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总胆固醇检测试剂盒(比色法)，量化胆固醇酯类和游离胆固醇

Cell Biolabs的总胆固醇检测试剂盒测量血清、血浆、细胞裂解物或组织样本中的总胆固醇。这些检测将在胆固醇酯酶存在的情况下检测总胆固醇（胆固醇酯加游离胆固醇），或在酯酶不存在的情况下仅检测游离胆固醇。

艾美捷总胆固醇检测试剂盒(比色法)（#STA-384）检测原理：

Cell Biolabs总胆固醇检测试剂盒测量血清、血浆、裂解物、或组织样本。该测定基于酶驱动的反应，可量化胆固醇酯类和游离胆固醇。胆固醇酯通过胆固醇酯酶水解成胆固醇，然后被胆固醇氧化酶氧化成酮胆甾-4-烯-3-酮加氢过氧化物。然后用高度特异的比色探针检测过氧化氢。辣根过氧化物酶催化探针与过氧化氢之间的反应，过氧化氢与辣根过氧化物酶结合1:1的比例。将样品与96孔中已知浓度的胆固醇标准品进行比较微量滴定板格式。将样品和标准品孵育45分钟，然后用标准96孔比色板读数器。

总胆固醇检测试剂盒(比色法)组成：

盒子1（室温运输）：

1. 胆固醇标准品（部件编号239001）：一支50 µL管，含10 mM乙醇溶液中的胆固醇。

2. 检测稀释液（5倍）（部件编号239002）：一瓶100 mL。

3. 50倍比色探针（部件编号238401）：一支200 µL管，溶于DMSO中。

4. 辣根过氧化物酶（部件编号234402）：两支100 µL管，含100 U/mL甘油溶液中的辣根过氧化物酶。

总胆固醇检测试剂盒(比色法)特点：

1、适用于血清、血浆、裂解物或组织样本

2、包括胆固醇标准

3、提供比色或荧光检测

胆固醇标准曲线：

总胆固醇检测试剂盒(比色法)相关产品：

1. STA-367：人载脂蛋白E ELISA试剂盒

2. STA-369：OxiSelect™人氧化LDL ELISA试剂盒（MDA-LDL定量）

3. STA-390：总胆固醇检测试剂盒（荧光法）

4. STA-391：HDL和LDL/VLDL胆固醇检测试剂盒

总胆固醇检测试剂盒(比色法)部分引用文献：

Tran, G.B. et al. (2023). Caffeine supplementation and FOXM1 inhibition enhance the antitumor effect of statins in neuroblastoma. Cancer Res. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-22-3450 (#STA-390).

Tashiro, J. et al. (2023). CYP11A1 silencing suppresses HMGCR expression via cholesterol accumulation and sensitizes CRPC cell line DU-145 to atorvastatin. J Pharmacol Sci. 153(3):104-112. doi: 10.1016/j.jphs.2023.08.002 (#STA-384).

Nopparat, J. et al. (2023). Probiotics of Lacticaseibacillus paracasei SD1 and Lacticaseibacillus rhamnosus SD11 attenuate inflammation and β-cell death in streptozotocin-induced type 1 diabetic mice. PLoS One. 18(4):e0284303. doi: 10.1371/journal.pone.0284303 (#STA-384).

Yang, X. et al. (2023). Sprouty1 has a protective role in atherogenesis and modifies the migratory and inflammatory phenotype of vascular smooth muscle cells. Atherosclerosis. 373:17-28. doi: 10.1016/j.atherosclerosis.2023.04.007 (#STA-384).

Mou, Y. et al. (2023). Chenodeoxycholic acid rescues axonal degeneration in induced pluripotent stem cell-derived neurons from spastic paraplegia type 5 and cerebrotendinous xanthomatosis patients. Orphanet J Rare Dis. 18(1):72. doi: 10.1186/s13023-023-02666-w (#STA-384).

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OxiSelect 8-异前列腺素F2a ELISA试剂盒，用于测定多种生物样本中的8-iso-PGF2α水平

脂质过氧化是动物和植物细胞损伤的一个明确机制。脂质过氧化物是细胞氧化应激的不稳定指标，它们会分解形成更复杂且更具反应性的化合物，例如异前列腺素。异前列腺素是一种通过氧自由基诱导组织磷脂和脂蛋白的过氧化而产生的非酶促合成的二十烷类化合物。异前列腺素是类似前列腺素的化合物，正常情况下会出现在血浆和尿液样本中，但在组织、血浆和尿液中，它们的水平会因氧化应激而升高。

