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MTS细胞增殖测定试剂盒--用于增殖和细胞毒性实验中活细胞数量的定量

在各种细胞增殖检测中，使用MTS作为检测试剂具有明显优势。MTS的一个主要优点是它直接测量线粒体代谢活性，因此与MTT相比，它能更准确地评估细胞活力和生长。MTS提供了一个更快速、更灵敏、更易于使用的方案。它还比MTT有更好的线性。由MTS生成的甲臜产物保持溶解状态，因此减少了细胞培养成分干扰的风险。AkrivisBio的MTS细胞增殖检测是一种一步优化的试剂，用于在增殖和细胞毒性检测中定量活细胞。活细胞将MTS还原为有色的甲臜，这被认为是由于线粒体脱氢酶的作用。甲臜通过在490纳米处的吸光度简单地进行定量。

艾美捷MTS细胞增殖测定试剂盒：

货号：CPT-0104

规格：包含2500孔的试剂

样本类型：细胞

物种特异性：非特异性

检测方法：比色法，OD 490纳米

检测类型：定量

应用：用于增殖和细胞毒性实验中活细胞数量的定量。

储存条件：-20°C

运输温度：使用冰袋

MTS细胞增殖测定试剂盒检测组分：

-MTS试剂 10毫升（500孔）琥珀色 NM MA-0104-A2

-50毫升（2500孔）琥珀色 NM MA-0104-A3

MTS细胞增殖测定试剂盒应用：

-研究细胞增殖以及对生长因子、细胞因子、促分裂原和营养物质的反应

-研究由于有毒化合物（如抗癌药物和其他有毒物质）引起的细胞毒性

-研究抑制细胞生长或代谢活性的代谢抑制剂

储存和操作注意事项：

-将未开封的试剂盒储存在-20°C。使用前将MTS试剂置于室温。MTS试剂对光敏感，最好在弱光下使用。如果经常使用，可以在4°C下储存长达6周。长期储存时，将试剂盒储存在-20°C。

检测方案：

1. 以适当的密度培养所使用细胞类型的细胞。每孔5-100 x 10^3个细胞在200微升培养基中±待测试的化合物是MTS的适当范围。

2. 孵育细胞24-48小时。

3. 向每孔添加20微升MTS试剂，并在与步骤2相同的培养条件下孵育30分钟至4小时。

4. 轻轻摇动板子。在490纳米处测量吸光度。

注意事项：

-如果细胞在不同体积的培养基中培养（例如394孔板），请保持MTS试剂占培养基的10%。

-吸光度测量可以推迟至多18小时。为了准备延迟测量的板子，向每孔添加10微升10%的SDS以杀死细胞并停止反应。在室温下保护SDS处理的板子免受光线照射，直到进行吸光度测量。

图示：Jurkat细胞被稀释至每孔所示的数量在无血清培养基中。添加MTS试剂后，细胞被放置在37°C的培养箱中孵育一小时。然后在490纳米处的板式阅读器中读取板子。响应在每孔10 – 100 x 10^3个细胞之间高度线性。

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髓过氧化物酶活性测定试剂盒--测量每孔低于0.05mU的酶活性

髓过氧化物酶（Myeloperoxidase），一种氧化酶，在中性粒细胞中大量表达。当中性粒细胞被激活时，髓过氧化物酶（MPO）被释放到细胞外空间，在那里它催化从过氧化氢和氯离子形成次氯酸（HOCl）。次氯酸是一种非常强的氧化剂，能够杀死入侵的细菌、病毒和真菌。髓过氧化物酶的活性除了在宿主防御中的作用外，还具有代谢意义，因为它还可以氧化脂质、蛋白质和DNA，导致在慢性炎症状况（如动脉粥样硬化、慢性阻塞性肺病和神经退行性疾病）中的氧化损伤。AkrivisBio的髓过氧化物酶检测是一种简单敏感的方法，用于测量每孔低于0.05mU的酶活性。

