来宝网 2017/6/15点击1942次
Hieff NGSTM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina?
——DNA高效建库
1、研发背景
快速精准建库产品，您用对了吗？
DNA文库制备是高通量测序的核心环节，文库的产量与质量直接决定了测序数据的产量与质量。随着NGS技术在测序通量、成本以及应用领域方面的不断发展，DNA建库的方法也在不断作相应的优化与改进，以使其更简单、更快速、更高性价比以及更易实现自动化，以满足更多的市场需求。但目前市面上多数试剂盒的建库方法，仍然是耗时、昂贵且操作非常繁琐的。当然，其中不乏有一些方法能够实现相对较快的文库制备，如将DNA末端磷酸化、加A尾及接头连接等步骤合并进行，或者基于转座酶技术在单管内实现片段化和接头添加等步骤，但部分这些方法在性能方面却存在一定的缺陷：如仅适用于DNA量充足且品质较好的样本，只能将少量的Input DNA片段化，常出现形成G尾、聚合物等副反应，或表现出一定的偏好性等，这些情况的产生显著降低了DNA文库的转化率、复杂度，并且极大影响后续测序数据在覆盖度、准确度等方面的质量。
Yeasen MaxUp，您的更优之选！
翊圣生物根据现状，为更好的满足市场需求，集中海内外高通量测序领域的优秀科研人员，历时数年，开发了Hieff NGSTM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina?常规DNA建库试剂盒，从产品设计，产品原料选用，产品性能优化，产品性能验证，产品标准制定，到产品成型，产品规模化生产，每一步都在严苛的标准、精细的研究中，不断实现产品质的飞跃。
Hieff NGSTM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina?在文库产量与质量方面表现卓越：DNA的文库转化率相对进口同款品牌至少高出20%，获得更高的文库产量所需的扩增循环数更低，且经测序检测其无偏好性，此外，在建库速度上、简便性、性价比以及样本适用性方面，不逊于国际一流产品。
2、产品描述
Hieff NGSTM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina?是针对Illumina?高通量测序平台专业开发设计的建库试剂盒。本试剂盒可将低至1 ng的微量片段化DNA制备成适用于Illumina?测序平台的专用文库。Hieff NGSTM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina?整合了多个酶反应步骤，提供简并的、线性化的操作方案，显著提高DNA建库效率。此外，Hieff NGSTM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina?使用精心优化的配方体系，广泛适用于各种DNA样本。
翊圣生物具有严格的生产工艺，保证提供的每批次产品都经过严格的质量控制和功能验证，最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。
1）2.75小时高效建库
Hieff NGSTM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina?整合了多个酶反应步骤，提供简并的、线性化的操作方案，将DNA建库时间缩短至2.75小时以内，并显著降低手动操作时间。
图1 Hieff NGSTM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina?相对进口品牌N*同类型产品，建库更快。
2）文库转化率高
文库转化率，即DNA片段转化为双端带特定接头DNA片段的效率，是衡量建库试剂盒效率的重要指标。文库转化率强烈影响文库的多样性和质量，文库转化率高在一定程度上意味着测序覆盖度更好。
图2 Hieff NGSTM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina?相对进口品牌N同类型产品具有更高的文库转化率。
样本：片段化E.coli gDNA。接头比例：按各款试剂盒中推荐的数值。测定方法：连接完整接头后，qPCR文库定量。
3）建库循环数少
获得特定产量文库所需的PCR循环数，是衡量试剂盒建库效率的另一重要指标。PCR循环数不足，可能造成文库产量低；PCR循环数过高，又将导致文库偏好性增加、重复度增加、嵌合产物增加、扩增突变积累等多种不良后果。在获得相同产量文库时，使用的PCR循环数越少，表示试剂盒的建库效率更高。
表1 Hieff NGSTM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina?相对进口品牌N*同类型产品具有更高的建库效率。
Input DNA（ng） | Number of cycles required to generate | |||
100 ng | 1000 ng | |||
Yeasen MaxUp | 品牌N* | Yeasen MaxUp | 品牌N* | |
500 | 0 | 1-2 | 3-4 | 3-4 |
100 | 3-4 | 5-7 | 7-8 | 8-9 |
50 | 6-7 | 7-9 | 8-9 | 11-13 |
10 | 9-10 | 11-13 | 12-13 | 14-16 |
1 | 12-14 | - | 16-17 | - |
4）优异的文库质量
使用Hieff NGSTM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina?对100 ng E.coli gDNA建库，所得文库均为单一条带，正态分布，无杂峰，片段大小符合测序要求。
