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一、免疫荧光组织化学的细胞核复染
免疫荧光染色后，为了衬托出细胞和组织的固有形态结构，增加特异性荧光的可见性，缩短照相时间，根据特异性结合荧光染料发射光的颜色，选择不同颜色的复染荧光染料。wd3

(一)蓝色荧光复染剂
DAPI(4，6—二氨基—2—苯基吲哚)是经典的细胞核和染色体复染剂。DAPI可选择性与dsDNA结合，细胞质几乎没有背景染色，它的相对低水平的荧光发射不能被来自标记二抗上的绿色或红色荧光或FISH探针淹没。DAPI对活细胞有半通透性，可在固定细胞或组织切片中使用。用SlowFade和SlowFade光抗衰减剂预处理的DAPI可同时进行细胞核染色和抗衰变保护。

Hoechst 33342染料已经广泛用于活细胞细胞核染色，已有用于免疫荧光组化和FISH后的衬染，其工作浓度为0．2ug／m1(Sigma公司产品)。蓝色荧光BOBO—1核酸染料发射的荧光信号比DAPI更明亮。BOBO—1已经作为有效的复染剂进行果蝇染色体染色，并可与Cy3荧光或荧光黄标记二抗结合。

(二)绿色荧光复染剂
某些花青染料是绿色荧光核复染剂，例如YO-PRO—1染料和SyTOXGreen染料。花青染料不仅可作为免疫荧光组化染色的复染剂，还可作为细胞凋亡、细胞周期研究的荧光染料，SYTOXGkeen染料已经用来追踪凋亡细胞的细胞核形态改变，是VY-brant凋亡分析试剂盒的一种成分。

(三)黄色荧光复染剂
Hoechsts769121和Trueblue染料可作为免疫荧光组化黄色荧光的复染剂，染成蓝色。

(四)橙色和红色荧光复染剂
碘化丙锭(propidiumiodide，P1)是细胞核和染色体首选的红色荧光复染剂。PI是进行绿色荧光标记(例如AlexaFluor 488、俄勒冈绿、BodipyFL、荧光黄等荧光素)的复染剂。其次是BOBO-3和SYTOX橙。

二、染色标本的保存
标本染色后最好立刻在荧光显微镜下观察，染色当天荧光最强。但由于种种原因，标本染色后不能及时观察，需保存。用缓冲甘油封片的标本，保存在4~C中，过夜后特异性荧光强度减弱约25％，保存一周后大约减弱60％，如用聚乙烯醇(ELvan01)封片的标本，保存几周后特异性荧光的强度才有所减弱。罗丹明荧光素在聚乙烯醇中溶解，因此，用罗丹明标记的抗体不能用聚乙烯醇封片介质封片，但可用荧光信号增强封片剂封片，此封片介质不但能保持荧光信号不减弱，而且有增强效果。

三、封片介质的制备
1．缓冲甘油封片介质(常用)
0．5mol／l碳酸盐缓冲液(pH8．5)，lOml；无荧光甘油(AR级)，90ml。
混合后在搅拌器上充分混匀。
2．聚乙烯醇—缓冲甘油混合介质
0．5mol／L碳酸盐缓冲液(pH8．5)，40ml；1％聚乙烯醇，lOml；分析纯甘油，lOml。三液混合后，不断搅拌6h，72000g离心1h，吸取上清4℃保存备用。
3．荧光信号增强封片剂
聚乙烯醇40～88，4．8g；分析纯甘油，12ml；蒸馏水，12ml；0．2mol／L Tris盐(pH8．5)，24ml；l，4—重氮双环—[2，2，2]—辛烷，L 25g(终浓度约2．5％)。
配制方法：取4．8g聚乙烯醇40～88和12ml甘油，加入到12ml蒸馏水和0．2mol／L
Tris—HCl(pH8．5)的缓冲液中加热到50℃，并搅拌10min，待完全溶解后5000g离心15min，取上清到小烧杯中，边搅拌边加入1．25g 1，4—重氮双环—[2，2，2]—辛烷(约2．5％)，溶解后，分装保存于一20℃中。