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大鼠血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)酶联免疫分析(ELISA)

试剂盒使用说明书

本试剂仅供研究使用 

目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)的含量。

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)水平。用纯化的大鼠血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)，再与HRP标记的血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中大鼠血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)浓度。

试剂盒组成：

操作步骤

1.        标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L)。

2.         加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.         温育：用封板膜封板后置37