8-异前列腺素F2α（也称为8-表前列腺素F2α、8-异前列腺素或15-异前列腺素F2t）是一种已被证明可用于体内氧化应激评估的异前列腺素。它是由花生四烯酸衍生的非环氧化酶和环氧化酶过氧化途径在膜磷脂中产生的。8-异前列腺素F2α（8-iso-PGF2α）是一种强效的血管收缩剂，也是3T3细胞和血管平滑肌细胞中的诱变剂，可能是一种能够改变膜完整性的病理生理介质。它与动脉粥样硬化的形成有关，其水平升高与肝肾综合征、类风湿性关节炎、致癌作用以及动脉粥样硬化有关。8-iso-PGF2α在血浆中循环，并通过尿液排出。8-iso-PGF2α以酯化低密度脂蛋白磷脂和游离酸的形式循环。正常人血浆和尿液中的8-iso-PGF2α水平分别约为40-100 pg/mL和约190 pg/mg肌酐。测定总8-iso-PGF2α的方法通常需要对组织中的8-iso-PGF2α酯进行碱水解，随后进行提取、相分离和薄层色谱分析。

OxiSelect™ 8-异前列腺素F2α ELISA试剂盒是一种用于快速检测和定量8-iso-PGF2α的酶免疫分析方法。通过将样本中的8-iso-PGF2α吸光度与已知8-iso-PGF2α标准曲线的吸光度进行比较，来确定样本中8-iso-PGF2α的含量。每套试剂盒提供的试剂足以进行多达96次测定，包括标准曲线和未知样本的测定。

艾美捷OxiSelect 8-异前列腺素F2a ELISA试剂盒（#STA-337）测定原理：

Cell Biolabs的8-iso-PGF2α试剂盒是一种竞争性酶联免疫吸附测定（ELISA），用于测定血浆、尿液、血清或组织提取物等多种生物样本中的8-iso-PGF2α水平。将抗8-iso-PGF2α抗体在预先包被的微孔板孔中孵育。洗涤后，将8-iso-PGF2α标准品或处理过的样本与8-iso-PGF2α-HRP偶联物混合，并同时加入孔中。未偶联的（游离的）8-iso-PGF2α和8-iso-PGF2α-HRP偶联物会竞争性地与结合在板上的抗体结合。经过短暂孵育和洗涤后，加入HRP底物。HRP活性导致的颜色变化与结合到板上的8-iso-PGF2α偶联物的量成正比，与样本或标准品中游离8-iso-PGF2α的量成反比。通过与已知的标准曲线进行比较，确定未知样本中的8-iso-PGF2α含量。在进行测定之前，请仔细阅读完整的试剂盒说明书。

相关产品：

1. STA-320：OxiSelect™氧化DNA损伤ELISA试剂盒（8-OHdG定量）  

2. STA-325：OxiSelect™氧化RNA损伤ELISA试剂盒（8-OHG定量）  

3. STA-330：OxiSelect™ TBARS测定试剂盒（丙二醛定量）  

4. STA-344：OxiSelect™过氧化氢/过氧化物酶测定试剂盒  

5. STA-347：OxiSelect™体外ROS/RNS测定试剂盒（绿色荧光）

OxiSelect 8-异前列腺素F2a ELISA试剂盒组成：

1. 山羊抗兔抗体包被板（编号250001）：一个96孔条板。  

2. 抗8-iso-PGF2α抗体（编号233701）：一个20微升装的抗8-iso-PGF2α兔IgG管。  

3. 样本稀释液（编号233702）：一个50毫升瓶。  

4. 中和液（编号233705）：一个20毫升瓶。  

5. 10倍洗涤缓冲液（编号310806）：一个100毫升瓶。  

6. 底物溶液（编号310807）：一个12毫升琥珀色瓶。  

7. 终止液（编号310808）：一个12毫升瓶。  

8. 8-iso-PGF2α标准品（编号233703）：一个25微升装的200微克/毫升8-iso-PGF2α（溶于DMSO）管。  

9. 8-iso-PGF2α-HRP偶联物（编号233704）：一个70微升装的8-iso-PGF2α-HRP偶联物管。

未提供的材料：

1. 蛋白质样本，如纯化蛋白、血浆、血清、细胞裂解液等。  

2. 去离子水。  

3. 样本提取和纯化所需的试剂和材料。

储存条件：

- 收到后，将抗8-iso-PGF2α抗体、8-iso-PGF2α-HRP偶联物和8-iso-PGF2α标准品储存于-20摄氏度。根据需要分装，以避免反复冻融。  

- 将试剂盒中的其他组分储存于4摄氏度。  

- 任何部分使用或未使用的组分应恢复到适当的储存温度。

样本准备：

为了测量游离和酯化的异前列腺素，需要对与脂蛋白或磷脂结合的8-异前列腺素F2α（8-iso-PGF2α）进行水解。为了水解这种酯键，通常用2N氢氧化钠在45摄氏度下处理样本2小时。

