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谷氨酸测定试剂盒，比色法检测，适用于所有物种

谷氨酸是一种非必需氨基酸，在体内发挥多种重要的代谢作用。作为一种神经递质，它促进神经细胞之间的通信，有助于大脑功能和认知。谷氨酸也是蛋白质合成中的关键分子，有助于其他氨基酸的生成。此外，谷氨酸还是谷胱甘肽的前体，谷胱甘肽是一种强效抗氧化剂，能够帮助细胞抵御氧化损伤。谷氨酸还参与能量代谢，因为它可以转化为α-酮戊二酸，这是三羧酸循环中的一个关键中间体。AkrivisBio的谷氨酸检测试剂盒是一种简单、灵敏的检测手段，能够检测多种组织中的谷氨酸含量，检测灵敏度可达每孔小于0.2纳摩尔。

艾美捷谷氨酸测定试剂盒：

货号：MA-0133

规格：100孔

样本类型：细胞裂解液、组织提取液、尿液、血清、血浆、其他生物流体

适用物种：通用（适用于所有物种）

检测方法：比色法，检测波长450纳米

检测类型：定量

应用：基于微孔板的比色法检测，用于测量样本中谷氨酸的浓度，最低检测浓度可达每孔0.2纳摩尔。

灵敏度：<0.2纳摩尔/孔

储存条件：-20°C

运输条件：凝胶冷藏包

谷氨酸测定试剂盒组成：

-检测缓冲液：25毫升，货号WM MA-0133-A

-谷氨酸脱氢酶：冻干粉，绿色，货号MA-0133-B

-NAD/四氮杂卓混合液：冻干粉，红色，货号MA-0133-C

-谷氨酸标准品：100微升，黄色，货号MA-0133-D

谷氨酸测定试剂盒检测原理：

1. 谷氨酸在谷氨酸脱氢酶的作用下被氧化转化为α-酮戊二酸和氨（NH₃），同时NAD被转化为NADH。

2. NADH用于将四氮杂卓转化为具有最大吸收波长为450纳米的高色素甲臜。

储存和处理：

将试剂盒储存于-20°C。使用前将检测缓冲液恢复至室温。打开试剂瓶前请短暂离心。

检测缓冲液：直接使用，储存于4°C。

谷氨酸脱氢酶：用220微升检测缓冲液复溶。储存于-20°C。使用时保持在冰上。如果需要在一段时间内反复使用该试剂，建议将酶分装成小份量并储存于-20°C。

NAD/四氮杂卓混合液：用220微升去离子水复溶。

谷氨酸标准品（40 mM）：直接使用。

检测步骤：

1. 标准曲线制备：将10微升谷氨酸标准品转移至990微升检测缓冲液中，配制成0.4 mM的溶液。将0、5、10、15、20、25微升的标准溶液分别转移至96孔板的多个孔中（每个浓度重复两次），以生成0、2、4、6、8、10纳摩尔/孔的标准系列。用检测缓冲液将所有孔的体积调整至50微升。

2. 样本准备：将组织（10毫克）或细胞（1×10⁶）在100微升检测缓冲液中匀浆。以16,000×g离心5分钟，去除颗粒。将上清液转移至新的试管中。将2-50微升样本转移至96孔板中。用检测缓冲液将所有孔的体积调整至50微升。准备一个平行的样本孔作为背景对照。建议测试几个不同浓度的样本，以确保读数在标准曲线范围内。

注意：某些样本可能会产生较高的背景值。为了应对这种情况，建议将样本以双份运行，其中一份用作背景对照。

3. 启动反应：每个反应需要100微升反应混合液。

4. 测量：在37°C下，使用微孔板读数器监测450纳米处的吸光度，持续30分钟。

5. 典型结果：

6. 计算：

-从所有标准品读数中减去0标准品的读数。绘制背景校正后的标准曲线。确定标准曲线的斜率。该斜率定义了从检测中获得的OD/纳摩尔值。

-从每个未知样本对中减去背景对照孔的读数。将背景校正后的未知样本值除以标准曲线的斜率，以确定样本孔中的谷氨酸含量。

-将这些值转换为原始样本中的谷氨酸含量：

-A. 孔中谷氨酸的纳摩尔数 / 应用于孔中的样本微升数 = 应用于孔中的样本中的谷氨酸纳摩尔数/微升

-B. 应用于孔中的样本中的谷氨酸纳摩尔数/微升 × 应用于孔中的样本总体积 = 应用于孔中的样本中的总谷氨酸纳摩尔数

-C. 应用于孔中的样本中的总谷氨酸纳摩尔数 / 毫克组织（或细胞数量等） = 纳摩尔数/毫克（细胞数量等）

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胰蛋白酶活性测定试剂盒，动力学检测广泛样本中的胰蛋白酶活性

胰蛋白酶是一种由胰腺产生的丝氨酸蛋白酶，以无活性的前体酶形式存在。它被分泌到小肠中，通过肠激酶激活。胰蛋白酶倾向于在肽链中碱性氨基酸（赖氨酸、精氨酸）的羧基侧进行切割。胰蛋白酶在多种生物技术应用中被使用，例如细胞和组织培养、肽序列分析以及细胞分离。AkrivisBio的胰蛋白酶检测是一种动力学检测，使用胰蛋白酶底物（GPK-pNA）。当被胰蛋白酶切割时，释放出的对硝基苯胺（p-NA）具有强烈的颜色，最大吸收波长为405纳米，这使得检测能够检测到低至每样本0.05-0.1mU的胰蛋白酶活性。

