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                      ——提取效果媲美进口M*品牌

20世纪80年代中期前，微生物学家通过人工培养的方法研究土壤微生物生态系统，而可培养的微生物不到总数的1%，相当多的微生物还未被认知。随着宏基因组学的快速发展，通过提取土壤微生物总DNA来研究生态系统的方法开始出现。然而，土壤是一个非常复杂的异质体系，其中，含有的腐植酸及腐植酸类似物、酚类化合物、重金属离子等，在DNA提取过程中如不能有效去除，将直接影响后续的PCR扩增、核酸杂交、内切酶消化等分子操作。

为了解决这一难题，翌圣研发了一款采用陶瓷珠和二氧化硅颗粒混合而成的玻璃珠进行样本处理的土壤DNA提取试剂盒—MolPure^® Soil DNA Kit，可有效处理真细菌孢子和内生孢子，革兰氏阳性细菌，酵母，藻类，线虫和真菌等土壤中的各类微生物。该试剂盒的离心吸附柱中采用的硅基质材料为特有新型材料，配合独特的裂解液配方可快速回收高纯度核酸。提取的DNA纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种下游应用实验，如酶切、PCR等实验。

◆  操作便捷：室温操作，仅需40min即可回收DNA。

◆  产量高：独特的玻璃珠能高效裂解土壤微生物，释放更多DNA，最大限度地提取其产量。

◆  适用范围广：适合花坛土、花盆土、农田土、山林土、淤泥、黑土等各类型土壤。

◆  纯度高：有效去除土壤中腐殖酸、重金属离子等杂质，并与离心柱法纯化相结合，大大地提高了DNA的纯度。

图1. 土壤DNA提取操作流程图

◆  提取效果媲美进口M*品牌

图2. 琼脂糖电泳检测大肠杆菌16s rDNA的扩增条带。Y为翌圣品牌，M*为进口品牌，阳性对照为培养的大肠杆菌gDNA，Y1/Y2和M1/M2为1μL洗脱液，M3/M4为M1/M2稀释3倍后的洗脱液。

◆  比进口O*品牌操作简单，节约30min

图3.  Yeasen土壤DNA提取试剂盒和O*品牌同类型产品操作步骤对比图。Yeasen土壤DNA提取试剂盒比O*品牌同类型产品步骤省3步，并且提取速度节约30min。

◆  Q1：试剂盒是如何进行破壁的？

A：MolPure^® Soil DNA Kit采用独特的裂解液和珠磨法进行破壁，可有效处理真细菌孢子和内生孢子，革兰氏阳性细菌，酵母，藻类，线虫和真菌等土壤中的各类微生物。 

◆  Q2：如何解决DNA电泳拖尾严重呢？

A：1、可能原因一：土壤中含有丰富小型生物和易裂解的细菌。这些易裂解的小型生物和细菌在玻璃珠长时间涡旋中会造成DNA降解。

解决方案：可通过减少涡旋时间，或者用高能量的珠磨仪代替手工涡旋。高能量的珠磨仪能提供非常高的能量，在短时间就可以达到破壁效果，能减少DNA的降解。

2、可能原因二：样品中存在某些化学物质，或者样品在贮藏过程中发生降解。

解决方案：针对不同的样品，采用合适的贮藏条件进行保存，以防止微生物DNA的降解。

◆  Q3：该方法可以获得所有微生物的DNA吗？

A：不一定。土壤样品中含有大量的微生物，有细菌和真菌，以及其他植物根系，小型生物。某些真菌，特别孢子类真菌，因带有非常厚的细胞壁，无法破壁而导致DNA的丢失。因此，可加强破壁的强度和时间来提取这些难提取的DNA。

◆  Q4：哪些因素会影响DNA的产量呢？

A：土壤样品中所含的微生物的种类，微生物的数量，以及土壤样品中的有机，无机盐都会直接影响到DNA的产量。

◆  Q5：哪些事项需要注意？

A：注意事项如下：

1） 土壤DNA产量主要来源样品内微生物、植物动物残渣，冰冻或贮存过程中DNA会发生不同程度的降解，导致DNA含量降低或条带成较严重的涂抹状（即降解）。因此，尽量使用新鲜样品或贮存时间较短样品进行DNA提取。

2） 如果土壤样品中的水分含量比较多，建议先将水分离心去除后再进行提取。

3） 不要省略空柱子离心步骤，该步骤能除去柱子中残留的乙醇，否则可能会影响下游实验；如产物点电泳时无法正常沉降，绝大部分情况下由于空甩不完全，乙醇残留所致，可在下次提取中，提高离心机速度或延长空甩时间至5~10min，可解决残留问题。

HB210817