来宝网 2019/6/22点击1217次
标签蛋白纯化系列
——快速选择高效的纯化树脂
背景描述：
对目的蛋白的功能、结构和相互作用研究时，常常会用到蛋白纯化介质。Yeasen为您提供多种优良的亲和层析介质，可批量或利用重力进行纯化，可以高效、便捷、可靠地从您的样品中分离蛋白和抗体，为下游应用提供良好保证。
表1 蛋白纯化产品性能及应用
名称 | 性能（/mL填料） | 粒径（µm） | 应用 |
Ni NTA Beads | >40mg 6XHis-tagged protein | 45-165 | 用于His标签蛋白的纯化，其配体为稳定的四配位结构，该产品可以耐受比较苛刻的化学试剂，因此，该产品具有较广泛的应用范围，可以针对包涵体和可溶蛋白的纯化。 |
Ni NTA 6FF Beads | >40mg 6XHis-tagged protein | 45–165 | 可用于可溶蛋白和包涵体的纯化，因其耐压的骨架，可以应用于大规模蛋白纯化，更容易放大规模。 |
Glutathione Beads | > 20mg glutathione | 45–165 | 可以用于快速纯化谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽转移酶的重组蛋白。具有纯化效率高，树脂载量高等特点。推荐实验室规模客户使用。 |
Glutathione Beads 4FF | ~10 mg glutathione | 45–165 | 可以用于快速纯化谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽转移酶的重组蛋白。具有纯化效率高，树脂载量高等特点。因其耐压的骨架，可以应用于大规模蛋白纯化，更容易放大规模。 |
标签蛋白纯化的选择
1）产品组成
为了有效对其蛋白样品进行纯化且进行后续的实验探究，翊圣公司提供两种不同的产品，一种是填料，一种是预装柱。
树脂：只要以高度交联的琼脂糖凝胶为基质而形成的用来纯化蛋白的树脂，多种树脂供客户选择；
预装柱：由树脂和柱子配置好的成品。
2）不同纯化标签的比较
融合标签 | 大小（kD） | 功能 |
HIS | 0.84 | 有利纯化，能纯化可溶性蛋白/包涵体蛋白 |
GST | 26 | 增强蛋白可溶性，仅能纯化可溶性蛋白，屏蔽毒性蛋白 |
MBP | 44.4 | 增强蛋白可溶性，屏蔽毒性蛋白 |
3） 产品使用的方法
简单三步快速纯化
&& 样品上样 ：将蛋白样品缓慢加入到纯化柱中，请注意加样速度；
&& 平衡/洗杂：Wash Buffer 平衡柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线；
&& 洗脱：使用5-10倍柱体积Elution Buffer洗脱，收集洗脱液即目的蛋白溶液。
图1蛋白纯化实验流程图
融合标签的分类
1）His标签蛋白琼脂糖纯化树脂
HisSep Ni-NTA Agarose Resin以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸（NTA）为配体，螯合镍离子（Ni2+）后，形成非常稳定的八面体结构，镍离子处于八面体的中心，这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻，与Ni-IDA树脂相比，更加稳定，可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。已经成为实验室纯化His标签蛋白不可或缺的树脂之一。
产品特点
&& His-Tag本身的特性对目的蛋白无影响，不会形成二聚体；
&& 高结合量、高流速，其载量＞40 mg 6×His-tagged protein/mL基质，流速1 mL/min；
&& 可与其他标签构建双标前表达，可用于多种蛋白表达系统，纯化条件温和对蛋白 影响较小。
产品信息
应用 | 货号 | 品名 | 规格 | 价格（元） |
His标签 蛋白纯化
| 20502ES10 | HisSep Ni-NTA Agarose Resin （His标签蛋白琼脂糖纯化树脂） | 10 mL | 678.00 |
20502ES50 | HisSep Ni-NTA Agarose Resin （His标签蛋白琼脂糖纯化树脂） | 50 mL | 2848.00 | |
20502ES60 | HisSep Ni-NTA Agarose Resin （His标签蛋白琼脂糖纯化树脂） | 100 mL | 5328.00 | |
20503ES10 | HisSep Ni-NTA Agarose Resin 6FF （His标签蛋白琼脂糖高速纯化树脂） | 10 mL | 798.00 | |
20503ES50 | HisSep Ni-NTA Agarose Resin 6FF （His标签蛋白琼脂糖高速纯化树脂） | 50 mL | 3358.00 | |
20503ES60 | HisSep Ni-NTA Agarose Resin 6FF （His标签蛋白琼脂糖高速纯化树脂） | 100 mL | 5838.00 | |
20504ES08 | HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 5ML （His标签蛋白纯化预装柱，5ML） | 5 mL | 728.00 | |
20504ES25 | HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 5ML （His标签蛋白纯化预装柱，5ML） | 5×5 mL | 2938.00 | |
20505ES03 | HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 1ML （His标签蛋白纯化预装柱，1ML） | 1 mL | 298.00 | |
20505ES08 | HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 1ML（His标签蛋白纯化预装柱，1ML） | 5×1 mL | 1048.00 | |
洗脱试剂 | 20501ES60 | Imidazole咪唑 | 100 g | 88.00 |
20501ES76 | Imidazole咪唑 | 500 g | 258.00 | |
60379ES76 | Urea, molecular biology grade 尿素，分子生物学级 | 500 g | 88.00 | |
60379ES90 | Urea, molecular biology grade 尿素，分子生物学级 | 5 kg | 618.00 |