艾美捷胰蛋白酶活性测定试剂盒：

货号：MA-0128

规格：100孔

样本类型：血清、血浆、细胞裂解液、组织提取液、尿液、细胞培养基

适用物种：通用（适用于所有物种）

检测方法：比色法，检测波长405纳米

检测类型：定量

应用：基于微孔板的比色法检测，用于定量检测广泛样本中的胰蛋白酶活性。

灵敏度：0.05-0.1mU

储存条件：4°C

运输条件：凝胶冷藏包

胰蛋白酶活性测定试剂盒检测组分：

-检测缓冲液：25毫升，货号WMMA-0128-A

-GPK-pNA溶液：200微升，红色，货号MA-0128-B

-胰蛋白酶阳性对照：冻干粉，蓝色，货号MA-1028-C

-p-NA标准品（0.8mM）：400微升，黄色，货号MA-1028-D

-胰蛋白酶抑制剂：100微升，紫色，货号MA-0128-E

-胰凝乳蛋白酶抑制剂：100微升，白色，货号MA-0128-F

胰蛋白酶活性测定试剂盒检测原理：

1.胰蛋白酶切割GPK-pNA，释放出游离的p-NA到溶液中。

2.通过吸光度测定p-NA含量，其消光系数为6.993mM⁻¹cm⁻¹。

储存和处理：

储存于4°C。打开试剂瓶前请短暂离心。使用前将所有组分恢复至室温。

-GPK-pNA、p-NA标准品、胰蛋白酶抑制剂和胰凝乳蛋白酶抑制剂：直接使用。

-胰蛋白酶阳性对照：用100微升检测缓冲液溶解。如果需要在一段时间内反复使用该试剂，建议将酶分装成小份量并储存于-20°C。

检测步骤：

1.标准曲线制备：将0、5、10、15、20、25微升的p-NA标准品分别转移至96孔板的多个孔中。用检测缓冲液将所有孔的体积调整至50微升，得到0、4、8、12、16和20纳摩尔/孔的p-NA标准系列。

2.阳性对照：将5微升阳性对照转移至95微升去离子水中。将5微升阳性对照加入到成对的孔中，用检测缓冲液将体积调整至每孔50微升。向其中一个孔中加入1微升胰蛋白酶抑制剂，并预孵育5分钟，作为胰蛋白酶抑制剂对照。

3.样本准备和使用：用100微升检测缓冲液提取组织（10毫克）或细胞（1×10⁶），以16,000×g离心5分钟。将20-50微升样本转移至96孔板中，并用检测缓冲液将所有孔的体积调整至50微升。对于血清样本，加入50微升至样本孔中。重要的是，未知样本的读数应在标准曲线范围内。如果任何样本超出此范围，请适当稀释并重新运行。通过用1微升胰凝乳蛋白酶抑制剂（TPCK）溶液处理成对的样本，并在加入GPK-pNA开始反应前预孵育10分钟，校正非胰蛋白酶活性。

4.启动反应：每个反应需要50微升反应混合液。

5.测量：在室温下，以405纳米的波长在动力学模式下监测所有孔，最长可达2小时。如果活性较低，可以延长监测时间。

-注意：这是一种动力学检测，通过吸光度随时间的变化率来确定反应速率，该速率与孔中活性胰蛋白酶的量成正比。应检查数据以确定测量中与时间呈线性变化的部分。

6.典型结果：

7.计算：

-从所有其他标准品中减去0标准品的读数。绘制p-NA标准曲线并确定斜率（OD/纳摩尔）。对于所有其他孔，确定每个反应的线性斜率（OD/分钟）。将每个反应速率除以标准曲线的斜率，以确定每个阳性对照、测试样本和抑制剂对照孔中的胰蛋白酶活性（OD/分钟）/（OD/纳摩尔）=（纳摩尔/分钟或mU）。

-按照以下方法将该值转换为每样本的胰蛋白酶活性：

-A.孔中的mU/加入孔中的样本微升数=每微升样本的胰蛋白酶活性（mU）

-B.每微升样本的胰蛋白酶活性（mU）×样本体积（微升）=每样本的总mU

-C.每样本的总mU/毫克组织（或细胞数量或血清微升数）=每毫克（或细胞数量或血清微升数）的mU

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β-羟基丁酸测定试剂盒，简单、灵敏的BHB含量测定方法

β-羟基丁酸（BHB）是一种在长时间禁食、低碳水化合物摄入或剧烈运动期间产生的酮体。作为能量代谢和燃料利用中的关键参与者，BHB在葡萄糖供应受限时，为大脑、心脏和骨骼肌等多种组织提供替代能量来源。BHB还作为一种信号分子，影响基因表达、氧化应激、炎症和其他细胞过程。其代谢意义不仅限于能量供应，还涉及多种生理和病理过程。AkrivisBio的BHB检测试剂盒是一种简单、灵敏的BHB含量测定方法。在检测中，BHB被氧化生成NADH，随后NADH用于将四氮杂卓还原为具有450纳米吸收峰的高色素甲臜。该检测的灵敏度适用于测量低至10微摩尔的BHB样本。

