来宝网 2017/5/3点击1383次
无需纯化DNA的多样本直接PCR
——无需基因组纯化，一步完成基因型鉴定
背景
动物基因型鉴定或植物基因型分型等实验，经常需要通过抽提纯化基因组DNA，以备后续进行PCR扩增目的基因进而判定基因型。当大规模批量化进行多样本基因型鉴定分析时，抽提基因组的步骤不但费时费力，而且大大增加实验成本。
产品介绍
翊圣生物开发出独特的蛋白酶裂解缓冲体系，可最大程度地释放不同来源类型样品的基因组DNA。通过改造DNA聚合酶，优化PCR反应体系，大大地提升了DNA聚合酶对PCR抑制物的抵抗力。基于此，翊圣生物开发出的直接PCR试剂盒系列产品，可快速高效的进行PCR反应。
翊圣主要提供4类Direct PCR Kit，包括动物直接PCR试剂盒、小鼠直接PCR试剂盒、植物直接PCR试剂盒和血液直接PCR试剂盒。
工作原理
产品优势
★样品需求量小——少到5mg动物组织、1mg植物叶片即可进行实验。
★操作简便——使用独特的蛋白酶裂解体系，无需研磨、破碎等特殊处理，操作简便。
★处理快速——20min快速释放质量稳定的基因组DNA。
★粗制样品PCR——无需进行费时而昂贵的DNA纯化。
★扩增性能强——优化的PCR体系，使PCR具有更高的特异性、更强的PCR反应抑制物耐受性。
产品应用
植物基因型分型、动物基因型鉴定、血液中微生物鉴定等。
产品选择指南
产品特点 | Animal Tissue Direct PCR Kit 动物组织直接PCR试剂盒 | Mouse Tissue Direct PCR Kit 小鼠组织直接PCR试剂盒 | Plant Tissue Direct PCR kit 植物组织直接PCR试剂盒 | Animal Blood Dicrect PCR Kit 全血直接PCR试剂盒 |
适用生物类型 | 小鼠、兔子、鸟类、淡水鱼 | 小鼠、大鼠 | 水稻、玉米、烟草、油菜、小麦、大豆等多糖多酚含量低的植物 | 人血、鼠血、鸡血、鸟血、牛血、狗血 |
适用组织类型/材料类型 | 脑、心脏、肝脏、胰脏、肾脏、脾脏、睾丸、肌肉、羽毛末端 | 鼠尾、鼠耳、脚趾（带肌肉）和其他脏器 | 叶片、幼苗 | EDTA、Heparin 抗凝全血、血液的采集卡、冷冻血和抗凝血等 |
使用量（范围） | 5-10mg | 5-10mg | 3-5mg（5-7mm） | 人血2-45%；鼠血2-20%；采集卡1-4mm |
裂解方式 | 蛋白酶裂解 | 无需裂解 | ||
裂解时间 | 65℃，10-30min | 65℃，10-30min | 95℃，10min | - |
裂解液保存时间 | 4℃，2天；-20℃，10-20天 | - | ||
PCR产物最适长度 | ＜1kb | ＜1kb | ＜1kb | ＜1kb |
PCR产物是否加A | 裂解反应体系加A效率不定 | |||
50μL PCR反应体系中裂解产物使用量 | 0.5-5μL，不可超过10μL | 0.5-5μL，不可超过10μL | 5-10μL，不可超过15μL | 人血2-45%；鼠血2-20%；采集卡1-4mm |
实验数据
FAQ
常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
阳性对照、待测样本均无条带。 | PCR反应体系或反应条件不合适。 | 使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。 |
PCR试剂保存不当失去活性。 | 2× PCR Mix应保存于-20℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在4℃短时间存放。 | |
引物设计问题。 | 尝试重新设计引物进行检查。 | |
阳性对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱。 | 不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。 | 使用新鲜的试剂。 |
加入组织裂解液过量。 | 增大反应体系，或减少裂解液的用量。 | |
样本裂解混合液保存不当或保存时间过久，DNA基因组已经降解。 | 裂解混合液液可在4℃保存2-3天，尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。 | |
模板加入量不适合。 | 在反应体系10-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时，可以降模板浓度调节到低于10%的范围。 | |
PCR循环数不足。 | 增加PCR的循环数，推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂，PCR反应要比用纯化的DNA模板多5-10个循环为佳。 | |
非特异性扩增 | PCR退火温度太低，循环数、引物浓度或模板浓度太高。 | 增加PCR退火温度，降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。 |
PCR引物错配。 | 重新设计PCR引物。 | |
配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。 | PCR反应体系的配制在低温下进行，配制完成后尽快进行PCR扩增反应。 | |
阴性对照出现目的条带 | 操作工具或试剂污染。 | 实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。 |
样本间交叉污染。 | 每个取样器只对一个样本使用；或取完一个样本后，将取样器刃口浸入2%的次氯酸钠溶液中，反复涮洗，然后用干净的纸巾擦干残液。 |
订购信息
产品货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） |
10180ES50 | Animal Tissue Direct PCR Kit 动物组织直接PCR试剂盒 | 50T | 326.00 |
10180ES70 | 200T | 1236.00 | |
10181ES50 | Mouse Tissue Direct PCR Kit 小鼠组织直接PCR试剂盒 | 50T | 326.00 |
10181ES70 | 200T | 1236.00 | |
10182ES50 | Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR试剂盒 | 50T | 326.00 |
10182ES70 | 200T | 1236.00 | |
10183ES50 | Plant Tissue PCR Kit 植物组织直接PCR试剂盒 | 50T | 326.00 |
10183ES70 | 200T | 1236.00 |
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产品货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） |
10102ES03 | 2×HieffTM PCR Master Mix (With Dye) | 1mL | 40.00 |
10102ES08 | 5×1mL | 150.00 |