2）谷胱甘肽琼脂糖树脂
GSTSep Glutathione Agarose Resin是一种GST标签蛋白纯化树脂，结构上以4%琼脂糖凝胶为基质，通过12个原子的间隔臂，用化学方法共价结合还原型谷胱甘肽制作而成。该设计使树脂的纯化效率得到了较大提高，使其每毫升基质可承载>20 mg GST融合蛋白。本品特异性好，性价比高，可以一步纯化各种表达系统中谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽重组衍生物。
产品特点
&& 高结合量，>20 mg GST protein/mL基质（40 kDa）；
&& 高流速。
产品信息
应用 | 货号 | 品名 | 规格 | 价格（元） |
GST 标签 蛋白 纯化 | 20507ES10 | GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽琼脂糖树脂（用于GST标签蛋白纯化） | 10 mL | 928.00 |
20507ES50 | GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽琼脂糖树脂（用于GST标签蛋白纯化） | 50 mL | 3848.00 | |
20507ES60 | GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽琼脂糖树脂（用于GST标签蛋白纯化） | 100 mL | 6898.00 | |
20508ES10 | GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速纯化树脂（用于GST标签蛋白纯化） | 10 mL | 1238.00 | |
20508ES50 | GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速纯化树脂（用于GST标签蛋白纯化） | 50 mL | 4568.00 | |
20508ES60 | GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速纯化树脂（用于GST标签蛋白纯化） | 100 mL | 7928.00 | |
20509ES03 | GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1ML（GST标签蛋白纯化预装柱，1ML） | 1 mL | 328.00 | |
20509ES08 | GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1ML（GST标签蛋白纯化预装柱，1ML） | 5×1 mL | 1348.00 | |
20510ES08 | GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 5ML（GST标签蛋白纯化预装柱，5ML） | 5 mL | 938.00 | |
20510ES25 | GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 5ML(GST标签蛋白纯化预装柱，5ML） | 5×5 mL | 3928.00 | |
洗脱试剂 | 60342ES10 | Glutathione,Reduced (GSH) 还原型谷胱甘肽（GSH） | 10 g | 209.00 |
3）巯基蛋白琼脂糖偶联树脂
SulfoLink Coupling Agarose Resin是一类预活化树脂，其纯化原理在于可以通过与巯基或者氨基的反应实现抗原的固定化，进而利用抗原抗体的特异性反应对免疫血清中的抗体进行高效纯化，是多克隆抗体生产中不可缺少的纯化介质。
产品信息
应用 | 货号 | 品名 | 规格 | 价格（元） |
抗体的 纯化 | 20511ES08 | SulfoLink Coupling Agarose Resin 巯基蛋白琼脂糖偶联树脂 | 5 mL | 928.00 |
20511ES25 | SulfoLink Coupling Agarose Resin 巯基蛋白琼脂糖偶联树脂 | 25 mL | 2388.00 | |
20511ES60 | SulfoLink Coupling Agarose Resin 巯基蛋白琼脂糖偶联树脂 | 100 mL | 8548.00 |
4）MBP标签蛋白高度交联纯化树脂
MBPSep Dextrin Agarose Resin是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白（MBP）标签蛋白的亲和层析介质，MBP可促进连接蛋白的正确折叠，增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步纯化MBP融合蛋白，结合的融合蛋白可以用10mM麦芽糖进行温和洗脱，保护了目的蛋白的活性，MBP融合部分后续可用位点特异性蛋白酶切除。
产品信息
应用 | 货号 | 品名 | 规格 | 价格（元） |
MBP 标签 蛋白 纯化 | 20515ES08 | MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF （MBP标签蛋白高度交联纯化树脂） | 5 mL | 858.00 |
20515ES25 | MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF （MBP标签蛋白高度交联纯化树脂） | 25 mL | 2958.00 | |
20516ES03 | MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1ML （MBP标签蛋白纯化预装柱，1ML） | 1 mL | 358.00 | |
20516ES08 | MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1ML （MBP标签蛋白纯化预装柱，1ML） | 5×1mL | 1258.00 | |
20517ES03 | MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 5ML （MBP标签蛋白纯化预装柱，5ML） | 5 mL | 1238.00 | |
20517ES25 | MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 5ML （MBP标签蛋白纯化预装柱，5ML） | 5×5mL | 3958.00 |
HB190620