艾美捷β-羟基丁酸测定试剂盒：

货号：MA-0132

规格：100孔

样本类型：血清、血浆、细胞裂解液、组织提取液、尿液、细胞培养基

适用物种：通用（适用于所有物种）

检测方法：比色法，检测波长405纳米

检测类型：定量

应用：基于微孔板的比色法检测，用于定量检测广泛样本中的胰蛋白酶活性。

灵敏度：0.05-0.1mU

储存条件：4°C

运输条件：凝胶冷藏包

β-羟基丁酸测定试剂盒检测组分：

-检测缓冲液：25毫升，货号WMMA-0132-A

-β-羟基丁酸脱氢酶：冻干粉，绿色，货号MA-0132-B

-NAD/四氮杂卓混合液：冻干粉，红色，货号MA-0132-C

-β-羟基丁酸标准品：冻干粉，黄色，货号MA-0132-D

β-羟基丁酸测定试剂盒检测原理：

1.β-羟基丁酸脱氢酶将BHB氧化为乙酰乙酸，生成NADH。

2.NADH将电子转移至四氮杂卓，将其转化为甲臜。

储存和处理：

在使用前将试剂盒储存于-20°C。使用前将检测组分恢复至室温。打开试剂瓶前请短暂离心。

-检测缓冲液：直接使用，储存于4°C。

-β-羟基丁酸脱氢酶：用220微升检测缓冲液溶解。使用时保持在冰上，储存于-20°C。

-NAD/四氮杂卓混合液：用220微升检测缓冲液溶解，储存于-20°C。

-β-HB标准品：用100微升去离子水溶解，配制成10mM的溶液，储存于-20°C。

检测步骤：

1.标准曲线制备：将10微升标准品转移至90微升去离子水中，配制成0.4mM的工作溶液。将0、5、10、15、20、25微升的工作溶液分别转移至96孔板的多个孔中，用检测缓冲液将所有孔的体积调整至50微升，得到每孔0、2、4、6、8、10纳摩尔的BHB标准系列。

2.样本准备：体液中的β-HB含量差异较大（血清中为20微摩尔-5毫摩尔），尿液中可能更高。血液和尿液中的还原物质可能会干扰检测。使用10kDa离心过滤器可以减少这种干扰。向测试孔中加入1-50微升样本，用检测缓冲液将所有孔的体积调整至50微升。

-注意事项：

-还原物质和其他所谓的基质效应可以轻松处理。请参阅下一页，了解处理显著干扰检测的方法。

-在极少数情况下，样本中存在还原型吡啶核苷酸NAD(P)H，可能会干扰检测。在这种情况下，运行一个背景对照，用2微升检测缓冲液代替β-HB脱氢酶。从配对样本中减去这个背景值，以获得校正后的β-HB读数。

-所有样本读数必须在标准曲线范围内。如果读数超出此范围，请稀释样本并重新运行。

3.启动反应：每个反应需要50微升反应混合液。根据要运行的总孔数准备足够的反应混合液：

-反应混合液：

-检测缓冲液：46微升

-β-HB脱氢酶：2微升

-NAD/四氮杂卓混合液：2微升

-背景对照混合液：

-检测缓冲液：48微升

-NAD/四氮杂卓混合液：2微升

-向含有β-HB标准品或样本的每个孔中加入50微升反应混合液。

4.测量：在450纳米处监测反应30分钟。标准品会迅速显色，但样本的显色可能会更慢。

5.计算：

-从所有标准品读数中减去0BHB标准品的读数。绘制背景校正后的标准曲线。

-确定标准曲线的斜率，这将用于定义未知样本中的BHB含量。通过从配对样本中减去任何背景对照来校正未知样本。将校正后的样本读数除以标准曲线的斜率，以获得样本孔中的BHB纳摩尔数。

-将这些值转换回原始样本中的BHB含量：

-A.孔中的BHB纳摩尔数/加入孔中的样本微升数=样本中的BHB纳摩尔数/微升

-B.样本中的BHB纳摩尔数/微升×样本体积=样本中的总BHB纳摩尔数

-C.如果样本因信号过高而稀释，请乘以稀释因子。

-注意：许多代谢物和其他化学物质可能会显著干扰各种反应化学。为了更精确的测定，请在有无恒定量样本的情况下进行标准曲线测定。不必运行所有六个标准品；至少使用3个（0-10-20微升）来验证吸光度响应与分析物量呈线性关系。两条标准曲线的斜率应相同。它们之间的吸光度偏差归因于样本中的分析物量（在本例中为β-羟基丁酸）。如果两个斜率不同，则存在基质效应影响反应化学。在这种情况下，确定0标准品之间的吸光度差异，并将其应用于在样本存在下运行的标准曲线的斜率。

具有大矩阵效应的样品示例：

-0标准品之间的差异为0.35。在样本存在下的斜率为0.226OD/纳摩尔。

-样本中具有基质效应的分析物量=0.35OD/0.226OD/纳摩尔=1.55纳摩尔

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铁测定试剂盒，测定细胞或组织裂解液样本中的亚铁离子

铁（分子量55.845克/摩尔）是一种在所有已知生物体的各种代谢过程中都必不可少的元素。其中最重要的过程包括电子传递、氧气运输和DNA合成。铁最常见的存在形式是铁-硫中心和各种血红素。与其他大多数通过吸收和排泄来调节水平的离子不同，体内的铁水平仅通过吸收过程来控制。AkrivisBio的铁检测试剂盒是一种简单直接的方法，用于测定样本中的亚铁离子（Fe²⁺）。在检测中，样本中存在的铁化合物可以选择性地被还原为亚铁形式（Fe²⁺），然后与FereneS反应生成一个在593纳米处具有最大吸收峰的稳定色素。通过添加一种添加剂来防止铜的干扰。该检测适用于多种样本中铁含量在0到10纳摩尔范围内的测定。