- 血清、血浆、组织裂解液样本：使用1份10N氢氧化钠处理4份液体样本。在45摄氏度下孵育2小时后，每500微升水解样本加入100微升浓（10N）盐酸。加入后样本可能会变浑浊。在微型离心机中以12,000转/分钟离心5分钟。清澈的上清液可用于测定，或储存于-20摄氏度或更低温度以备后用。在测定前，请确保每个中和后的样本pH值在6-8之间。如果不在该范围内，通过将100微升样本加入100微升提供的中和液中，将pH值调整到该范围内。  

- 尿液样本：在ELISA之前，需要对尿液样本进行酸水解，以分解将脂质和非脂质成分结合在一起的键。通过加入1/10体积的1N盐酸将尿液样本酸化至pH 3.0（例如：向1毫升尿液样本中加入100微升1N盐酸）。酸化后的尿液样本应在PBS或样本稀释液中进一步稀释1:4至1:8，然后进行ELISA。

结果示例：

以下图表展示了典型的8-iso-PGF2α结果。以下数据仅供参考，不应用于解释实际结果。  

图1：8-iso-PGF2α ELISA标准曲线  

图2：用8-iso-PGF2α ELISA检测的人尿液稀释液

OxiSelect 8-异前列腺素F2a ELISA试剂盒文献参考：

1. Banerjee, M., Kang, K.H., Morrow, J.D., et al. (1992) Am. J. Physiol. 263: H660-H663.

2. Morrow, J.D., Hill, K.E., Burk, R.F., et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 87: 9383-9387.

3. Morrow, J.D., Harris, T.M., Roberts, L.J. (1990) Anal. Biochem. 184: 1-10.

4. Vacchiano, C.A., and Tempel, G.E. (1994) J. Appl. Physiol. 77: 2912-2917.

5. Wang, Z., Ciabattoni, G., Cre’minon, C., et al. (1995) Pharmacol. Exp. Ther. 275: 94-100.

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脂蛋白脂酶(LPL)活性测定试剂盒，高灵敏度，快速定量分析

甘油三酯（TAG）是血液中的一种脂质，作为能量来源，并在代谢中发挥关键作用。甘油三酯是消化过程中分解膳食脂肪的最终产物。任何未被立即使用的多余碳水化合物和脂肪都会化学转化为甘油三酯。在肠道中，分泌的酶脂肪酶水解甘油三酯的酯键，产生甘油和游离脂肪酸，这一过程称为脂肪分解。肠上皮细胞随后吸收并重新包装这些片段，并与胆固醇结合形成乳糜微粒，一种主要的脂蛋白运输颗粒。在肝脏中，肝脂肪酶也会分解甘油三酯，以从甘油三酯、胆固醇和载脂蛋白中组装另一种脂蛋白颗粒（VLDL）。血浆甘油三酯水平通过VLDL和乳糜微粒颗粒的组装和降解来调节。脂蛋白脂肪酶（LPL）是负责水解这些颗粒中甘油三酯核心的关键血浆脂肪酶。

艾美捷脂蛋白脂酶(LPL)活性测定试剂盒（#STA-610）利用一种荧光甘油三酯类似物作为脂肪酶底物。当未被水解时，底物保持在非荧光、猝灭状态；然而，当在sn-1位置被LPL水解时，会产生一种可被荧光微孔板读取器测量的荧光产物（激发波长480-485纳米/发射波长515-525纳米，建议截止波长495纳米）（见测定原理）。脂蛋白脂肪酶（LPL）活性测定试剂盒是一种简单的荧光测定法，可在96孔微孔板格式中定量测量血浆、血清和裂解液中的LPL活性。每套试剂盒提供的试剂足以进行多达100次测定，包括空白、LPL标准品和未知样本。试剂盒包含LPL标准品，检测灵敏度限为约1毫单位/毫升（见试剂盒组成中的单位定义）。除了LPL，该测定还可用于检测内皮脂肪酶和肝脂肪酶活性。