艾美捷髓过氧化物酶活性测定试剂盒：

货号：MA-0135

孔数：100孔

样本类型：细胞裂解物、组织提取物、尿液、血清、其他生物液体

物种：所有物种

检测方法：比色法，OD 412纳米

检测类型：定量

应用：一种基于板的比色法检测，用于测量多种样本类型中髓过氧化物酶（MPO）的酶活性。

灵敏度：<0.05 mU/孔

储存条件：-20°C

运输温度：使用冰袋

髓过氧化物酶活性测定试剂盒检测组分：

-检测缓冲液25毫升WMMA-0135-A

-DTNB50微升红色MA-0135-B

-TCEP50微升透明MA-0135-C

-过氧化氢50微升蓝色MA-0135-D

-停止试剂（过氧化氢酶）冻干绿色MA-0135-E

-髓过氧化物酶阳性对照冻干紫色MA-0135-F

髓过氧化物酶活性测定试剂盒检测原理：

1.髓过氧化物酶从过氧化氢和氯离子产生次氯酸（HOCl）

2.次氯酸与牛磺酸反应形成牛磺酸氯胺

3.牛磺酸氯胺与TNB反应，TNB是DTNB的还原形式，Ellman试剂，使颜色褪去，导致吸光度下降。

储存和处理：

使用前将试剂盒储存在-20°C。使用前让检测缓冲液升温至室温。打开前短暂离心小瓶。

-检测缓冲液：按提供使用。储存在4°C。

-DTNB试剂：按提供使用。储存在4°C

-TCEP：按提供使用。储存在4°C

-过氧化氢：按提供使用。储存在4°C。

-停止试剂（过氧化氢酶）：用200微升的DIH2O重悬。储存在-20°C。

-髓过氧化物酶阳性对照：用100微升检测缓冲液重悬。储存在-20°C。

注意：如果检测将在一段时间内多次使用，请将酶（停止试剂和阳性对照）分装成方便的份量，并储存在-20°C以避免重复冻融循环。

检测方案：

1.工作溶液：

TNB试剂：为标准孔制作TNB试剂。TNB很容易氧化为DTNB，因此需要时再准备，即在要使用的当天。取2微升DTNB，2微升TCEP和196微升检测缓冲液，混合均匀并放在冰上。丢弃任何未使用的TNB试剂。

过氧化氢：为准备工作溶液，将5微升过氧化氢转移到300微升的DIH2O中。在立即使用前制作工作溶液。丢弃任何未使用的部分。

2.标准曲线：将0–10–20–30–40–50微升TNB试剂转移到96孔板上的一系列孔中。通过分别向孔中添加150、140、130、120、110和100微升的检测缓冲液，使所有孔的体积达到150微升，得到0–10–20–30–40–50纳摩尔的TNB。

3.在412纳米处读取标准曲线值。

4.样本准备：

将组织（10毫克）或细胞（10^6）在100微升的检测缓冲液中匀浆，以16,000Xg离心5分钟，以去除颗粒/细胞碎片。将清澈的上清液转移到新鲜试管中。将5-50微升转移到96孔板中。用检测缓冲液稀释血清并转移到孔中。对于中性粒细胞：取2毫升血液，使用10倍体积的红细胞裂解缓冲液（150mM氯化铵，10mM碳酸氢钠，0.1mMEDTA）裂解；在室温下孵育10分钟。以400xg离心5分钟；小心移除上清液。用1毫升1XPBS洗涤沉淀物，并以400xg离心5分钟，然后小心移除上清液。使用200微升检测缓冲液裂解沉淀物；在冰上放置10分钟。然后以16,000xg离心5分钟以去除颗粒。将清澈的上清液转移到新鲜试管中。将最多10微升的裂解液以双份转移到96孔板中，使用一个孔作为背景对照。用检测缓冲液调整所有样本和背景孔的体积至50微升。

