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人17-酮类固醇（17-KS）定量检测试剂盒（ELISA）

使用说明书

【人17-酮类固醇（17-KS）Elisa试剂盒试剂盒名称】

人17-酮类固醇（17-KS）定量检测试剂盒（ELISA）

【人17-酮类固醇（17-KS）Elisa试剂盒试剂盒用途】

定量检测人血清、血浆及相关液体样本中17-酮类固醇（17-KS）的含量。

【人17-酮类固醇（17-KS）Elisa试剂盒检测原理】

本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被人17-酮类固醇（17-KS）单克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人17-酮类固醇（17-KS）浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人17-酮类固醇（17-KS）含量。

【人17-酮类固醇（17-KS）Elisa试剂盒试剂盒组成】

备注：标准品（1号→6号）浓度依次为：16、8、4、2、1、0.5μg/L.

【人17-酮类固醇（17-KS）Elisa试剂盒需要而未提供的试剂和器材】

1、37℃恒温箱

2、标准规格酶标仪

3、精密移液器及一次性吸头

4、蒸馏水

5、一次性试管

6、吸水纸

【人17-酮类固醇（17-KS）Elisa试剂盒操作步骤】

1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。

7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

8、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

9、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，平板混匀器混匀30s（或用手轻轻震荡混匀30s），