相关产品：

1. STA-375：尿酸/尿酸酶测定试剂盒

2. STA-390：总胆固醇测定试剂盒

3. STA-391：HDL和LDL/VLDL胆固醇测定试剂盒

4. STA-397：血清甘油三酯定量试剂盒（荧光法）

5. STA-399：游离甘油测定试剂盒（荧光法）

脂蛋白脂酶(LPL)活性测定试剂盒组成（干冰运输）：

1. LPL荧光底物（部件编号261001）：一个20微升琥珀色试管。

2. 10倍LPL测定缓冲液（部件编号261002）：两个1.5毫升试管。

 注意：该缓冲液不含钙或镁。

3. 终止液（部件编号261003）：两个1.5毫升试管。

4. LPL酶标准品（部件编号261004）：一个25微升试管，浓度为2500单位/毫升。

 注意：一个单位对应于在pH 8.0和40摄氏度下，使用三油酸甘油酯作为底物时，每分钟释放1微摩尔油酸的酶量。

未提供的材料：

1. 标准96孔荧光黑色微孔板

2. 37摄氏度培养箱

3. 配备激发滤光片（480-485纳米）和发射滤光片（515-525纳米）的荧光微孔板读取器（建议截止波长495纳米）

储存条件：

将整个试剂盒储存于-80摄氏度。通过分装避免反复冻融。LPL荧光底物对光敏感，应保存在琥珀色试管中。

试剂准备：

- 1倍LPL测定缓冲液：用去离子水将10倍LPL测定缓冲液稀释至1倍。搅拌至均匀。

- LPL荧光底物：在测定准备期间，将LPL荧光底物在室温下解冻。使用前，用1倍LPL测定缓冲液将LPL荧光底物稀释1:500。短暂涡旋至均匀。不要储存稀释后的溶液。

 注意：对于长期储存，LPL荧光底物应分装并冷冻于-80摄氏度，以避免反复冻融。

- 终止液：在37摄氏度下解冻终止液。对于长期储存，终止液可在室温或4摄氏度下保存。如果出现结晶，可在37摄氏度下短暂加热溶液以重新溶解。

样本准备：

- 血浆：用抗凝剂（如肝素、柠檬酸盐或EDTA）收集血液，并通过倒置混合。在4摄氏度下以1000×g离心10分钟。收集血浆上清液，避免干扰白色白细胞层。样本应立即检测或在-80摄氏度下冷冻保存，最长可达1个月。在测定前，血浆必须用1倍LPL测定缓冲液稀释1:50至1:200。

- 血清：在无抗凝剂的试管中收集血液。让血液在室温下凝固30分钟。以2500×g离心20分钟。小心移除黄色血清上清液，避免干扰白色白细胞层。样本应立即检测或在-80摄氏度下冷冻保存，最长可达1个月。在测定前，血清必须用1倍LPL测定缓冲液稀释1:50至1:200。

- 细胞裂解液：通过以1000×g离心10分钟收集10×10⁶个细胞。弃去上清液，用1毫升冷20毫摩尔/升Tris（pH 7.5）、150毫摩尔/升氯化钠重悬细胞。匀浆或超声处理细胞悬浮液。在4摄氏度下以10,000×g离心10分钟。小心收集上清液，置于冰上以供即时使用。对于长期储存，将裂解液在-80摄氏度下冷冻保存，最长可达1个月。在测定前，细胞裂解液必须用1倍LPL测定缓冲液进一步稀释1:20或更高。

- 组织样本：称取200毫克组织并切成小块。用冷PBS冲洗组织以去除红细胞和血块。在1毫升冷20毫摩尔/升Tris（pH 7.5）、150毫摩尔/升氯化钠中匀浆处理切碎的组织。在4摄氏度下以10,000×g离心10分钟。小心收集上清液，置于冰上以供即时使用。对于长期储存，将匀浆在-80摄氏度下冷冻保存，最长可达1个月。在测定前，细胞裂解液必须用1倍LPL测定缓冲液进一步稀释1:100或更高。

结果示例：

下图展示了典型的LPL活性测定试剂盒结果。使用SpectraMax Gemini XS荧光光度计（Molecular Devices）在485/525纳米滤光片组和495纳米截止波长下进行荧光测量。以下数据仅供参考，不应用于解释实际结果。  

脂蛋白脂肪酶标准曲线

脂蛋白脂酶(LPL)活性测定试剂盒文献参考：

1. Goldberg, I. J., and M. Merkel (2001) Front Biosci 6: D388-405.

2. Olivecrona, G., and T. Olivecrona (2010) Curr Opin Lipidol 21: 409-415.

3. Wang, H., and R. H. Eckel (2009) Am J Physiol Endocrinol Metab 297: E271-288.

高通量细胞失巢凋亡检测：CytoSelect 24孔板细胞失巢凋亡分析试剂盒方案

细胞与细胞外基质（ECM）的黏附对于许多贴壁细胞的生存和增殖至关重要。细胞失去与ECM的黏附或黏附不适当所导致的凋亡被称为“失巢凋亡”（anoikis）。失巢凋亡一词来源于希腊语，意为“无家可归”，它参与了组织更新和细胞稳态的生理过程。

癌细胞发展和生长的一个共同特征是转化细胞能够在“无锚定”或“球体”生长条件下存活。这种对失巢凋亡的抵抗已被证明与细胞稳态的丧失、癌症生长和转移有关。抑制细胞在ECM上的黏附、扩散和生长会阻碍细胞愈合过程，因此它可能是一个潜在的治疗靶点。防止失巢凋亡并增强细胞黏附和扩散是细胞移植技术开发的主要目标，包括祖细胞的治疗应用。进一步研究旨在控制失巢凋亡抵抗的分子机制，将有助于定义治疗多种人类恶性肿瘤的有效疗法。