5.阳性对照：将5微升重悬的髓过氧化物酶阳性对照转移到可选的阳性对照孔中。用检测缓冲液调整孔的体积至50微升。

6.启动反应：每个孔将需要50微升的反应混合物。向每个样本和阳性对照孔中添加50微升的反应混合物。向背景对照孔中添加50微升的背景对照混合物。混合均匀。不要向标准孔中添加反应混合物。

7.在25°C下孵育板30分钟。然后向所有样本、标准、背景对照和阳性对照孔中添加2微升停止试剂。混合并在10分钟内孵育板以停止反应。理想情况下，样本将在检测结束时给出标准曲线范围的50-90%的信号。如果30分钟后信号太低，请重复更长时间的检测。如果信号大于标准曲线范围的90%，请用较少或稀释的样本重新运行检测。如果酶活性低，2或3小时的运行时间是可以接受的。在此孵育阶段，准备TNB试剂并保持在冰上。准备足够的试剂以满足包括样本、背景对照和阳性对照在内的总孔数。每个孔将需要50微升。向每个样本、背景对照和阳性对照孔中添加50微升TNB试剂。

8.测量：添加TNB试剂后，等待5-10分钟，让TNB褪色，然后在412纳米处读取。阳性对照和样本将显示出与酶存在量成比例的颜色减少。这可以通过简单地计算OD（412纳米）背景-OD（412纳米）样本来计算。接近标准范围高端的值是可疑的，那些样本应该稀释并重新运行。

9.典型结果：

10.计算：从所有标准读数中减去0标准读数。绘制TNB标准曲线。确定标准曲线的斜率。这定义了溶液中OD/纳摩尔TNB。从配对样本吸光度值中减去背景对照孔值。这个差异对应于反应过程中消耗的TNB。将这个背景校正的吸光度除以标准曲线的斜率，得到孔中消耗的纳摩尔TNB。除以反应时间得到纳摩尔/分钟（孔中的mU酶活性）。要转换回原始样本中的酶活性：

A.将孔中的mU除以添加到孔中的样本微升数=mU/微升样本

B.将mU/微升样本乘以回收的上清液总体积=样本中的总mU酶活性

C.将样本中的总mU酶活性除以处理的原始样本毫克数（或细胞数或血液毫升数等）

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丙酮酸测定试剂盒--简单敏感的方法，适用于各种生物样本类型

丙酮酸是细胞代谢中的关键分子。它是糖酵解的最终产物，也是需氧和厌氧呼吸的初始步骤。在需氧条件下，丙酮酸进入线粒体，在那里它经历进一步的氧化，通过克雷布斯循环和氧化磷酸化产生能量丰富的分子，如ATP。或者，在厌氧条件下，丙酮酸可以转化为乳酸，再生糖酵解继续所需的辅因子NAD+。丙酮酸还作为各种生物合成途径的关键前体，包括氨基酸和脂肪酸的合成。它在能量生产和生物合成中的核心作用使丙酮酸成为细胞过程中的基本分子。AkrivisBio丙酮酸检测是一种简单敏感的方法，用于定量从低于1μM到10mM范围内的丙酮酸，适用于各种生物样本类型。