图3 Hieff NGSTM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina?所建文库Agilent 2100 Bioanalyzer检测。
建库样本：片段化E. coli gDNA。双轮分选比例（Post-adapter Ligation）：0.6×/0.2×和0.55×/0.15×。
5）卓越的测序质量
测序数据是反映建库试剂盒性能的最重要指标。使用Hieff NGSTM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina?和N*品牌同类型产品用于大肠杆菌基因组DNA文库构建，并使用Illumina? Hiseq 4000平台，以PE150模式进行测序。所得Q30、碱基质量，Mapped Reads以及Coverage等方面均与品牌N*同类型产品相当，表现优异。
表2 大肠杆菌K12菌株基因组DNA测序数据统计
Samples | Clean Reads | Clean Base(G) | Q30(%) | Mapped Reads(%) | Coverage(%) | Average Depth(X) |
100 ng Yeasen | 6,667,866 | 1.018 | 91.83 | 92.25 | 96.92 | 187.34 |
100 ng 品牌N* | 6,970,936 | 1.069 | 92.86 | 92.11 | 97.21 | 176.90 |
图4 100 ng_Yeasen样品测序数据Fastqc报告（左：序列质量分布；右：碱基分布）。
6）最优的性价比
Yeasen致力于为您提供性价比最高的产品！！
图5 Hieff NGSTM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina?性价比更高。
3、产品应用：
将1 ng-1 μg片段化DNA制备成适用于Illumina?测序平台的专用文库。
4、文献引用
[1] Head S R, Komori H K, LaMere S A, et al. Library construction for next-generation sequencing: overviews and challenges[J]. Biotechniques, 2014, 56(2): 61.
[2] Parkinson N J, Maslau S, Ferneyhough B, et al. Preparation of high-quality next-generation sequencing libraries from picogram quantities of target DNA[J]. Genome research, 2012, 22(1): 125-133.
[3] van Dijk E L, Jaszczyszyn Y, Thermes C. Library preparation methods for next-generation sequencing: tone down the bias[J]. Experimental cell research, 2014, 322(1): 12-20.
[4] Wolf K, O'Neil D, Schroeer S, et al. Next‐Generation Sequencing Library Preparation from FFPE Tissue Samples[J]. Current Protocols in Molecular Biology, 2016: 7.24. 1-7.24. 14.
[5] Apone L, Liu P, Panchapakesa V, et al. Enhancing clinical utility of NGS with reduced bias, low DNA input, library construction[J]. 2016.
5、常见问题
Q: 该款试剂盒适用于哪些样本的建库？
A：本试剂盒适用于所有样本的DNA建库。
Q: 在使用该款试剂盒时，不同类型的样本的Input DNA量应为多少？
A：Input DNA特指投入末端修复/dA尾添加步骤中的DNA。下表列举了本试剂盒在常见应用中推荐的Input DNA量。
表1 常见应用中推荐Input DNA量
应用 | 样本类型 | 推荐Input DNA量 |
全基因组测序 | 复杂基因组 | 50 ng-1 μg |
靶向捕获测序 | 复杂基因组 | 10 ng-1 μg |
全基因组测序，靶向捕获测序 | FFPE DNA | ≥50 ng |
全基因组测序，靶向捕获测序 | cfDNA/ctDNA | ≥1 ng |
全基因组测序 | 微生物基因组 | 1 ng-1 μg |
免疫共沉淀测序 | ChIP-DNA | ≥1 ng |
靶向测序 | 扩增子 | ≥1 ng |
【注】：上表为使用高质量DNA时推荐的Input DNA量，当Input DNA质量较差或需要进行片段分选时，应适当上调使用量。
Q: 文库制备过程中，是否需要片段长度分选？
A：文库制备过程中需要进行片段长度分选。分选步骤可选择在末端修复/dA尾添加之前，或在接头连接之后，或在文库扩增之后进行。当Input DNA质量≥50 ng，您可选择在接头连接后分选；如Input DNA质量<50 ng，建议您在文库扩增后进行分选。
Q: 使用该款试剂盒所得的文库是否可以用于Ion Torrent平台？
A：本款试剂盒针对Illumina?平台开发，所得文库仅适用于Illumina?平台。
Q: 产品的有效期与保存方法？
A：产品所有组分-20°C保存，有效期1年。
Q: 纯化和分选步骤，可以使用哪些磁珠？
A：纯化和分选步骤，建议使用Hieff NGSTM DNA Selection Beads（Cat#12601）或AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效产品。
