支原体检测,快人一步
支原体(Mycoplasma)又称霉形体,是目前发现最小、最简单的原核生物,在实验室和生物制品工厂在细胞培养过程中易受到支原体污染,据文献报道:支原体污染在储存细胞系中发生率约为 15%-35%,在生物制药行业中约为0.44%-6.70%[1]。支原体污染后能导致细胞产生多种变化(见图1),因此如何快速的检测支原体的存在不仅大大降低污染的风险,也能为开发和生产降本增效。
随着分子生物学技术的迅速发展,基于核酸检测的方法广泛应用于各类实验室检测中。等温扩增技术的反应过程在恒定的温度下进行,通过添加不同活性的酶和特异性引物来达到快速扩增核酸的目的。与其他的核酸扩增技术相比,LAMP反应只需要把模板、引物、链置换型DNA合成酶、基质等共同置于一定温度下(60~65℃),经一个步骤即可完成,且其扩增效率极高,可在15~60 min内实现109~1010倍的扩增;而且由于有着高度的特异性,只需很据扩增产物的有无即可对靶基因序列的存在与否做出判断,等温扩增具有快速、高效、特异的优点且无需专用的设备等优势。Yeasen一步法恒温支原体检测试剂盒基于LAMP等温扩增技术开发,无需特殊仪器,1h就可通过颜色判定检测结果,在拷贝数提升的情况下反应时间可缩短至30min。检测灵敏度是普通恒温检测的1000倍并添加了防污染组分,杜绝假阳性现象的发生。❖ 快速方便:一步完成操作,60 min获取结果;
❖ 操作简单:无需借助殊仪器,一台水浴锅 or PCR仪;
❖ 肉眼观察:颜色变化差异明显,肉眼即可判别结果;
❖ 检测范围广:精确检测22种支原体,包括常见8种支原体。

图3:一步法支原体检测流程