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细胞培养全攻略

来宝网 2021/9/22点击963次

细胞培养全攻略


RAW264.7属贴壁细胞,最好的形态呈现为小而圆、透亮,但其也极易出现伪足的细胞形态,这也是大家细胞总是养不好、消化传代困难的根源,同时也是实验数据不理想的罪魁祸首。除此之外,细胞生长缓慢、贴壁困难,也是大家在养细胞过程中出现的最常见问题,今天小翌就来给大家整理一份RAW264.7细胞培养最全攻略!!!

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▲ 图源Pixabay


Part Ⅰ
 概 述

RAW264.7中文全名为小鼠单核巨噬细胞白血病细胞,来源于雄性Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤,是常用的炎症细胞模型之一,常见于研究细胞吞噬、细胞免疫、分子免疫学。

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▲ 图源Pixabay


Part Ⅱ
 细胞的形态与特点

RAW264.7细胞具有强吞噬能力,细胞在吞噬抗原后释放趋化因子,促使细胞分化出伪足,因此造成细胞极难消化。细胞吞噬抗原过多、培养环境恶劣都易促使细胞呈现梭形,造成最终实验数据不理想。

有时细胞看起来一切正常,但却生长缓慢,究其原因多半是感染了支原体,支原体感染导致生长变慢、状态变差,虽不会马上致死,但会影响其机体内的各种参数,且难以被观察到,是影响细胞状态的隐形杀手。


Part Ⅲ
 针对性解决方案

在日常培养过程中发现RAW264.7细胞容易出现的问题主要为以下几种:1.复苏不易成功2.细胞形态变异明显3.消化困难4.细胞生长缓慢,当你的细胞培养遇到上述瓶颈,不妨试一试以下几种解决办法。


1

复苏难以成功

原因:RAW264.7对空间十分敏感,复苏密度太高,细胞增殖太快,加剧细胞营养缺失,加速细胞老化。

解决办法:T75培养瓶复苏细胞数量控制在104~105

2

细胞变异明显

原因:细胞吞噬抗原过多、培养环境恶劣都会促使该细胞呈现梭形、长梭形

解决办法:改善细胞培养环境,例如与细胞接触的玻璃器皿均高温灭菌,换flask培养瓶,采用一次性器具,使用质量较高的胎牛血清

3

消化困难

原因:细胞老化后,细胞伪足多且长,使细胞难消化,使用胰酶或细胞刮会对细胞损伤较大

解决办法:无需胰酶使用吸管重复吹打,可消化大部分正常状态的细胞;但若细胞为“长脚”状态,即使加入胰酶消化超过10min,也难以消化下来,勉强消化,对后续的实验数据也有较大影响。

4

生长缓慢

原因:支原体污染会导致细胞生长缓慢,甚至难以贴壁

解决办法:定期进行支原体检测(
如翌圣生物一步法恒温支原体检测试剂),如发现支原体污染,即刻使用支原体去除试剂(如翌圣生物MycAwayTM 支原体去除试剂



Part Ⅳ
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▲ 图1.一步法支原体检测操作流程

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去除前
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去除后

▲ 图2.Yeasen MycAwayTM 支原体去除效果的展示


  支原体去除试剂的特点

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» 稳定性强:-20℃试剂能较长时间保存并保持高效用;

» 操作简单:只需将产品添加至支原体污染的培养基中孵育即可;

» 起效快:最快3天即可见效;

» 去除范围广:能去除实验室绝大多数支原体类型。          
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▲ 图3.支原体去除试剂细胞毒性检测图示


Part Ⅴ
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