艾美捷铁测定试剂盒：

货号：MA-0103

规格：100孔

样本类型：细胞或组织裂解液、血清

适用物种：通用（适用于所有物种）

检测方法：比色法，检测波长593纳米

检测类型：定量

应用：基于微孔板的比色法检测，用于测量样本中铁含量（0-10纳摩尔）。

检测范围：0-10纳摩尔

储存条件：+4°C

运输条件：凝胶冷藏包

铁测定试剂盒检测组分：

-检测缓冲液：25毫升，货号WMMA-0103A

-铁还原剂：0.7毫升，绿色，货号MA-0103B

-FereneS：12毫升，货号NMMA-0103C

-Fe³⁺标准品（100mM）：0.1毫升，黄色，货号MA-0103D

铁测定试剂盒检测原理：

1.铁化合物被溶解，使所有Fe²⁺和Fe³⁺都可用。Cu²⁺被螯合以去除干扰。

2.可选择性地添加还原剂将Fe³⁺转化为Fe²⁺（总铁）或省略（仅还原铁，Fe²⁺）。

3.添加FereneS形成色素。

储存和处理：

将试剂盒储存于4°C。使用前将所有组分恢复至室温。混合铁还原剂以溶解在冷冻过程中可能形成的任何沉淀。打开试剂瓶前请短暂离心。

检测步骤：

1.铁标准曲线：将10微升100mM的铁标准品用990微升去离子水稀释，生成1mM的铁标准品。将稀释后的铁标准品0、2、4、6、8和10微升分别加入96孔板中，生成每孔0、2、4、6、8和10纳摩尔的铁标准品。向每个标准品孔中加入5微升铁还原剂，并用铁检测缓冲液将所有标准品孔的体积调整至100微升。

2.样本测试：

-a.可以直接测试液体样本（如血清）中的亚铁（Fe²⁺）、总铁（Fe²⁺+Fe³⁺）或铁（Fe³⁺）。每孔最多可加入50微升血清。正常血清中铁水平约为10-40微摩尔。软组织或细胞可以用5-10倍体积的铁检测缓冲液（例如，每100毫克湿组织或约5×10⁶细胞用500微升铁检测缓冲液）进行匀浆。用探针超声仪或Dounce玻璃珠匀浆器充分匀浆组织样本，然后以16,000×g离心10分钟，将上清液转移至新的微量离心管中。所有最终读数应在标准曲线范围内。如果任何样本超出该范围，应适当稀释并重新运行。

-b.仅检测亚铁（Fe²⁺）：将1-50微升样本加入96孔板的样本孔中，并用铁检测缓冲液将体积调整至每孔100微升。检测总铁（Fe²⁺+Fe³⁺）：将1-50微升样本加入96孔板的样本孔中。向每个样本中加入5微升铁还原剂，将Fe³⁺还原为Fe²⁺。用铁检测缓冲液将体积调整至每孔100微升。

-c.在37°C下，让Fe³⁺完全还原为Fe²⁺，持续30分钟。

-d.向含有铁标准品和测试样本的每个孔中加入100微升铁探针。充分混合。在37°C下，避光让颜色完全显色，持续60分钟。

3.测量：在微孔板读数器上监测593纳米处的吸光度。

4.典型结果：

5.计算：从所有其他标准品和样本读数中减去零标准品的读数。绘制标准曲线。确定标准曲线的斜率。将背景校正后的样本读数除以标准曲线的斜率，以获得每孔中的铁纳摩尔数。测试样本中的Fe²⁺和总铁（Fe²⁺+Fe³⁺）直接从标准曲线确定。测试样本中的Fe³⁺含量通过从总铁（Fe²⁺+Fe³⁺）中减去Fe²⁺来计算。通过以下方法确定原始样本中的Fe²⁺、Fe³⁺或总铁（Fe²⁺+Fe³⁺）浓度：

-A.将每孔的纳摩尔数除以加入孔中的样本体积（微升）=每微升样本中的铁纳摩尔数

-B.将每微升样本中的铁纳摩尔数乘以上述2a中上清液的总体积=每样本中的总铁纳摩尔数

-C.将每样本中的总铁纳摩尔数除以用于制备样本的组织毫克数或细胞数量=每毫克组织（或每细胞数量等）中的铁纳摩尔数

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甘油三酯测定试剂盒，简单灵敏，适用于多种生物样本

甘油三酯是由3个脂肪酸和甘油组成的三酯，是动物和植物体内脂肪的主要成分。甘油三酯中存在的脂肪酸类型几乎涵盖了所有已知的天然脂肪酸。多种脂肪酶可以释放这些脂肪酸，随后被用于能量产生或其他目的。AkrivisBio的甘油三酯检测试剂盒提供了一种简单、灵敏的甘油三酯测量方法，适用于多种生物样本。甘油三酯含量可以通过比色法（最大吸收波长570纳米）或荧光法（激发/发射波长535/587纳米）进行测定。比色法的检测范围为每孔0-10纳摩尔，荧光法的灵敏度下限为1-5皮摩尔。

