来宝网 2022/4/21点击1009次
链霉亲和素(Streptavidin)是一种由同一亚基组成的四聚体蛋白。每个亚基与一个生物素分子结合，具有高度的亲和力和特异性。蛋白或者抗体一旦生物素化，便可以结合在链霉亲和素修饰的固相基底，如磁性材料或者是琼脂糖上，进行免疫共沉淀，结合在树脂柱或者平板表面用作ELISA。
Streptavidin Agarose Resin 6FF将链霉亲和素固定在高度交联的6%琼脂糖表面，主要用来纯化亚氨基生物素或Strep标记的蛋白、抗体、核酸等物质，或者是固定生物素化蛋白后分离其他蛋白，如免疫沉淀。
表1 Streptavidin Agarose Resin 6FF亲和介质产品特性
参数 | 指标 |
基质（Matrix） | 高度交联的6%琼脂糖微球 |
配体（Ligand） | 链霉亲和素 |
粒径（Bead size） | 45-165 µm |
载量（Capacity） | ＞200 nmol Biotin/mL介质 |
最大压力（PressureMax） | 0.3 MPa，3 bar |
pH稳定范围（pH range） | 2-10 |
1、直接快速分离任何生物素化分子，应用广泛，使用灵活。
2、专一性高，非特异性干扰少，结合稳定。
3、纯化树脂材质稳定。
4、结合容量高。
5、Streptavidin Agarose Resin 6FF可特异性结合多种标签，如下表所示。
表2 链霉亲和素可特异性结合的标签
名称 | 结合能力 | 蛋白纯化洗脱条件 | 推荐应用 |
生物素 | 强 | 强力变性缓冲液 | 固定生物素化抗体纯化抗原，或固定生物素化蛋白来分离其他蛋白，如免疫沉淀 |
2-亚氨基生物素 | 较强 | 酸性pH=4 | 纯化带此标签的蛋白，可重复使用。 |
可断裂的生物素化试剂 | 强 | 还原条件下 | 纯化带此标签的蛋白 |
Strep-tag II | 弱 | 用生物素竞争洗脱 | 纯化带此标签的蛋白 |
Twin-Strep-tag | 较弱 | 用生物素竞争洗脱 | 纯化带此标签的蛋白 |
1、平衡，使填料处于和样品一样的缓冲环境
2、上样，通过重力将样品上样至色谱柱结合
3、洗杂，除去非特异性结合的杂蛋白
4、洗脱，将结合的目的蛋白从填料上洗脱
图1 Streptavidin Agarose Resin 6FF纯化亚氨基生物素标签蛋白结果电泳图
图2 Streptavidin Agarose Resin 6FF纯化Twin-Strep-tag标签蛋白结果电泳图
问题 | 可能原因 | 推荐解决方案 |
柱子反压过高 | 填料被堵塞 | 清洗树脂。 |
裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，或离心去除。 | ||
样品太黏稠 | 样品中含高浓度的核酸，延长破碎时间直至粘度降低，或添加DNaseI （终浓度为5µg/ml），Mg2+(终浓度1mM)，冰上孵育10-15min | |
缓冲液太黏稠 | 有机试剂或蛋白稳定试剂（如甘油等）可能会引起反压增高，降低操作流速。 | |
洗脱组分中无目的蛋白 | 过度的裂解使目的蛋白变性 | 使用温和的裂解条件，实验条件以经验为准。 |
目的蛋白聚集产生沉淀 | 在细胞裂解前溶液中加入DTT，终浓度为1-10 mM | |
目的蛋白没有完全洗脱下来 | 洗脱体积太少 | 增加洗脱液体积，减小洗脱流速。 |
洗脱液中盐酸胍的pH 发生改变 | 使用新鲜配制的洗脱液 | |
洗脱液孵育时间不够 | 增加洗脱液与凝胶的孵育时间 |
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
20512ES08 | 5 mL | 1586.00 | |
20512ES25 | 5 mL×5 | 6356.00 | |
20512ES60 | 100 mL | 16796.00 | |
BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 1ML 生物素分子纯化预装柱，1ML | 20513ES03 | 1 mL | 428.00 |
20513ES08 | 1 mL×5 | 1328.00 | |
BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 5ML 生物素分子纯化预装柱，5ML | 20514ES08 | 5 mL | 1158.00 |
20514ES25 | 5 mL×5 | 4958.00 |
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
47503ES03 | 1 mL | 728.00 |
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