CytoSelect™ 24孔失巢凋亡试剂盒提供比色法和荧光法格式，用于测量无锚定生长并监测失巢凋亡诱导的细胞死亡。试剂盒包含足够的试剂，可在涂有聚羟乙基甲基丙烯酸酯（Poly-Hema）的24孔板中检测24个样本。活细胞通过MTT或Calcein AM检测。细胞死亡通过乙锭均聚物（EthD-1）检测。

艾美捷CytoSelect 24孔板细胞失巢凋亡分析试剂盒（比色法/荧光法）（#CBA-080）测定原理：

细胞在聚羟乙基甲基丙烯酸酯（Poly-Hema）涂层板或对照板中培养。通过MTT或Calcein AM测定细胞活性。通过乙锭均聚物（EthD-1）测定失巢凋亡诱导的细胞死亡。EthD-1是检测死亡细胞的极佳标记物。EthD-1是一种红色荧光染料，只能穿透受损的细胞膜。EthD-1在结合单链DNA、双链DNA、RNA、寡核苷酸和三链DNA时，荧光强度会增强40倍。由于这些染料在与细胞相互作用之前几乎不具有荧光，因此背景荧光水平非常低。

相关产品：

1. CBA-081：CytoSelect™ 96孔失巢凋亡试剂盒

2. CBA-230：细胞衰老检测试剂盒（SA-β-半乳糖苷酶染色）

3. CBA-231：96孔细胞衰老测定试剂盒（SA β-半乳糖苷酶活性）

4. CBA-232：定量细胞衰老测定试剂盒（SA β-半乳糖苷酶）

5. CBA-240：CytoSelect™细胞活性和细胞毒性测定试剂盒

CytoSelect 24孔板细胞失巢凋亡分析试剂盒组成（室温运输）：

1. 无锚定抗性板（部件编号108001）：一个24孔聚羟乙基甲基丙烯酸酯（Poly-Hema）涂层板。

2. Calcein AM（500倍）（部件编号108002）：一瓶——50微升，溶于DMSO。

3. 乙锭均聚物（EthD-1）（500倍）（部件编号108003）：一瓶——50微升。

4. 洗涤剂溶液（部件编号108004）：一瓶——25.0毫升。

5. MTT溶液（部件编号113502）：三个试管——每个1.0毫升。

未提供的材料：

1. 用于测定失巢凋亡的细胞

2. 细胞培养基

3. 倒置荧光/光学显微镜

4. 能够读取Calcein AM（485纳米/515纳米）和EthD-1（525纳米/590纳米）荧光的荧光光度计

储存条件：

将Calcein AM和乙锭均聚物储存于-20摄氏度。将所有其他组分储存于4摄氏度。

结果示例：

下图展示了使用CytoSelect™ 24孔失巢凋亡试剂盒的典型结果。以下数据仅供参考，不应用于解释实际结果。

图：人包皮成纤维细胞BJ-TERT细胞的失巢凋亡测定。将BJ-TERT细胞以每孔50,000个细胞的密度接种到组织培养对照板或聚羟乙基甲基丙烯酸酯（Poly-Hema）涂层板中。细胞培养24小时后，通过MTT和Calcein AM测定细胞活性，而类似失巢凋亡的细胞死亡则用EthD-1染色。

CytoSelect 24孔板细胞失巢凋亡分析试剂盒文献参考：

1. Bates RC, Buret A, van Helden DF, Horton MA, Burns GF. (1994) J Cell Biol 125, 403-415.

2. Frisch SM, Francis H. (1994) J Cell Biol 124, 619-626.

3. Frisch SM, Screaton RA. (2001) Curr Opin Cell Biol 13, 555-562.

4. Meredith JE, Jr Fazeli B, Schwartz MA. (1993) Mol Biol Cell 4, 953-961.

5. Rak J, Mitsuhashi Y, Erdos V, Huang SN, Filmus J, Kerbel RS. (1995) J Cell Biol 131, 1587-1598.

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CytoSelect 24孔板伤口愈合分析试剂盒：精准评估细胞迁移与愈合能力

受损组织会启动一系列复杂且有条不紊的事件，以修复受损区域。这些事件可能包括通过血管生成因子增加血管化、细胞增殖和细胞外基质沉积的增加，以及炎症免疫细胞的浸润，作为摧毁坏死组织的过程的一部分。伤口愈合过程始于细胞向伤口极化、开始突出、迁移并关闭伤口区域。这些过程反映了单个细胞以及整个组织复合体的行为。