艾美捷甘油三酯测定试剂盒：

货号：MA-0110

规格：100孔

样本类型：组织提取液、细胞裂解液、血清、血浆、尿液

适用物种：通用（适用于所有物种）

检测方法：比色法，检测波长570纳米；或荧光法，激发/发射波长=535/587纳米

检测类型：定量

应用：基于微孔板的比色法/荧光法检测，用于测量样本中的甘油三酯水平。比色法检测范围为0-10纳摩尔/孔，荧光法检测范围为1-5皮摩尔/孔。

灵敏度：<1微摩尔

储存条件：-20°C

运输条件：凝胶冷藏包

甘油三酯测定试剂盒检测组分：

-检测缓冲液：25毫升，货号WMMA-0110-A

-ADHP溶液：200微升，红色，货号MA-0110-B

-脂肪酶：冻干粉，蓝色，货号MA-0110-C

-甘油氧化混合液：冻干粉，绿色，货号MA-0110-D

-甘油三酯标准品：0.3毫升，黄色，货号MA-0110-E

甘油三酯测定检测原理：

1.单酯、二酯和三酯甘油被脂肪酶水解，生成游离脂肪酸和游离甘油。

2.甘油被氧化，生成化学计量的过氧化氢。

3.过氧化氢和我们的ADHP探针作为过氧化物酶的底物，产生强烈的颜色和荧光。

用户自备材料：

-0.1-0.5%无过氧化物的洗涤剂溶液

储存和处理：

将试剂盒储存于-20°C。使用前将所有试剂恢复至室温。打开试剂瓶前请短暂离心，以使可能粘附在盖子上的组分脱落。

-ADHP溶液：DMSO在略低于室温时会冻结。使用前必须恢复至室温。储存于-20°C。

-脂肪酶：用220微升检测缓冲液溶解。分装后储存于-20°C。

-甘油氧化混合液：用220微升检测缓冲液溶解。最好分装后储存于-20°C，以避免反复冻融。

-甘油三酯标准品：在冷冻时可能会沉淀。为了重新溶解，将试剂瓶放入热水（80-100°C）中加热，直至溶液变得浑浊（2-3分钟）。在加热时涡旋混合，这将使其冷却并再次变为澄清溶液。重复加热/冷却一次。标准品现在可以使用。

检测步骤：

1.标准曲线：

-比色法检测：将40微升甘油三酯标准品加入160微升检测缓冲液中。将0、10、20、30、40、50微升分别加入96孔板的多个孔中，用检测缓冲液将孔体积调整至50微升。各孔分别含有0、2、4、6、8、10纳摩尔的甘油三酯。

-荧光法检测：将10微升甘油三酯标准品加入490微升检测缓冲液中。将0、10、20、30、40、50微升分别加入多个孔中，分别得到0、200、400、600、800、1000皮摩尔的甘油三酯。由于荧光法的灵敏度较高，可以通过进一步稀释标准品，使用0-200皮摩尔范围的标准曲线。

2.样本准备：

-使用100微升无过氧化物的洗涤剂溶液裂解10⁶细胞。将10毫克组织在100微升洗涤剂溶液中匀浆。匀浆液/细胞裂解液应像标准品一样经历加热/冷却循环。体液（血清、脑脊液、唾液等）可以直接使用。将每种样本加入至96孔板的孔中，每种样本加入50微升，成对加入，其中一对作为背景对照。如果最终样本读数不在标准曲线范围内，应适当稀释并重新运行。

-有时基质效应会导致背景值较高和标准曲线斜率变浅，这是由于试剂盒中酶的活性发生改变。在这种情况下，最好向成对测试样本中的一个加入2-4纳摩尔的甘油三酯标准品作为内标。两个样本之间的吸光度差异可用于确定未知甘油三酯含量与加入标准品的比例。

3.样本水解：

-向每个标准品和样本孔中加入2微升脂肪酶。背景对照孔不加脂肪酶。让水解反应进行20-30分钟。

4.甘油氧化：

-根据要测量的孔数准备足够的甘油氧化混合液，每个孔需要50微升。

-反应混合液：

-比色法：检测缓冲液46微升，ADHP溶液2微升，甘油氧化混合液2微升。

-荧光法：检测缓冲液47.8微升，ADHP溶液0.2微升，甘油氧化混合液2微升。

-向含有甘油三酯标准品、样本和背景对照的每个孔中加入50微升反应混合液。充分混合。在室温下孵育30-60分钟（60分钟效果稍好），避光。或者，可以在反应进行时用微孔板读数器监测反应进程。能够观察反应动力学通常可以提供所需的见解。

5.测量：

-通过比色法（570纳米吸光度）或荧光法（激发/发射波长535/587纳米）监测反应进程。当标准品的信号不再变化时，反应完成。达到终点的时间应少于60分钟。

6.典型结果：

7.计算：

-从所有标准品读数中减去0标准品的读数。绘制校正后的标准曲线。确定标准曲线的斜率。斜率决定了OD/纳摩尔或荧光/皮摩尔。对于吸光度大于约1OD的值，吸光度曲线有明显的凸性。荧光法检测中也观察到类似的凸性。将数据拟合到二阶多项式比直线拟合能更准确地计算未知样本的含量。

-从测试样本的总吸光度中减去配对背景对照的吸光度，以确定未知样本中的甘油三酯含量，然后根据原始细胞数量或组织质量校正样本稀释度。

-A.测试样本的原始吸光度-背景对照的吸光度=测试样本的净吸光度

-B.净吸光度/标准曲线的斜率=样本孔中的甘油三酯纳摩尔数

-C.样本孔中的甘油三酯纳摩尔数/加入孔中的样本微升数=样本中的甘油三酯纳摩尔数/微升

-D.样本中的甘油三酯纳摩尔数/微升×加入样本的洗涤剂溶液总体积=样本中的总甘油三酯纳摩尔数

-E.样本中的总甘油三酯纳摩尔数/毫克组织（或细胞数量等）=样本中的甘油三酯纳摩尔数/毫克（或细胞数量等）

-使用内标计算：

-A.（样本+加入标准品）的吸光度-（仅样本）的吸光度=内标的吸光度

-B.内标的吸光度/加入的标准品纳摩尔数=OD/甘油三酯纳摩尔数

-C.（仅样本）的吸光度/OD/甘油三酯纳摩尔数=测试样本中的甘油三酯纳摩尔数

-D.样本中的总甘油三酯纳摩尔数/毫克组织（或细胞数量等）=样本中的甘油三酯纳摩尔数/毫克（或细胞数量等）

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乙醇测定试剂盒，操作简便、结果可靠

乙醇在人体内参与多种代谢途径。摄入后，乙醇主要在肝脏通过氧化代谢进行代谢，涉及乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶，将乙醇转化为有毒的乙醛，再进一步转化为乙酸，最终生成二氧化碳和水。乙醇代谢影响能量平衡和营养物质的利用。乙醇的代谢优先于其他宏量营养素，导致过量的碳水化合物和脂肪储存。长期饮酒会破坏代谢途径，影响肝脏功能、脂质代谢和血糖调节。AkrivisBio的乙醇检测试剂盒提供了一种简单、灵敏的乙醇测量方法，适用于多种样本。在检测中，乙醇氧化酶将乙醇氧化生成过氧化氢（H₂O₂），随后用于形成具有强烈颜色和荧光的荧光素，检测灵敏度可达0.05纳摩尔。

