来宝网 2021/8/30点击953次
1 概述 ▲ 图1.原代组织细胞培养（源于网络） 特性 原代细胞 细胞系 增殖能力 较弱 强 繁殖代数 一般只能传10代以内 无限增殖，50代左右 遗传物质完整性 遗传物质未改变 遗传物质发生改变 生物特性 最接近临床样本 偏离临床样本 培养容易程度 比较复杂 简单，易操作 在原代细胞培养的过程中，支原体污染发生的频率很高，但常常为人所忽视，原因在于支原体污染的培养液可能不发生混浊的现象，这就导致了很难被肉眼所观察到。 2 原代细胞培养如何取材 ▍ 皮肤和黏膜 主要取皮片，面积一般2-4cm2 » 无菌环境； » 熟悉所需组织的类型和部位； » 要避开破溃、坏死、液化部分，以防污染、尽量去除混杂的结缔组织。 ▍ 血液细胞 » 取材时应注意抗凝。 ▍ 骨髓、羊水、胸/腹水细胞 ▍ 动物组织取材-鼠胚组织 » 将其浸泡在含75%酒精的烧杯中，5分钟后取出动物； » 在消毒过得木板上可用无菌的图钉固定四肢，切开皮肤； » 用无菌操作法解剖取胚。 ▍ 动物组织取材-幼鼠胚肾/肺 » 腹部朝上固定在木板上，先切开游离毛皮并拉开至两侧； » 采用无菌法打开胸腔取肺，或从背部打开腹腔取肾。 ▍ 鸡、鸭、鸟类胚胎组织 » 将胚蛋至于蛋架上，先将温水清洗蛋壳，再用75%酒精棉球擦干，经碘酒、75%酒精消毒后，在无菌条件下采用无菌法用剪刀或镊子打开气室，沿气室边缘去除蛋壳； » 用眼科镊子撕去壳膜，暴露出鸡胚； » 用弯头镊挑起胚头，取出胚胎，放入无菌平皿中，解剖取材。 3 常见问题 Q1：细胞量太少，长不起来怎么办？ 有几种办法，如对没消化完的组织块反复消化，尽量多收集一些细胞；并且尽量传代到小皿里，如6孔板都可以。若是细胞仍太少，应耐心等待，尽量不要传代，只换液。 Q2：皮肤组织作为正常组织，与肿瘤组织分离主要区别在哪里？ 首先，皮肤组织需要用中性分离酶dispaseII将表皮分离出来；其次，在消化时，用的是胰酶，而非胶原酶，并且胰酶的浓度用的是0.05%，而不是0.25%。 Q3：细胞难以贴壁怎么办？ 为了尽快促进细胞贴壁，可以提前1h将0.5%的明胶铺于培养板。另外，如果细胞被污染了肯定不贴壁，建议做支原体检测，结果如果是阳性，立即加入支原体去除试剂，挽救您的细胞，咱们小翌可以为你的细胞提供全方位的护航！ 4 精品推荐 ▍ Yeasen 40612 只要一步法即可检测支原体的存在 ▲ 图2.一步法支原体检测操作流程 ▲ 图3.Yeasen MycAwayTM 支原体去除效果的展示 ▍ 支原体去除试剂的特点 » 稳定性强：-20℃试剂能较长时间保存并保持高效用； » 操作简单：只需将产品添加至支原体污染的培养基中孵育即可； » 起效快：最快3天即可见效； ▲ 图4.支原体去除试剂细胞毒性检测图示 5 产品信息 类别 产品 货号 规格 支原体检测 40601ES10/20 10/20 assays MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原体检测试剂盒 40612ES25/60 25/100T 支原体 40605ES02/03 1 / 2×500 mL MycAway™ Treatment (1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent MycAway™ 支原体去除试剂（1000×） 40607ES03/08 1/ 5×1mL 支原体 MycAway™ Prophylactic (2000×)-Mycoplasma Prevention MycAway™ 支原体预防试剂（2000×） 40608ES03/08 1/5×1 mL MycGuard™-1 Solution (100×), for Disinfecting Water Bath of CO2 Incubator 细胞培养箱水盘1号消毒卫士 40609ES60 100 mL MycGuard™-2 Solution (500×), for Disinfecting Ordinary Water Bath 40610ES60 100 mL
去除试剂
预防试剂
