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Hieff^TMqPCR SYBR^? Green Master Mix

让您的实验数据赢在起跑线上，Yeasen高性能定量试剂为您加油

HieffqPCR SYBR Green Master Mix是2×实时定量PCR扩增的预混合溶液。Mix中含有热启动Hieff Taq DNA Poly-merase、SYBRGreen I、dNTPs、镁离子。预混ROX。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行实时荧光定量PCR，大大简化操作过程，降低污染几率。

操作方便——预混ROX。

精准性好，线性检测范围广——配体法热启动酶随温度变化实时调节DNA聚合酶活性。

重复性高——双阳离子缓冲液保证热启动酶活稳定。

扩增性能优良——缓冲液中含有PCR增强剂。

特异性高——添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子。

Hieff^TM qPCR Mix 的优势所在！

1. 线性检测范围广

图1. 以质粒DNA（10⁶-10¹拷贝/ul）为模板，10倍梯度稀释，扩增拟南芥Actin基因。结果显示Hieff qPCR SYBRGreen Master Mix可在宽广的定量区域内获得良好的线性关系，扩增效率高，扩增高度特异，线性关系良好。

2. 精准性好

图2. 以人293T细胞cDNA为模板，经不同倍数的梯度（5倍或2倍）稀释，扩增Actin基因。Hieff qPCR SYBR^?Green Master Mix可精确分辨5倍，甚至低至2倍的模板量差异。而且在宽广的定量区域内表现良好。

3. 重复性高

图3. 以人293T细胞cDNA为模板，使用Hieff qPCR SYBRGreen Master Mix进行90孔平行重复实验扩增人Actin基因，本产品表现出极好的扩增重复性。

4. 扩增性能优良

图4. 以10倍梯度稀释的人293T细胞cDNA为模板，扩增Actin基因，与同类产品相比，Hieff^TM qPCR SYBR^?Green Master Mix扩增荧光信号更强，灵敏度更高，且复孔重复性更好。

5. 特异性高

图5. 以人293T细胞cDNA为模板，扩增4个不同基因。相较于其他品牌同类产品，Hieff^TM qPCR SYBR^?Green Master Mix扩增目的片段单一，熔解曲线表现出更少的非特异扩增峰及引物二聚体峰。

客户体验专区之样本数据

客户单位：上海交通大学

产品名称：Hieff^TM qPCR SYBR^? Green Master Mix (Low Rox Plus)（Cat. NO. 11202）

仪器型号：ABI 7500

实验设计：材料：人293T细胞。反转录RNA起始量：2 μg。cDNA稀释倍数：2倍。定量体系：20 μl。检测基因：Actin、FN。

结果分析：较其他品牌同类产品，翊圣特异性更好，Ct值整体低1-2，且重复性较好。

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客户单位：清华大学医学院

产品名称：Hieff^TM qPCR SYBR^? Green Master Mix (High Rox Plus)（Cat. NO. 11203）

仪器型号：ABI Step One Plus

实验设计：材料：小鼠腹腔巨噬细胞。反转录RNA起始量：1 μg。cDNA稀释倍数：20倍。定量体系：20 μl。检测基因：STAT1。

结果分析：两家产品熔解曲线均为单一峰，与其他品牌同类产品相比，翊圣Ct值更小，扩增效率较高。

试剂选择指南【参照仪器型号】

Cat. NO. 11201. Hieff^? qPCR SYBR^?Green Master Mix (No Rox) ：

Bio-Rad: CFX96^TM, CFX384^TM, iCycler iQ^TM, iQ^TM5, MyiQ^TM, MiniOpticon^TM, Opticon^?,Opticon^? 2, Chromo4^TM;

Eppendorf: Mastercycler^? ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen: Corbett Rotor-Gene^?Q, Rotor-Gene^? 3000, Rotor-Gene^? 6000;

Roche Applied Science: LightCycler^?480, LightCycler^?2.0; Lightcycler^?96;

Thermo Scientific:PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler^?; Illumina: Eco qPCR.

Cat. NO. 11202. Hieff^? qPCR SYBR^?Green Master Mix (Low Rox Plus) ：

Applied Biosystems:7500, 7500 Fast, ViiA^?7, QuantStudio^? Dx, QuantStudio^?3and 5, QuantStudio^?6,7,12k Flex;

Stratagene: MX3000P^?, MX3005P^?, MX4000P^?.

Cat. NO. 11203. Hieff? qPCR SYBR? Green Master Mix (High Rox Plus) ：

Applied Biosystems:5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne^?, StepOne Plus^?.

FAQ

Q：溶解曲线出现双峰，应如何优化实验？

A：熔解曲线出现双峰，需要通过DNA琼脂糖凝胶电泳判断非目标峰是引物二聚体还是非特异性扩增。

如果是引物二聚体，建议降低引物浓度，或者重新设计扩增效率高的引物。

如果是非特异性扩增，请提高退火温度，或者重新设计更高特异性的引物。

Q：定量结果中，Ct值多大比较合适？

A：Ct值落在 20-30 之间时，定量分析最准确；

Ct值小于 10，需要将稀释模板后，重新进行实验；

Ct值介于 30-35 之间，需要提高模板浓度，或者增大反应体系的体积，以提高扩增效率，保证结果分析的准确性；

Ct值大于 35 时，检测结果无法定量分析基因的表达量，但可用于定性分析。

Q：如何提高实验重复性？

A：使用性能较好的移液枪；

qPCR mix使用前充分混匀；

定期校准仪器：定量PCR仪不同位置温度控制不一致；

模板浓度太低：模板浓度越稀，重复性越差，减少模板稀释度或提高加样体积；

大反应体系进行实验：将模板做高倍稀释，以大体积加入反应体系中；

将引物和qPCR Mix混合配成大体系，混匀：总体积对应的加样孔数要比计划的加样孔数多1-2个。

产品相关文献

【1】Cui D, Zhang C, Liu B. Regression of Gastric Cancer by Systemic Injection of RNA Nanoparticles Carrying both Ligand and siRNA. Sci Rep. 2015 Jul 3;5:10726. doi: 10.1038/srep10726. （上海交通大学）

【2】Lu Y, Wan J. Regulated intramembrane proteolysis of the AXL receptor kinase generates an intracellular domain that localizes in the nucleus of cancer cells. FASEB J. 2016 Dec 29. pii: fj.201600702R. doi: 10.1096/fj.201600702R. （教育部直属系统生物医学重点实验室）

【3】Song D, Gui J, Liu C. Suppression of PtrDUF579-3 Expression Causes Structural Changes of the Glucuronoxylan in Populus. Front Plant Sci. 2016 Apr 11;7:493. doi: 10.3389/fpls.2016.00493. eCollection 2016.（中科院植物生理生态所）

【4】Wang Q. Fluorescent carbon dots as an efficient siRNA nanocarrier for its interference therapy in gastric cancer cells. J Nanobiotechnology. 2014 Dec 30;12:58. doi: 10.1186/s12951-014-0058-0. （上海交通大学）

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