U），但5-甲基胞嘧啶（5mC）不会发生转变。

图1 亚硫酸氢盐转化原理

亚硫酸氢盐转化的前世今生

1970年萌芽期

Hayats等发现了胞嘧啶可以通过亚硫酸氢盐脱氨基且5-甲基胞嘧啶通过亚硫酸氢盐脱氨基的速度远远比非甲基化的胞嘧啶慢。
这些研究结果提示亚硫酸盐使 DNA中未发生甲基化的胞嘧啶(C)脱氨基转变成尿嘧啶(U),而甲基化的胞嘧啶保持不变，通过PCR反应转化成胸腺嘧啶(T)。

1992年发展期

科学家们将亚硫酸氢盐转化的转化时间缩短至18h，转化率可达99%；
在NGS技术还未到来之前，亚硫酸氢盐转化已被广泛使用，但检测的甲基化位点有限。

Now成熟期

随着NGS技术的发展，WGBS及RRBS等甲基化检技术的问世，甲基化的研究进入一个新纪元，可以实现高通量、单碱基的甲基化分辨率。
通过不断的技术的革新，加上先进的柱膜技术或超顺磁性氧化硅纳米磁珠，亚硫酸氢盐转化时间可短至90min之内，转化率可达99.5%以上。

亚硫酸氢盐转化-DNA甲基化检测的“金标准”

近几年，基于DNA甲基化位点的检测试剂盒陆续获批面世。NMPA批准的甲基化检测试剂盒大部分为荧光PCR法，主要原因在于荧光PCR法操作简便，无需在PCR后电泳，且具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特点。这些甲基化检测试剂采用的转化方法为亚硫酸氢盐转化法，亚硫酸氢盐转化成为DNA甲基化检测的“金标准”。

2023年，NMPA陆续获批了多个甲基化检测试剂盒，甲基化检测领域持续炙手可热！

表1.2023 NMPA获批甲基化检测产品

（更多的获批产品可于NMPA官网查询）

翌圣生物自主研发的超高转化率亚硫酸氢盐转化试剂，助力肿瘤早筛！

产品介绍

Hieff® Mag DNA Methylation Bisulfite Kit(Cat#12223)磁珠法DNA甲基化亚硫酸氢盐转化试剂盒能转化未发生甲基化的胞嘧啶，通过脱氨基反应产生尿嘧啶磺酸盐，发生甲基化的胞嘧啶则不会被亚硫酸氢盐转化。转化后的DNA经过高效吸附核酸的磁珠结合，再通过洗涤、脱硫和洗脱等步骤富集得到磁珠上的DNA。

产品优势

产品性能

非甲基化C的转化率：

粪便脱落细胞gDNA、cfDNA 、FFPE DNA不同投入量进行亚硫酸氢盐转化，样本中参入1%λDNA和0.5% PUC19DNA，12223ES的转化率＞99.5%，5ng以上的样本投入量，转化率＞99.8%。

图2 非甲基化C的转化率

甲基化C的保护率：

粪便脱落细胞gDNA、cfDNA 、FFPE DNA不同投入量进行亚硫酸氢盐转化，样本中参入1%λDNA和0.5% PUC19DNA，12223ES甲基化C的保护率＞98%。

图3 甲基化C的保护率

线性关系：

293T gDNA不同投入量进行亚硫酸氢盐转化，转化后的DNA采用甲基化特性行引物进行qPCR，不同样本投入量之间具有良好的线性关系。

图4.不同样本投入量转化率之间的线性关系

批间稳定性：

采用3个不同批次的试剂，以293T gDNA不同投入量进行亚硫酸氢盐转化，转化后进行NGS测序，3个批次间的转化率和保护率具有良好的重复性。

表2 不同批次试剂的转化率

弱阳性临床样本的检出情况：

采用3个肠癌弱阳性的粪便样本，转化后的DNA采用SDC2甲基化特性行引物进行qPCR，12223ES转化的检测体系拥有更高的灵敏度。

图5 SDC2甲基化特异性引物qPCR检测结果

订购信息

产品名称	产品货号	产品应用
Hieff® Mag DNA Methylation Bisulfite Kit(Cat#12223)磁珠法DNA甲基化亚硫酸氢盐转化试剂盒	12223ES	甲基化转化

产品名称	产品货号	产品应用
Hieff NGS® Methyl-seq DNA library Prep kit for Illumina® V2 甲基化DNA建库试剂盒V2	12221ES	甲基化文库构建
DNA Methylation Bisulfite Kit DNA重亚硫酸盐转化试剂盒	12222ES	甲基化转化
ssDNA Assay Kit	12645ES	单链 DNA（ssDNA)定量
1×dsDNA HSAssay Kit	12642ES	双链DNA（dsDNA）定量
Hieff NGS® RNA 384 CDI Primer for Illumina® , Set 1-2	12414ES 12415ES	Index
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase	10145ES	甲基化转化后PCR扩增

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转化率99.8%！翌圣亚硫酸氢盐转化试剂盒重磅上市！

(12642ES) 1×dsDNA HS Assay Kit

(12414ES) Hieff NGS® RNA 384 CDI Primer for Illumina®

(10145ES) Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase (1 U/μL)

(12645ES) ssDNA Assay Kit

(12221ES) Hieff NGS® Methyl-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® V2

(12222ES) Hieff® DNA Bisulfite Conversion Kit