艾美捷乙醇测定试剂盒：

货号：MA-0131

规格：100孔

样本类型：血清、血浆、细胞裂解液、组织提取液、细胞培养上清液、尿液

适用物种：通用（适用于所有物种）

检测方法：比色法（检测波长570纳米）或荧光法（激发/发射波长=535/580纳米）

检测类型：定量

应用：基于微孔板的比色法/荧光法检测，用于测量多种样本中的乙醇浓度。

灵敏度：0.05纳摩尔

储存条件：-20°C

运输条件：凝胶冷藏包

乙醇测定试剂盒检测组分：

-检测缓冲液：25毫升，货号WMMA-0131A

-ADHP溶液：200微升，红色，货号MA-0131B

-乙醇氧化酶/过氧化物酶：冻干粉，绿色，货号MA-0131C

-乙醇标准品（40mM）：0.2毫升，黄色，货号MA-0131D

乙醇测定试剂盒检测原理：

1.乙醇被乙醇氧化酶氧化，生成乙醛和过氧化氢。

2.过氧化物酶利用过氧化氢将ADHP氧化为荧光素，产生颜色和荧光。

注意：空气中的乙醇会对检测性能产生不利影响。检测必须在完全无乙醇的环境中进行。

储存和处理：在使用前将试剂盒储存于-20°C。使用前将检测组分恢复至室温。打开试剂瓶前请短暂离心。

-检测缓冲液：直接使用，储存于4°C。不使用时请紧密封闭。

-ADHP溶液：直接使用，储存于-20°C。

-乙醇氧化酶/过氧化物酶：向酶混合物中加入220微升检测缓冲液。储存于4°C。

-乙醇标准品：直接使用，储存于-20°C。仅在取样时打开，不使用时请紧密封闭。

检测步骤：

1.标准曲线：

-a.比色法检测：将10微升乙醇标准品转移至990微升检测缓冲液中，混合均匀，配制成0.4mM的工作溶液。将0、5、10、15、20、25微升的工作溶液分别转移至96孔板的多个孔中，用检测缓冲液将所有孔的体积调整至50微升，得到每孔0、2、4、6、8、10纳摩尔的乙醇标准系列。

-b.荧光法检测：按照比色法检测稀释标准品，然后将10微升转移至190微升检测缓冲液中，配制成20微摩尔的工作溶液。将0、5、10、15、20、25微升的工作溶液分别转移至96孔板的多个孔中，用检测缓冲液将所有孔的体积调整至50微升，得到每孔0、100、200、300、400、500皮摩尔的乙醇标准系列。

2.样本准备：所有样本读数必须在标准曲线范围内，并应相应准备。液体样本可以直接使用或用检测缓冲液稀释后测试。血清应稀释约10-100倍。将所有孔的体积调整至50微升。

-注意：纯乙醇约为17M。酒精浓度为3%（约0.5M）至14%（2.4M）的酒精饮料需要稀释1000倍或更多。

3.启动反应：每个反应需要50微升反应混合液。

4.测量：在570纳米（比色法检测）或激发波长535纳米/发射波长580纳米处监测反应，室温下持续60分钟。

5.典型结果：

6.计算：

-从所有其他标准品和样本中减去零乙醇背景值（背景信号超过约0.1OD表明空气中存在微量乙醇。背景读数可能较大，必须从样本读数中减去。可以容忍高达0.5OD的背景）。绘制标准曲线。确定标准曲线的斜率。将背景校正后的样本值除以标准曲线的斜率，以获得孔中的乙醇纳摩尔数。将孔中的乙醇纳摩尔数除以加入孔中的样本体积（微升）=样本中的乙醇纳摩尔数/微升。如果样本来自组织或细胞，将样本中的乙醇纳摩尔数/微升乘以样本总体积，再除以用于制备样本的组织毫克数或细胞数量=每毫克组织（或每细胞数量等）中的乙醇纳摩尔数。

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游离脂肪酸测定试剂盒：快速定量分析，适用于组织、细胞及体液样本

脂肪酸是末端为羧酸的碳氢链。它们作为能量来源、结构组分以及多种生物活性化学物质（统称为氧化脂质）的前体，在生物体内具有重要作用，这些生物活性物质具有多种生物学功能，包括促炎和抗炎、血管活性、自分泌和旁分泌功能。AkrivisBio的游离脂肪酸检测试剂盒提供了一种简单、灵敏的方法，用于测量多种生物样本中的游离脂肪酸。该检测基于脂肪酸转化为辅酶A衍生物，随后被氧化，同时生成化学计量的过氧化氢，用于氧化ADHP，产生与脂肪酸含量成正比的颜色和荧光。反应中加入增强剂以促进颜色和荧光的发展。