艾美捷丙酮酸测定试剂盒：

货号：MA-0129

孔数：100孔

样本类型：组织提取物、细胞裂解物、血清、血浆、尿液、其他生物液体

物种：所有物种

检测方法：比色法，OD 570纳米或荧光法，激发/发射 = 535/580纳米

检测类型：定量

应用：一种基于板的比色法/荧光法检测，用于在1 μM - 10 mM范围内定量各种生物样本中的丙酮酸。

灵敏度：1 uM-10 mM

储存条件：-20°C

运输温度：使用冰袋

丙酮酸测定试剂盒组分：

-检测缓冲液25毫升WMMA-0129-A

-ADHP溶液200微升红色MA-0129-B

-丙酮酸氧化酶/过氧化氢酶冻干绿色MA-0129-C

-丙酮酸标准品100微升黄色MA-0129-D

储存和处理：将所有组件储存在-20°C。使用前将其升至室温。打开前短暂离心小瓶。

-检测缓冲液：使用前升至室温。储存在4°C。

-ADHP溶液：升至室温以融化DMSO溶液。混合均匀，储存在-20°C。

-丙酮酸氧化酶/过氧化氢酶：加入220微升检测缓冲液溶解。储存在-20°C。

检测方案：

1.标准曲线：

a.基于吸光度的检测（样本中约100μM–10mM）：通过将10微升标准品转移到990微升检测缓冲液中，将丙酮酸标准品稀释至0.4mM。

b.基于荧光的检测（约0.2μM–100μM）：通过向990微升检测缓冲液中添加10微升标准品，然后将10微升转移到90微升检测缓冲液中，进一步稀释丙酮酸标准品至最终浓度0.04mM。

c.混合均匀。将0–5–10–15–20–25微升加入96孔板中的一系列孔中。通过添加检测缓冲液将所有孔的体积调整至50微升，为比色法检测提供0,2,4,6,8,10纳摩尔/孔的丙酮酸标准品。（荧光法检测为0,200,400,600,800,1000皮摩尔/孔）。

2.样本准备：用50微升检测缓冲液匀浆组织（10毫克）或细胞（10^6）。以16,000Xg离心5分钟，然后将5-50微升清澈上清液加入96孔板中的孔中。将唾液以16,000Xg离心5分钟，然后加入10微升到孔中。可以直接向样本孔中加入血清（10微升）。用检测缓冲液将所有孔的体积调整至50微升。

注意：

a.血清中的LDH活性可以将丙酮酸转化为乳酸。血清样本应储存在-80°C。解冻后立即使用。

b.使用10kDa旋转柱对样本进行去蛋白处理，以去除可能消耗丙酮酸的酶。

c.一些样本背景较高。因此，以双份运行样本，并使用配对孔确定背景。

d.在极少数情况下，内源性化合物可能干扰酶反应。使用配对样本，向其中一个测试样本中添加内标（吸光度2-5纳摩尔，荧光100皮摩尔），以准确测量丙酮酸（下面解释的程序）。

3.启动反应：为要运行的总孔数准备足够的反应混合物。每个孔需要50微升含有以下成分的反应混合物：

1）反应混合物：

样本/标准孔混合

背景对照混合

检测缓冲液46微升（使用荧光时47.6微升）

ADHP溶液2微升（使用荧光时0.4微升）

丙酮酸氧化酶/过氧化氢酶2微升

2）向每个含有丙酮酸标准品和测试样本的孔中加入50微升反应混合物。向背景孔中加入50微升背景对照混合。

4.测量：使用微孔板读取器在室温下通过吸光度（570纳米）或荧光（激发/发射=535/590纳米）监测反应30分钟。

5.典型结果：

6.计算：从所有标准读数中减去0标准读数。绘制丙酮酸标准曲线并确定标准曲线的斜率。该值将用于计算未知测试样本中的丙酮酸。如果运行了背景对照孔，则从每个配对未知样本中减去背景读数。将背景校正后的样本信号除以标准曲线的斜率。这给出了孔中的纳摩尔或皮摩尔丙酮酸。

对于添加了内标的样本，从未知样本中减去添加了已知量丙酮酸的未知样本。获得的信号是系统对添加量的响应。仅含有未知物的孔中丙酮酸的校正量={未知样本信号/[（添加样本信号-未知样本信号）/添加量]}