多年来，研究人员一直使用伤口愈合实验来研究细胞极化、组织基质重塑，或者估算不同细胞和培养条件下的细胞增殖和迁移速率。伤口愈合实验已被用于研究细胞极性以及通过Rho家族GTP酶、微管和高尔基体的方向、p53在细胞迁移中的作用以及其他生理过程对肌动蛋白细胞骨架结构的调控。这些实验通常涉及培养一个汇合的单层细胞，然后通过在单层中划线来移位或破坏一组细胞。由这个“伤口”产生的开放空隙随后会在细胞移动并填充受损区域的过程中被显微镜检查。这种“愈合”效果可能需要几个小时到几天不等，具体取决于细胞类型、条件以及“受损”区域的表面积。

这些“划痕伤口”实验的缺点是缺乏明确定义的伤口表面积，或者细胞之间的空隙。这些伤口的大小和宽度各不相同，这阻碍了结果的一致性，并在孔与孔之间造成了差异。此外，“划痕伤口”实验通常会对伤口边缘的细胞造成损伤，这可能会阻止细胞迁移到伤口部位并进行愈合。

艾美捷CytoSelect 24孔板伤口愈合分析试剂盒（#CBA-120）通过提供专有的处理过的插件克服了这种不一致性，这些插件可以产生一个明确定义的伤口区域或空隙。细胞被培养直到它们在插件周围形成单层。移除插件后，会在细胞之间留下一个精确的0.9毫米开放的“伤口区域”。此时可以对细胞进行处理并监测其迁移到伤口区域的增殖情况。通过在特定时间点固定样本或进行延时显微镜检查，可以测量这些事件的进展。

CytoSelect™伤口愈合实验试剂盒包括专有的“伤口区域”插件，用于检测细胞的迁移和伤口愈合特性。该试剂盒包含足够的试剂，可用于评估24个样本。这种插件适用于大多数细胞类型和实验条件。产生的0.9毫米伤口区域与大多数显微镜和成像系统兼容。

测定原理：

CytoSelect™ 24孔伤口愈合实验试剂盒包含2个24孔板，每个板包含12个专有的处理过的塑料插件。这些插件可以创建一个0.9毫米明确定义的伤口区域，用于测量细胞的迁移和增殖速率。迁移的细胞能够伸出突起，并最终侵入并关闭伤口区域。可以使用手动固定和显微镜成像来确定细胞的增殖和迁移速率。提供固定溶液以在特定时间点停止细胞。还提供细胞染色剂和DAPI染色剂，以便在光学和荧光显微镜下查看结果。

相关产品：

1. CBA-100：CytoSelect™ 24孔细胞迁移实验（8微米，比色法）

2. CBA-101：CytoSelect™ 24孔细胞迁移实验（8微米，荧光法）

3. CBA-102：CytoSelect™ 24孔细胞迁移实验（5微米，荧光法）

4. CBA-107：CytoSelect™ 24孔细胞迁移实验（12微米，比色法）

5. CBA-125：Radius™ 24孔细胞迁移实验（显微镜法）

CytoSelect 24孔板伤口愈合分析试剂盒组成（室温运输）：

1. 24孔伤口愈合实验板（部件编号112001）：两个24孔板，每个板包含12个伤口区域插件

2. 细胞染色溶液（部件编号11002）：一个10毫升瓶子

3. DAPI荧光染色剂（1000倍）（部件编号112002）：一个30微升小瓶

4. 固定溶液（部件编号122402）：一个20毫升瓶子

未提供的材料：

1. 迁移细胞系和培养基

2. 带DAPI滤光片（350纳米/470纳米）的光学/荧光显微镜

3. 用于测量伤口闭合的成像软件

4. 镊子

5. 磷酸盐缓冲液（PBS）

储存条件：

收到后，将DAPI荧光染色剂转移到-20摄氏度。将所有其他组分储存于4摄氏度。

结果计算：

闭合百分比：

1. 确定明确定义的伤口区域的表面积（见图1）。总表面积 = 0.9毫米 × 长度

2. 确定迁移到伤口区域的细胞的表面积。迁移细胞表面积 = 细胞迁移长度（毫米） × 2 × 长度

3. 闭合百分比（%） = 迁移细胞表面积 / 总表面积 × 100

迁移速率：

确定细胞进入明确定义的伤口区域的迁移速率：

迁移速率 = 细胞迁移长度（纳米） / 迁移时间（小时）

结果示例：

下图展示了使用CytoSelect™ 24孔伤口愈合实验试剂盒的典型结果。不应使用这些数据来解释实际结果。

图：MEF/STO细胞的闭合百分比。使用CytoSelect™ 24孔伤口愈合实验对STO细胞进行测试。细胞培养24小时，直到形成单层，此时移除插件以开始伤口愈合实验。细胞通过相差显微镜（未显示）、DAPI标记和细胞染色来监测，以确定闭合百分比（0%，50%，75%和100%）。

CytoSelect 24孔板伤口愈合分析试剂盒文献参考：

1. Ridley AJ, Schwartz MA, Burridge K, Firtel RA, Ginsberg MH, Borisy G, Parsons JT, Horwitz

AR. (2003) Science 302, 1704-9.