艾美捷游离脂肪酸测定试剂盒：

货号：MA-0111

规格：100孔

样本类型：组织提取液、细胞裂解液、血清、血浆、尿液、其他生物流体

适用物种：通用（适用于所有物种）

检测方法：比色法（检测波长570纳米）或荧光法（激发/发射波长=535/587纳米）

检测类型：定量

应用：基于微孔板的比色法/荧光法检测，用于测量样本中游离脂肪酸的浓度。

灵敏度：>2微摩尔

储存条件：-20°C

运输条件：凝胶冷藏包

游离脂肪酸测定试剂盒检测组分：

-检测缓冲液：25毫升，货号WMMA-0111A

-ADHP溶液：200微升，红色，货号MA-0111B

-酰基辅酶合成酶：冻干粉，蓝色，货号MA-0111C

-酰基辅酶氧化酶/辣根过氧化物酶：冻干粉，绿色，货号MA-0111D

-增强剂：200微升，紫色，货号MA-0111E

-棕榈酸标准品（1mM）：300微升，黄色，货号MA-0111F

游离脂肪酸测定试剂盒检测原理：

1.脂肪酸转化为酰基辅酶A。

2.酰基辅酶A被氧化，生成过氧化氢。

3.过氧化氢被过氧化物酶利用，将ADHP氧化为荧光素，产生强烈的颜色和荧光。

用户自备材料：

-脂质提取材料（参见AkrivisBioPI-0101脂质提取试剂盒）

-Polytron或匀浆器

-滤器

储存和处理：

将试剂盒储存于-20°C。使用前将所有组分恢复至室温。

-ADHP溶液：DMSO在略低于室温时会冻结。使用前必须恢复至室温。储存于-20°C。

-酰基辅酶合成酶；酰基辅酶氧化酶/辣根过氧化物酶：用220微升去离子水复溶冻干酶并混合。储存于-20°C。

-棕榈酸标准品：棕榈酸标准品冷冻后可能会分成两相。为了使用，将其置于热水浴（约80-100°C）中加热至高于80°C，直至溶液超过其浊点，变得非常浑浊。在加热时涡旋混合。随着溶液冷却，它将再次变得清澈。重复加热/冷却循环一次，标准品即可使用。

检测步骤：

1.标准曲线：

-比色法检测（0-10纳摩尔/孔范围）：将0、5、10、15、20、25微升的棕榈酸标准品分别加入96孔板的多个孔中。用检测缓冲液将所有孔的体积调整至50微升。这样每孔分别含有0、2、4、6、8、10纳摩尔的标准品。

-荧光法检测（<1纳摩尔/孔）：将棕榈酸标准品稀释10倍至40微摩尔，方法是将50微升标准品加入450微升检测缓冲液中，然后将0、5、10、15、20、25微升的标准品分别加入96孔板的多个孔中。用检测缓冲液将所有孔的体积调整至50微升，这样每孔分别含有0、200、400、600、800、1000皮摩尔的标准品。

2.样本准备：

-液体样本可以直接加入96孔板中，并用检测缓冲液将所有孔的体积调整至50微升。未知样本的响应必须在所用标准曲线的范围内。如果未知样本超出此范围，则必须稀释并重新运行。

-细胞（10⁶）或组织（10毫克）用5%异丙醇/5%Tergitol溶液在小匀浆器中提取，然后过滤以去除不溶物和细胞碎片。样本已准备好使用。溶液可能呈浑浊状，但这不影响检测。每个检测使用1-20微升样本。

3.酰基辅酶合成：向所有标准品和样本孔中加入2微升酰基辅酶合成酶。混合并孵育30分钟（37°C）。

4.氧化和显色反应混合液：根据要运行的孔数（样本和标准品）准备足够的反应混合液。每个孔准备总共50微升的反应混合液，包含：

-检测缓冲液：44微升

-酰基辅酶氧化酶/辣根过氧化物酶：2微升

-ADHP溶液：2微升

-增强剂：2微升

-向每个孔中加入50微升反应混合液。在37°C下孵育反应30分钟，避光。通过在微孔板读数器中以动力学模式测量反应进程，观察颜色或荧光的发展是有用的。

5.测量：通过比色法（570纳米吸光度）或荧光法（激发/发射波长=535/587纳米）监测反应进程。当标准品的信号不再变化时，反应完成。达到终点的时间应少于30分钟。

6.典型结果：

7.计算：从所有读数中减去0纳摩尔标准品的吸光度。绘制标准曲线。斜率定义了系统的灵敏度（吸光度/纳摩尔游离脂肪酸）。将背景校正后的样本读数除以斜率，以确定游离脂肪酸的纳摩尔含量。将结果转换回原始样本中的含量：

-原始游离脂肪酸含量=从标准曲线斜率和未知吸光度确定的纳摩尔数，校正稀释：

-1.确定的纳摩尔游离脂肪酸/加入孔中的样本体积=样本中的游离脂肪酸纳摩尔/微升

-2.样本中的游离脂肪酸纳摩尔/微升×样本总体积=样本中的总游离脂肪酸纳摩尔

-3.样本中的总游离脂肪酸纳摩尔/细胞数量或组织毫克数=每细胞或每毫克组织的游离脂肪酸纳摩尔

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乙酰辅酶A测定试剂盒在疾病机制研究中的技术应用

乙酰辅酶A是细胞代谢和能量产生中的关键分子。作为细胞内不同代谢途径的中心枢纽，乙酰辅酶A在三羧酸循环中发挥核心作用，产生富含能量的分子（如ATP），并且是脂肪酸、胆固醇及其他重要细胞组分合成的前体。其多功能性和重要性使乙酰辅酶A成为维持细胞过程和整体代谢稳态的基本分子。多种酶缺陷对乙酰辅酶A代谢有不利影响，其中包括丙酮酸脱氢酶缺乏症、枫糖尿症、酮硫解酶缺乏症、HMG-CoA裂解酶缺乏症和多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症。AkrivisBio的乙酰辅酶A检测试剂盒是一种简单、灵敏的检测方法，可用于测量多种样本中的乙酰辅酶A含量，检测范围为0-400皮摩尔。