要将孔中的量转换为原始样本中的丙酮酸量：

A.孔中的丙酮酸纳摩尔数/加入孔中的样本微升数=每微升样本的丙酮酸纳摩尔数。

B.每微升样本的丙酮酸纳摩尔数X样本总体积（原始样本+稀释液体积）=样本中的总丙酮酸纳摩尔数

C.样本中的总丙酮酸纳摩尔数/组织毫克数（或细胞数或血清微升数等）=每毫克组织（细胞等）的丙酮酸纳摩尔数。

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Bovogen/艾美捷高质量胎牛血清与BSA解决方案

Bovogen Biologicals是ANZCO Foods Healthcare的一个部门，致力于研究，开发，制造和供应高质量的动物血清，纯净的动物蛋白和其他特殊生物技术产品。

艾美捷Bovogen Biologics核心产品包括胎牛血清，新生小牛血清，牛血清白蛋白和特色产品，包括免疫球蛋白，纤维蛋白原和胎球蛋白。为了满足客户的各种需求，我们为生物衍生产品提供合同冻干和生物加工服务。

各种各样的客户都在使用Bovogen Biologicals产品，其中包括：疫苗和生物制药制造商，医学和兽医研究所，人类和兽医诊断，人类营养保健和营养公司。

Bovogen专业血清：

Foetal Bovine Serum (NZ)   胎牛血清（新西兰）

Foetal Bovine Serum (Aus)   胎牛血清（澳大利亚）

Foetal Bovine Serum (FR)   胎牛血清（FR）

Foetal Bovine Serum (Other)   胎牛血清（其他）

Newborn Calf Serum   新生小牛血清

Adult Bovine Serum   成年牛血清

Bovogen纯化蛋白质：

Bovine Serum Albumin   牛血清白蛋白

Bovine Serum Albumin (Lipid Fort.)   牛血清白蛋白（脂质堡垒）

Immunoglobulin   免疫球蛋白

作为Bovogen在中国的特约合作伙伴，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的Bovogen产品以及客户订制化服务。

https://www.amyjet.com/news/Bovogen-new.shtml

Bovogen Biologicals胎牛血清(新西兰产)-验证的无菌过滤套件，闭环过滤系统

Bovogen Biologicals的胎牛血清（新西兰产）是在Bovogen Biologicals的完全验证的无菌过滤设施中，在严格的GMP条件下生产的。Bovogen Biologicals的血清遵循以下控制流程：

-验证的无菌过滤套件

-闭环过滤系统

-三重0.1μm无菌过滤过程

-均质化生物容器系统

-集成的灌装线和无菌分配系统

所采用的闭环过滤系统是完全一次性的，以确保所有产品接触部件仅使用一次。

Bovogen Biologicals FBS进行的分析测试由适当资格认证的外部实验室执行，测试结果报告在分析证书上。

Bovogen Biologicals的胎牛血清（新西兰产）无菌FBS是在闭环系统中生产的，以提供最终产品具有低内毒素和血红蛋白水平。该过程从血液收集到无菌过滤（3 x 0.1µm）在完全验证和专用的过滤设施中进行监控，以确保保持最高水平的质量。

原材料来源：

新西兰来源的原料血清是在政府兽医当局的监督下从注册的出口屠宰场收集的。根据Bovogen Biologicals的胎牛血清（新西兰产）的质量体系，Bovogen FBS的来源是完全可追溯的，并由完整的收集和生产记录支持。

艾美捷Bovogen Biologics无菌胎牛血清：

代码：SFBS-NZ

来源：新西兰

单位大小：500毫升

保质期：5年

等级：优质

外观：清澈的琥珀色液体

三重0.1μm过滤，符合FDA法规21 CFR 211.72

在澳大利亚生产

储存和处理：在-15至-40°C的温度下运输和储存。

适用性证书：Bovogen Biologicals新西兰产FBS拥有欧洲药品质量管理局（EDQM）的适用性证书（RO CEP 2007-361-Rev 02）。

Bovogen Biologics无菌胎牛血清应用：

-组织和细胞培养生长介质中的添加剂

-研究或诊断检测试剂

-特定稀释剂中的添加剂

-疫苗开发

作为Bovogen在中国的特约合作伙伴，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的Bovogen产品以及客户订制化服务。

