链霉亲和素系列专题
—— 一品多用，实现最大价值
一 背景介绍
链霉亲和素是一种来源于阿维丁链霉菌（streptomyces avidinii）的生物素结合蛋白质，其非特异性结合远比亲和素低，且与蛋清亲和素在中性pH值具有净正电荷和包含大约7%的碳水化合物相比，链霉亲和素蛋白具有在中性pH值几乎没有净电荷，不含有碳水化合物等更有利的化学性质，所以它被广泛用来作为抗生物素蛋白的替代品。
二 产品特点
֍ 四聚体结构：链霉亲和素同源四聚体的形式存在，大小为66Kda；
֍ 亲和力强：每分子链霉亲和素可以高度特异性地与四分子生物素结合，两者之间的亲和力极为强烈；
֍ 用途广：链霉亲和素-生物素复合物的解离常数处于 10 mol/L 数量级，这一性质常用于分子生物学用途；在大多数应用中，可以与抗生素蛋白抗体相互替代。
֍ 优质提取：由streptomyces avidinii菌提纯获得；
图1链霉亲和素
三 产品应用
应用一 链霉亲和素纯化树脂
1 应用原理
基于链霉亲和素与生物素之间的相互作用，将链霉亲和素高度交联于6%琼脂糖上，独特的制备工艺使其具有更高的物理化学特性，可以耐受更高的压力，在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化，更适于工业大规模蛋白的纯化。
图2 链霉亲和素树脂的纯化原理
2 Yeasen致力于为您提供效率最高的产品，为您纯化得到更完美的蛋白。
图3 链霉亲和素树脂纯化后的蛋白
3 常见问题
问题 | 可能原因 | 推荐解决方案 |
柱子反压过高 | 填料被堵塞 | 清洗树脂。 |
裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上样前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，或离心去除。 | ||
样品太黏稠 | 样品中含高浓度的核酸，延长破碎时间直至粘度降低，或添加DNaseI （终浓度为5µg/ml），Mg2+(终浓度1mM)，冰上孵育10-15min | |
缓冲液太黏稠 | 有机试剂或蛋白稳定试剂（如甘油等）可能会引起反压增高，降低操作流速。 | |
洗脱组分中无目的蛋白 | 过度的裂解使目的蛋白变性 | 使用温和的裂解条件，实验条件以经验为准。 |
目的蛋白聚集产生沉淀 | 在细胞裂解前溶液中加入DTT，终浓度为1-10 mM | |
目的蛋白没有完全洗脱下来 | 洗脱体积太少 | 增加洗脱液体积，减小洗脱流速。 |
洗脱液中盐酸胍的pH 发生改变 | 使用新鲜配制的洗脱液 | |
洗脱液孵育时间不够 | 增加洗脱液与凝胶的孵育时间 |
应用二 荧光基团及酶偶联物标记的链霉亲和素
图4 不同标记的链霉亲和素
1 酶偶联物标记的链霉亲和素
l 辣根过氧化物酶标记的链和亲霉素
1) 由高纯度的链霉亲和素和辣根过氧化物酶，通过特殊的偶联技术生产；
2) 保持了过氧化物酶的高比活性。
应用于：免疫组化（IHC）、免疫细胞化学（ICC）、原位杂交（ISH）等领域。
推荐使用浓度：0.01-0.1 µg/mL for WB（化学发光法）；1-2µg/mL for ELISA，HC/ICC，WB(底物显色）
l 碱性磷酸酶标记链霉亲和素
1) 适合于固相分析，组织/细胞染色系统和印迹应用，选择特定的共价连接；
2) 缀合物稳定并高活性。
应用于：免疫组化（IHC）、免疫细胞化学（ICC）、酶联免疫斑点法（ELISPOT）、酶联免疫吸附法（ELISA）、原位杂交（ISH）及印迹应用。
推荐使用浓度：1-2 µg/mL for ELISA， IHC/ICC；0.1-1 µg/mL for WB
2 荧光基团标记的链霉亲和素
l Fluor®荧光素标记链霉亲和素
1) 推荐用于常规免疫荧光；
2) 高度纯化并具有非常低的非特异性结合特性；
3) 对生物素具有较高的亲和力；
应用于：免疫荧光（IF）、原位杂交（ISH）、流式细胞术（Flow Cyt）。
推荐使用浓度：0.5-2 µg/mL（IF）
l DyLight™ 染料标记链霉亲和素
1) 在免疫荧光、原位杂交或流式细胞术等应用中可用于检测生物素化的二抗和其他大分子；
2) 高度纯化并具有非常低的非特异性结合特性；
3) 对生物素具有极高的亲和力；
4) 高光稳定性、pH不敏和更亮的荧光；
应用于：免疫荧光（IF）、原位杂交（ISH）、流式细胞术（Flow Cyt）。
推荐使用浓度：0.5-2 µg/mL（IF）
四 产品信息
产品系列 | 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
链霉亲和素纯化系列 | Streptavidin Agarose Resin 6FF 链霉亲和素琼脂糖纯化树脂 | 20512ES08 | 5 mL | 1586.00 |
20512ES25 | 5 mL×5 | 6356.00 | ||
20512ES60 | 100 mL | 16796.00 | ||
BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 1ML 生物素分子纯化预装柱，1ML | 20513ES03 | 1 mL | 428.00 | |
20513ES08 | 1 mL×5 | 1328.00 | ||
BiotSep Streptavidin 6FF Chromatography Column, 5ML 生物素分子纯化预装柱，5ML | 20514ES08 | 5 mL | 1158.00 | |
20514ES25 | 5 mL×5 | 4958.00 | ||
酶偶联物标记的链霉亲和素 | HRP Streptavidin 辣根过氧化物酶标记链霉亲和素 | 35105ES60 | 100 µL | 436.00 |
AP Streptavidin 碱性磷酸酶标记链霉亲和素 | 35106ES60 | 100 µL | 436.00 | |
链霉亲和素 | Streptavidin链霉亲和素 | 35101ES03 | 1 mg | 326.00 |
35101ES08 | 5 mg | 876.00 | ||
35101ES10 | 10 mg | 1466.00 | ||
35101ES60 | 100 mg | 2856.00 | ||
35101ES80 | 1 g | 9586.00 | ||
荧光基团标记的链霉亲和素 | DyLight 405™标记链霉亲和素 DyLight 405™ Streptavidin | 35102ES60 | 100 µL | 436.00 |
Alexa Fluor® 488标记链霉亲和素 Alexa Fluor® 488 Streptavidin | 35103ES60 | 100 µL | 436.00 | |
Alexa Fluor® 647标记链霉亲和素 Alexa Fluor® 647 Streptavidin | 35104ES60 | 100 µL | 436.00 | |
Alexa Fluor® 594标记链霉亲和素 Alexa Fluor® 594 Streptavidin | 35107ES60 | 100 µL | 436.00 | |
Cy3标记链霉亲和素 Cy3-conjugated Streptavidin | 35108ES80 | 1 mg | 1988.00 |
HB190724
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