6、订购信息
产品 | 货号 | 规格 | 价格（元） |
Hieff NGSTM MaxUp DNA Library Prep Kit for Illumina | 12201ES08 | 8 libraries | 1726.00 |
12201ES24 | 24 libraries | 4626.00 | |
12201ES96 | 96 libraries | 16626.00 |
7、相关产品推荐
测序文库制备，您还可能用到
建库试剂盒 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hieff NGSTM Nano DNA Library Prep Kit for Illumina? | 12202ES08 | 8 libraries | 2456.00 |
12202ES24 | 24 libraries | 6486.00 | |
12202ES96 | 96 libraries | 23567.00 | |
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建库模块 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hieff NGSTM DNA Selection Beads（Superior Ampure XP alternative） | 12601ES03 | 1 mL | 296.00 |
12601ES08 | 5 mL | 986.00 | |
12601ES56 | 60 mL | 6286.00 | |
12601ES75 | 450 mL | 26186.00 | |
Hieff NGSTM End Repair Module | 12605ES20 | 20 T | 1466.00 |
Hieff NGSTM dA-Tailing Module | 12606ES20 | 20 T | 1766.00 |
Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module | 12607ES24 | 24 T | 3266.00 |
12607ES96 | 96 T | 10866.00 | |
Hieff NGSTM Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module | 12608ES24 | 24 T | 2066.00 |
12608ES96 | 96 T | 6166.00 | |
Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent | 12609ES50T | 50 T | 1466.00 |
Hieff NGSTM Single-Indexed Adapter Kit for Illumina?, Set 1 | 12611ES24 | 24 T | 1166.00 |
12611ES96 | 96 T | 4366.00 | |
Hieff NGSTM Single-Indexed Adapter Kit for Illumina?, Set 2 | 12612ES24 | 24 T | 1166.00 |
12612ES96 | 96 T | 4366.00 | |
Hieff NGSTM Dual-Indexed Adapter Kit for Illumina? | 12614ES96 | 96 T | 6566.00 |
Hieff NGSTM Complete Adapter Kit for Illumina?, Set 1 | 12615ES04 | 12×4 T | 1256.00 |
12615ES16 | 12×16 T | 4536.00 | |
Hieff NGSTM Complete Adapter Kit for Illumina?, Set 2 | 12616ES04 | 12×4 T | 1256.00 |
12616ES16 | 12×16 T | 4536.00 | |
2×Super CanaceTM High-Fidelity Mix for Library Amplification | 12620ES03 | 1 mL | 526.00 |
12620ES08 | 5×1 mL | 1426.00 | |
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文库定量 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Hieff NGSTM Library Quantification Kit for Illumina?, qPCR Master Mix | 12302ES05 | 500 T | 1526.00 |
Hieff NGSTM Library Quantification Kit for Illumina?, DNA Standard (1-6) | 12307ES09 | 6×96 μL | 2126.00 |
Picogreen dsDNA Quantitation Reagent 双链DNA（dsDNA）定量试剂 | 10224ES01 | 100 μL | 518.00 |
10224ES02 | 5×100 μL | 2118.00 | |
10224ES03 | 10×100 μL | 3848.00 | |
10224ES04 | 1×1 mL | 3768.00 | |
Picogreen dsDNA Assay Kit 双链DNA（dsDNA）定量检测试剂盒 | 10225ES84 | 2000 T | 4238.00 |
更多产品信息请拨打400-6111-883或登陆http://www.yeasen.com/