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Anogen/艾美捷炎性蛋白丨免疫丨CD标记丨信号转导丨肿瘤研究方案

Anogen-Yes Biotech Laboratories Ltd.目前提供300多种单克隆和多克隆抗体，以及60余种ELISA试剂盒，产品广泛应用于研究、诊断和治疗领域。

艾美捷Anogen相关研究领域：

包含如下研究领域的蛋白，相关抗体，抗体对及ELISA试剂盒：

炎性蛋白Inflammatory Proteins

免疫Immunoassay

CD标记CD Markers

信号转导Signal Transduction

感染与毒素Infection & Toxin

细胞因子和生长因子Cytokines & Growth Factors

神经系统疾病Neurological Disorder

肿瘤研究Tumor Research

血浆蛋白Plasma Proteins

下图为Anogen公司授权艾美捷科技有限公司（AmyJet Scientific Inc.）作为Anogen在中国区域的代理授权书。

Anogen热门研究：

Multiplex Human Cytokine ELISA Kit(Th1/Th2/Th17) EM10003

Multiplex Human Cytokine ELISA Kit(M1/M2/MDSC Cytokines) EM10002

Multiplex Human Cytokine ELISA Kit(Inflammatory) EM10001

mAb anti-Human IL-8,18-S2,Capture MO-C40017A

mAb anti-Human GM-CSF,429,Detector MO-C40090D

mAb anti-Human EGF,S-146,Detector MO-C40044F

mAb anti-Human EGF,S-134,Capture MO-C40044D

mAb anti-Human IL-1β,S1B7 MO-C40029B

mAb anti-Human TGF-β,TB21 MO-C40009A

mAb anti-Human IL-8,807 MO-C40017G

mAb anti-Human MCP-1,S14,Capture MO-C40021B

mAb anti-Human EGF,S-21 MO-C40044A

mAb anti-Human MCP-1,S101,Detector MO-C40021D

Human TNF- α ELISA Kit EL10019

Human IL-8 ELISA Kit EL10008

Human EGF ELISA Kit EL10010

Human IFN- γ ELISA Kit EL10024

mAb anti-Human EGF,S-146,Tracer(Biotin Labeled) MO-C40044TB

mAb anti-Human TNF- α,CH8820,Capture MO-C40003B

mAb anti human IL-18 clone 10H4,Tracer(Biotin Labeled) MO-C40094TB

mAb anti human IL-15 clone B1H6,Tracer(Biotin labeled) MO-C40095TB

mAb anti Human IL-15 clone B1H6,Detector MO-C40095B

mAb anti Human IL-15 clone 5E8,Capture MO-C40095A

mAb anti Human IL-18 clone 10H4,Detector MO-C40094B

mAb anti Human IL-18 clone 2A10,Capture MO-C40094A

mAb anti-Human GM-CSF,429,Tracer (Biotin Labeled) MO-C40090TB

mAb anti-Human GM-CSF,429,Tracer(HRP Labeled) MO-C40090T

mAb anti-Human IL-16,323,Tracer(HRP Labeled) MO-C40089T

mAb anti-Human MCP-3,113,Tracer(Biotin Labeled) MO-C40088TB

mAb anti-Human MCP-3,113,Tracer(HRP Labeled) MO-C40088T

mAb anti-Human TNF-伪，B1E4,Detector MO-C40003E

mAb anti-Human EGF,S-146,Tracer(HRP Labeled) MO-C40044T

mAb anti-Human MCP-1,S101,Tracer(Biotin Labeled) MO-C40021TB

mAb anti-Human MCP-1,S101,Tracer(HRP Labeled) MO-C40021T

mAb anti-Human IL-8,18-60,Tracer(Biotin Labeled) MO-C40017TB

mAb anti-Human IL-8,18-60,Tracer(HRP Labeled) MO-C40017T

mAb anti-Human TNF-伪，B1E4,Tracer(Biotin Labeled) MO-C40003TB

mAb anti-Human TNF-伪，B1E4,Tracer(HRP Labeled) MO-C40003T

mAb anti-Human GM-CSF,59,Capture MO-C40090B

mAb anti-Human IL-16,398,Capture MO-C40089K

mAb anti-Human IL-16,323,Detector MO-C40089J

mAb anti-Human MCP-3,542,Capture MO-C40088G

mAb anti-Human MCP-3,113,Detector MO-C40088A

mAb anti-Human IL-8,18-60,Detector MO-C40017D

作为Anogen在中国的区域总代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的Anogen产品以及客户订制化服务。