艾美捷乙酰辅酶A测定试剂盒：

货号：MA-0127

样本类型：细胞裂解液、组织提取液

适用物种：通用（适用于所有物种）

检测方法：荧光法，激发/发射波长=535/587纳米

检测类型：定量

应用：基于微孔板的荧光法检测，用于定量生物样本中的乙酰辅酶A水平。

灵敏度：0-400皮摩尔

储存条件：-20°C

运输条件：凝胶冷藏包

乙酰辅酶A测定试剂盒检测组分：

-检测缓冲液：25毫升，货号WMMA-0127-A

-二氢荧光素二钠：0.2毫升，蓝色，货号MA-0127-B

-磷酸转乙酰酶：0.1毫升，绿色，货号MA-0127-C

-α-酮戊二酸脱氢酶/二氢荧光素二钠：0.5毫升，紫色，货号MA-0127-D

-α-酮戊二酸：冻干粉，红色，货号MA-0127-E

-灭活剂：1.0毫升，橙色，货号MA-0127-F

-灭活中和剂：冻干粉，透明，货号MA-0127-G

-乙酰辅酶A标准品：冻干粉，黄色，货号MA-0127-H

乙酰辅酶A测定试剂盒检测原理：

1.样本中的乙酰辅酶A被水解为辅酶A和乙酸。

2.在NAD和α-酮戊二酸存在的情况下，α-酮戊二酸脱氢酶将辅酶A转化为琥珀酰辅酶A，过程中生成NADH。

3.NADH被二氢荧光素二钠还原为具有强烈荧光的荧光素。

储存和处理：

将试剂盒储存于-20°C。打开试剂瓶前请短暂离心。

-检测缓冲液：使用前将检测缓冲液恢复至室温。储存于4°C。

-二氢荧光素二钠；灭活剂：直接使用，室温下解冻。储存于4°C。

-α-酮戊二酸：用220微升检测缓冲液溶解。储存于-20°C。

-灭活中和剂：用220微升去离子水溶解。使用时保持在冰上。储存于-20°C。

-乙酰辅酶A标准品：用100微升去离子水溶解，配制成10mM的溶液。使用时保持在冰上。储存于-20°C。

检测步骤：

1.标准曲线：

-0-500皮摩尔范围：将乙酰辅酶A标准品稀释100倍，将10微升转移至990微升去离子水中。进一步稀释，将20微升转移至180微升水中。最终工作溶液浓度为10微摩尔。将0、10、20、30、40、50微升分别转移至96孔板的多个孔中，用去离子水将所有孔的体积调整至50微升，得到每孔0、100、200、300、400、500皮摩尔的乙酰辅酶A标准系列。

-0-100皮摩尔范围：将乙酰辅酶A标准品稀释100倍，将10微升转移至990微升去离子水中。进一步稀释，将10微升转移至490微升去离子水中。混合均匀。将0、10、20、30、40、50微升分别转移至96孔板的多个孔中，用去离子水将所有孔的体积调整至50微升，得到每孔0、20、40、60、80、100皮摩尔的乙酰辅酶A标准系列。

2.样本准备：

-样本中的酶会迅速降解乙酰辅酶A，干扰检测。使用PI-0102、PI-0103或等效方法对样本进行去蛋白处理。组织样本（20-1000毫克）应迅速冷冻（液氮或甲醇/干冰），称重并研磨。加入2微升1N高氯酸/毫克样本。保持低温，通过匀浆或超声处理破坏样本。以16,000×g离心。用3M碳酸氢钾中和上清液，加入1微升/10微升上清液的1微升等分量，同时涡旋，直到气泡生成停止（2-5个等分量）。置于冰上5分钟。检查pH（使用1微升）应约为pH6-8。以16,000×g离心2分钟沉淀高氯酸钾。将10微升样本转移至96孔板的成对孔中；用检测缓冲液将所有孔的体积调整至50微升。

-样本中的游离辅酶A、丙二酰辅酶A和琥珀酰辅酶A会产生背景信号。为了校正背景信号，向所有标准品、样本和背景对照中加入10微升灭活剂以猝灭游离辅酶A。室温下孵育5分钟，然后加入2微升灭活中和剂，混合并孵育5分钟。此外，为每个样本运行一个背景对照，通过省略转化酶来校正琥珀酰辅酶A或其他辅酶A酯。

3.启动反应：每个反应需要50微升反应混合液。

4.测量：使用激发波长535纳米、发射波长587纳米的荧光读取器监测荧光。存在一种非常缓慢的线性自催化反应，其发生与乙酰辅酶A的量成正比。为了校正这一点，确定反应开始后10-15分钟的漂移率，并将该速率外推回0时间（反应混合液加入时间）。

5.典型结果：

6.计算：

-从所有读数中减去0标准品的读数。背景信号可能较大，必须从样本读数中减去。确定每个样本的背景值，并从原始乙酰辅酶A读数中减去，以获得校正后的乙酰辅酶A荧光。绘制标准曲线并确定标准曲线的斜率。将标准曲线的斜率应用于校正后的样本读数，以获得样本孔中的乙酰辅酶A皮摩尔数。确定原始样本中的乙酰辅酶A：

-A.孔中的乙酰辅酶A皮摩尔数/加入孔中的样本微升数=样本中的乙酰辅酶A皮摩尔/微升

-B.样本中的乙酰辅酶A皮摩尔/微升×样本总体积=样本中的总乙酰辅酶A

-C.样本中的总乙酰辅酶A/毫克组织（或细胞数量等）=每毫克组织（或细胞数量等）中的乙酰辅酶A皮摩尔

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