2. Horwitz R, Webb D. (2003) Curr Biol. 13, R756-9.

3. Lauffenburger DA, Horwitz AF. (1996) Cell 84, 359-369

https://www.amyjet.com/products/CBA-120.shtml

总磷脂酸测定试剂盒(荧光法)：精准监测细胞脂质代谢

磷脂酸（PA）是细胞中许多脂质生物合成的关键前体。PA在膜结构中发挥关键作用，并作为一种信号脂质，将细胞质蛋白招募到细胞膜上。在细胞内，PA的浓度通过强效磷脂磷酸酶的活性维持在极低水平，这些酶将磷脂酸转化为二酰基甘油（DAG）。由于DAG是另一种重要的脂质前体，它也会迅速代谢为其他膜脂质成分（例如磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺）。最终，测量细胞中PA的含量对于监测脂质合成和代谢是有用的。

Cell Biolabs的总磷脂酸测定试剂盒通过偶联酶促反应系统测量样本中的总磷脂酸含量，包括溶血磷脂酸（LPA）。首先，使用脂肪酶水解样本中的磷脂酸生成甘油-3-磷酸。接下来，甘油-3-磷酸被甘油-3-磷酸氧化酶（GPO）氧化，产生过氧化氢，过氧化氢与试剂盒中的荧光探针（激发波长530-560纳米/发射波长585-595纳米）发生反应。

艾美捷总磷脂酸测定试剂盒(荧光法)（#MET-5019）是一种简单的荧光测定法，使用96孔微孔板格式定量测量样本中的总PA（PA和LPA）。每套试剂盒提供的试剂足以进行多达100次测定，包括空白、标准品和未知样本。试剂盒包含L-α-磷脂酸标准品，检测灵敏度限为约5微摩尔。注意：该试剂盒不适用于尿液、血浆或血清样本。

相关产品：

1. STA-397：血清甘油三酯定量试剂盒（荧光法）

2. STA-399：游离甘油测定试剂盒（荧光法）

3. STA-600：磷脂酰胆碱测定试剂盒

4. STA-619：游离脂肪酸测定试剂盒（荧光法）

5. MET-5129：赖氨酸测定试剂盒（荧光法）

试剂盒组成：

1. 磷脂酸标准品（部件编号50191D）：一个200微升装的1毫摩尔/升L-α-磷脂酸小瓶。

2. 10倍测定缓冲液（部件编号50192D）：一个1.5毫升小瓶。

3. 脂肪酶溶液（部件编号50193D）：三个1.4毫升小瓶。

4. 酶混合液（部件编号50194D）：三个1.75毫升小瓶。

5. 荧光探针（部件编号261901）：一个110微升琥珀色小瓶。

未提供的材料：

1. 标准96孔荧光黑色微孔板

2. 含镁和钙的PBS

3. 细胞脂质提取试剂（甲醇、氯仿、1摩尔/升氯化钠）

储存条件：

将整个试剂盒储存于-80摄氏度。通过分装避免反复冻融。荧光探针对光敏感，应保存在琥珀色试管中。

试剂准备：

- 磷脂酸标准品：在室温下解冻。一旦均匀混合，将标准品在室温下保存，用于测定准备。该溶液在室温下稳定1周。对于长期储存，应分装并冷冻于-80摄氏度，以避免反复冻融。

- 1倍测定缓冲液：在测定准备期间，10倍测定缓冲液应解冻并保存于4摄氏度。用去离子水稀释10倍测定缓冲液。搅拌至均匀。1倍溶液在4摄氏度下稳定1个月。对于长期储存，任何未使用的10倍库存材料应分装并冷冻于-80摄氏度，以避免反复冻融。

- 脂肪酶溶液和酶混合液：在4摄氏度下解冻。一旦均匀混合，将溶液在测定准备期间保存于4摄氏度。该溶液在4摄氏度下稳定1周。对于长期储存，应分装并冷冻于-80摄氏度，以避免反复冻融。注意：这些组分提供多个试管，以减少反复冻融。

- 荧光探针：在测定准备期间解冻并保存于室温。任何未使用的材料应分装并冷冻于-80摄氏度，以避免反复冻融。

- PEU（预平衡上层相）溶液：在玻璃容器中混合50毫升氯仿、50毫升甲醇和45毫升1摩尔/升氯化钠。充分摇晃或混合溶液，然后让其分离成两相。在提取过程中使用上层相进行洗涤。