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Anogen多重人细胞因子ELISA试剂盒(Th1/Th2/Th17)检测原理

这种多重ELISA试剂盒用于Th1/Th2/Th17细胞因子，旨在半定量和同时测定与T辅助细胞分化相关的细胞因子。该试剂盒同时测定干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-13（IL-13）、白细胞介素-17A（IL-17A）、白细胞介素-22（IL-22）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α），在细胞培养上清液和其他生物样本中。结合其他Anogen定量细胞因子ELISA试剂盒，Th1/Th2/Th17细胞因子多重ELISA试剂盒有望用于研究各种疾病模型中细胞因子表达与T辅助细胞分化之间的关系。

该试剂盒仅供实验室研究使用，不应在任何诊断或治疗程序中使用。

艾美捷Anogen多重人细胞因子ELISA试剂盒(Th1/Th2/Th17)#EM10003检测原理：

这种酶联免疫吸附测定（ELISA）应用了一种称为定量夹心免疫测定的技术。试剂盒中包含的8孔条上的微孔已预先涂有针对IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-13、IL-17、IL-22和TNF-α的单克隆抗体。然后将标准品或样本添加到条上，稍后将添加生物素标记的检测抗体混合物。如果存在上述细胞因子，它们将通过预先涂在孔上的抗体结合并固定，然后被生物素结合物“夹心”。微孔板孔被彻底清洗以去除样本中未结合的成分。为了定量测定样本中存在的细胞因子量，向每个微孔板孔中添加与辣根过氧化物酶（HRP）结合的亲和素并孵育。亲和素是一种含有四个相同亚基的四聚体，每个亚基都有一个对生物素具有高亲和力的结合位点。孔被彻底清洗以去除所有未结合的HRP标记的亲和素。向每个孔中添加TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）底物溶液。酶（HRP）和底物被允许在短暂的孵育期间反应。只有那些含有涂层抗体和特定细胞因子、生物素标记的抗体和酶标记的亲和素的孔才会发展成蓝色。颜色发展的强度与每个孔中存在的特定细胞因子的浓度成正比。通过添加硫酸溶液终止酶-底物反应，颜色将变为黄色。强度在450纳米±2纳米的波长下通过分光光度计测量。

样本与用类似基质稀释的标准品一起测试，或使用试剂盒提供的校准稀释液之一。这允许操作员产生光密度（O.D）与细胞因子浓度（pg/mL）的关系。然后通过将样本的O.D.与标准品进行比较来确定样本中细胞因子的浓度。

程序限制：

-在某些情况下，高水平的干扰因素可能导致异常结果。

-试剂盒不应在试剂盒标签上的有效期之后使用。

-标准稀释液、操作员移液技术、洗涤技术、孵育时间或温度以及试剂盒年龄的任何变化都可能导致试剂盒性能的变化。

-生物样本中存在的可溶性受体或其他结合蛋白不一定干扰样本中配体的测量。然而，在测试这些因素之前，不能排除干扰的可能性。

结果计算：

从A行到H行，每个孔上的OD读数反映了IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-13、IL-17A、IL-22和TNF-α这八种细胞因子的浓度。在半定量检测中，可以从高浓度标准和低浓度的OD读数生成8个粗略曲线，通过将样本在每个8个孔中的OD读数绘制到其标准曲线上，可以获得样本中细胞因子的近似浓度。如标准曲线部分所示，实际标准曲线不必完全直线，因此，从两点导出的粗略曲线获得的浓度可能不是很准确。

