来宝网 2012/6/4点击1486次
食品安全国家标准
婴幼儿食品和乳品中反式脂肪酸的测定
1 范围
本标准规定了婴幼儿食品和乳品中反式脂肪酸的测定方法。
本标准适用于婴幼儿食品和乳品中反式脂肪酸的测定。
2 规范性引用文件
本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
3 原理
试样中的脂肪用溶剂提取。提取物在碱性条件下与甲醇反应生成脂肪酸甲酯，用配有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪分离顺式脂肪酸甲酯和反式脂肪酸甲酯，外标法定量。
4 试剂和材料
除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
4.1 石油醚：沸程 30 ℃～60 ℃。
4.2 乙醚（C4H10O ）。
4.3 乙醇（C2H6O ）：体积分数为95 % 。
4.4 正己烷（C6H14 ）：色谱纯。
4.5 氨水（NH3·H2O ）：25 %～28 % 。
4.6 氢氧化钾（KOH ）。
4.7 甲醇（CH4O ）。
4.8 淀粉酶：活力单位：1.5 U/mg，根据活力单位大小调整用量。
4.9 无水硫酸钠（Na2 SO4 )。
4.10 氢氧化钾- 甲醇溶液（4 mol/L ）：称取26.4 g 氢氧化钾，溶于约 80 mL 甲醇中。冷却至室温，用甲醇定容至 100 mL，加入约 5g 无水硫酸钠（4.9 ），充分搅拌后过滤，保留滤液。
4.11 脂肪酸甲酯标准品：十八酸甲酯（C18:0 ）、反-9-十八碳一烯酸甲酯（C18:1-9t ）、顺-9-十八碳一烯酸甲酯（C18:1-9c ）、反-9，12-十八碳二烯酸甲酯（C18:2-9t，12t）、顺-9，12-十八碳二烯酸甲酯（C18:2-9c，12c），放入冰箱在-15 ℃以下保存。
4.12 反式脂肪酸甲酯标准贮备液：浓度分别为 10.0 mg/ mL。称取500 mg （精确到0.1 mg ）反-9-十八碳一烯酸甲酯标准品和反-9，12-十八碳二烯酸甲酯标准品，分别用正己烷溶解并定容至 50.0 mL 。放入冰箱在-15 ℃以下保存。
4.13 反式脂肪酸甲酯标准中间液：浓度分别为 1.0 mg/ mL。分别吸取两种反式脂肪酸甲酯标准储备液（4.12 ）10.0 mL 入同一 100 mL 容量瓶中并用正己烷（4.4 ）定容。临用前配制。亦作为标准曲线最高点。
4.14 反式脂肪酸甲酯标准工作液：临用前配制。分别吸取反式脂肪酸甲酯标准中间液（4.13 ），0、2.0 、4.0 、6.0、8.0、10.0 mL 于 10 mL 容量瓶中，用正己烷定容，此浓度即为 0、0.2、0.4、0.6、0.8 、1.0 mg/mL 的标准工作液。
4.15 脂肪酸甲酯标准混合液：将脂肪酸甲酯标准品（4.11 ），用正己烷配制成脂肪酸甲酯标准混合溶液，其中每种成分的浓度约为 0.05 mg/mL 至 0.5 mg/mL 。用于进行顺反脂肪酸甲酯分离程度及定性的鉴定。
4.16 刚果红溶液：称取 1 g 刚果红溶解稀释至 100 mL。
5 仪器和设备
5.1 气相色谱仪，带氢火焰离子化检测器。
5.2 旋转蒸发器。
5.3 恒温水浴：40 ℃～80 ℃。
5.4 涡旋振荡器。
5.5 离心机：转速≥4000 转/分钟。
5.6 毛氏抽脂瓶。
5.7 毛氏抽脂瓶摇混器。
5.8 脂肪收集瓶：圆底烧瓶，与旋转蒸发仪配套。
5.9 天平：感量为 0.1 mg 。
6 分析步骤
6.1 试样处理
6.1.1 含淀粉的试样：称取混合均匀的固体试样约 1.5 g，液体试样约 5 g（精确到0.1 mg ）于毛氏抽脂瓶中，加入约 0.1 g 淀粉酶（酶活力 1.5 U/mg），混合均匀后，加入 8 mL～10 mL 45 ℃±2 ℃的水摇匀。盖上瓶塞置于 55 ℃±2 ℃水浴（5.3 ）中2 h ，每隔 10min 摇混一次。加入两滴约 0.1 mol/L 的碘溶液，检验淀粉是否水解完全。若无蓝色出现，则水解完全，否则将毛氏抽脂瓶重新置于水浴中，直至蓝色消失，取出冷却至室温。
6.1.2 不含淀粉的试样：称取混合均匀的固体试样约 1.5 g，液体试样约 10g （精确到0.1 mg ）于毛氏抽脂瓶（5.6 ）中，加入 10 mL 45 ℃±2 ℃的水，将试样洗入毛氏抽脂瓶（5.6 ）的小球中，充分混合，直到试样完全散开，冷却至室温。
6.1.3 脂肪的提取：向毛氏抽脂瓶（5.6 ）中加入3.0 mL 氨水（4.5 ），混匀。置于60 ℃±2 ℃水浴（5.3 ）中 15 min～20 min ，冷却至室温。加入 10 mL 乙醇（4.3 ）和 1 滴刚果红溶液（4.16 ），混匀。再加入25mL 乙醚（4.2 ），塞上软木塞，放到毛氏抽脂瓶（5.6 ）摇混器上震荡 1 min，也可采用手动振摇方式，再加入 25mL 石油醚 （4.1 ），震荡 1 min，不低于 4000 转/分钟离心分层。倾出上清液于脂肪收集瓶 （5.8 ）中，为第一次提取。在剩余试样液中再加入 5 mL 乙醇，25 mL 乙醚，25 mL 石油醚按上述操作步骤进行第二次提取。用离心机（5.5 ）离心分层后倾出上清液与第一次的上清液合并。将脂肪收集瓶（5.8 ）置于旋转蒸发器（5.2 ）上，在60 ℃±2 ℃通入氮气条件下旋转蒸发除去溶剂，保留残渣，即为脂肪。
6.1.4 脂肪酸甲酯的制备：将上述脂肪用正己烷（4.4 ）溶解并定容至 10.0 mL，取出 3.0 mL 于 10 mL具塞试管中，加入 0.3 mL 氢氧化钾- 甲醇溶液（4.10 ）。盖紧瓶盖，涡旋振荡器（5.4 ）上剧烈振摇2 min ，4000 转/分钟离心 5 min 后将上清液转入气相色谱试样瓶中，此为试样测定液。
6.2 测定
6.2.1 参考色谱条件
色谱柱：填料为氰丙基芳基聚硅氧烷的毛细管柱，柱长100 m，内径0.25 mm，膜厚0.2 µm；或同等性能的色谱柱。
进样口温度：250 ℃；载气（Ｎ2）。
检测器温度：300 ℃。
分流比：10：1。
进样量：1.0 μL 。
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