为了获得更准确的结果，操作员可以与测试样本同时测试更多的稀释点。对于定量测量多个样本中的单一细胞因子浓度，Anogen也提供了单个细胞因子的定量ELISA检测试剂盒。

标准曲线：

上述数据生成的细胞因子标准曲线仅供参考。

文献参考：

1. Harrington, LE; Hatton, RD; Mangan, PR; Turner, Henrietta; Murphy, Theresa L; Murphy, Kenneth M; Weaver, Casey T (2005). "Interleukin 17-producing CD4+ effector T cells develop via a lineage distinct from the T helper type 1 and 2 lineages". Nature

Immunology 6 (11): 1023–32.

2. Hirota K, Duarte JH, Veldhoen M, Hornsby E, Li Y, Cua DJ, Ahlfors H, Wilhelm C, Tolaini M, Menzel U, Garefalaki A, Potocnik AJ, Stockinger B. Nat Immunol; Duarte; Veldhoen; Hornsby; Li; Cua; Ahlfors; Wilhelm; Tolaini; Menzel; Garefalaki; Potocnik; Stockinger (2011). “Fate mapping of IL-17 producing T cells in inflammatory responses. Nature Immunology 12 (3): 255–63

3. Nakayamada S., Takahashi H., Kanno Y., O'Shea J.J. (2012). “Help T cell diversity and plasticity” Current Opinion in Immunology 24 (3): 297–302.

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Anogen抗人IL-8单克隆抗体I8-S2,Capture-识别天然和重组的人类IL-8

白细胞介素8（IL-8），像IL-6一样，是由巨噬细胞和表达Toll样受体的多种细胞在病原体刺激下分泌的。IL-8的主要功能是通过趋化作用将中性粒细胞和其他靶细胞吸引到感染部位以消除病原体。IL-8导致细胞内Ca2+增加，活性氧的释放，以及其他为迁移和吞噬作用所需的生理变化。IL-8也已知促进血管生成。

Anogen抗人IL-8单克隆抗体I8-S2，Capture--针对人类白细胞介素8（IL-8）的小鼠单克隆抗体。

艾美捷Anogen抗人IL-8单克隆抗体I8-S2，Capture：

货号：MO-C40017A

纯化：通过蛋白G亲和纯化

类型：一抗，匹配抗体对中的捕获抗体

目标蛋白：人类IL-8

免疫原：纯化的重组人类IL-8

骨髓瘤：Sp2/0-Ag14

特异性：该抗体识别天然和重组的人类IL-8

物种反应性：人类，其他未测试

交叉反应性：该抗体不与人类单核细胞趋化激活因子（MCAF）或RANTES（调节活化，正常T细胞表达和分泌）发生交叉反应

宿主/同种型：小鼠，IgG2b Kappa

配方：从0.01M PBS溶液中冻干，pH 7.0

重悬：推荐使用双重蒸馏水调整最终浓度至1.00mg/mL

储存：储存在-20°C

研究领域：细胞因子，白细胞介素和趋化性

应用 ELISA：该抗体与克隆I8-60（产品编号：MO-C40017D）在夹心ELISA中匹配。

中和：在趋化实验中，该抗体抑制了IL-8对RB/293细胞的97.8%的趋化活性。实验中使用了5µg/mL的抗体和10ng/mL的人类IL-8。该抗体抑制了人类IL-8的趋化效应，但在中性粒细胞趋化实验中对MIP 1-beta和RANTES没有抑制作用。该抗体还中和了IL-8诱导的人类粒细胞中的钙离子内流。

Western Blot：当使用0.02-0.1µg/mL浓度的抗体时，可以观察到100ng/泳道的重组人类IL-8。

图：使用克隆I8-S2对重组人类IL-8进行Western blot分析。

文献参考：

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