结果示例：

下图展示了总磷脂酸测定试剂盒的典型结果。以下数据仅供参考，不应用于解释实际结果。

图：总磷脂酸测定标准曲线。根据测定协议进行PA标准曲线测定。已扣除背景。

总磷脂酸测定试剂盒(荧光法)文献参考：

1. Wang, X. et al. (2006) Prog. Lipid Res. 45, 250-278.

2. Merida, I. et al. (2008) Biochem. J. 409, 1-18.

3. Jenkins, G.M. and Frohman, M.A. (2005) Cell Mol. Life Sci. 62, 2305-2316.

4. Foster, D.A. and Xu, L. (2003). Mol. Cancer Res. 1, 789-800.

5. Fang, Y. et al. (2001) Science 294, 1942-1945.

6. Avila-Flores, A. et al. (2005). J. Biol. Chem. 280, 10091-10099.

7. Schmelzle, T. and Hall, M.N. (2000) Cell 103, 253-262.

8. Lim, H.K. et al. (2003) J. Biol. Chem. 278, 45117-45127.

1-甲基腺苷(m1A)ELISA试剂盒：快速检测和定量尿液、血清或血浆样本中的1-甲基腺苷

RNA（核糖核酸）的修饰在RNA分子的功能、完整性、代谢和生物合成中起着至关重要的作用。目前已发现超过100种RNA修饰，其中大多数发生在转运RNA（tRNA）中，但它们也可以在核糖体RNA（rRNA）、小核RNA（snRNA）、信使RNA（mRNA）和长非编码RNA（ncRNA）中找到。修饰核苷的尿液排泄与多种癌症、艾滋病和其他恶性疾病状态有关。

1-甲基腺苷（m1A）是一种显著的可逆转录后RNA修饰，影响tRNA和rRNA的功能和结构。1-甲基腺苷出现在tRNA的第9、14和58位，其中第58位（m1A58）对tRNA的稳定化很重要。甲基转移酶催化将甲基添加到腺苷碱基结构的第一个氮原子上，从而使分子带上正电荷。该反应是可逆的，去甲基化酶如ALKBH3可以逆转这一过程。1-甲基腺苷可以影响核糖体的生物合成、细菌中的抗生素抗性、tRNA对环境压力的反应，并干扰沃森-克里克碱基配对，最终影响逆转录和蛋白质翻译。

癌症、类风湿性关节炎和艾滋病患者的尿液样本中均显示出高水平的m1A，这支持了其作为功能性检测生物标志物的作用。在应激条件下，已检测到血清中1-甲基腺苷水平升高。最近关于1-甲基腺苷的研究正在揭示其新的作用和机制。尽管DNA中的m1A被认为是一种导致基因组突变的损伤形式，因此需要修复，但内源性酶在RNA中增殖m1A修饰。第9位的m1A（m1A9）已知可以稳定tRNA中的典型三叶草结构。此外，所有真核生物类型的tRNA中都存在第58位的m1A（m1A58），这可能意味着它对分子结构和稳定性至关重要。尽管1-甲基腺苷已被鉴定为早期恶性疾病的标志物，但其作为修饰核苷的完整作用尚未被阐明。

艾美捷1-甲基腺苷(m1A)ELISA试剂盒（#MET-5099）是一种竞争性酶免疫分析方法，用于快速检测和定量尿液、血清或血浆样本中的1-甲基腺苷。通过将未知样本中的1-甲基腺苷吸光度与已知1-甲基腺苷标准曲线的吸光度进行比较，来确定未知样本中1-甲基腺苷的含量。该试剂盒对1-甲基腺苷的检测灵敏度约为2纳克/毫升。每套试剂盒提供的试剂足以进行多达96次测定，包括标准曲线和未知样本。

测定原理：

1-甲基腺苷（m1A）ELISA试剂盒是一种竞争性ELISA，用于定量测量1-甲基腺苷（m1A）。首先将未知的1-甲基腺苷样本或1-甲基腺苷标准品加入预先吸附了1-甲基腺苷-牛血清白蛋白（BSA）偶联物的微孔板中。经过短暂孵育后，加入抗1-甲基腺苷单克隆抗体，随后加入辣根过氧化物酶（HRP）偶联的二抗。通过与预设的1-甲基腺苷标准曲线进行比较，确定未知样本中的1-甲基腺苷含量。

相关产品：

1. MET-5097：N6-甲基腺苷（m6A）ELISA试剂盒

2. STA-320：OxiSelect™氧化DNA损伤ELISA试剂盒（8-OHdG定量）

3. STA-321：OxiSelect™ DNA双链断裂（DSB）染色试剂盒

4. STA-322：OxiSelect™紫外线诱导DNA损伤ELISA试剂盒（CPD定量）

5. STA-323：OxiSelect™紫外线诱导DNA损伤ELISA试剂盒（6-4PP定量）

1-甲基腺苷(m1A)ELISA试剂盒组成：

盒子1（室温运输）

1. 96孔蛋白结合板（编号231001）：一个96孔条板。

2. 抗1-甲基腺苷抗体（编号50991C）：一个10微升装的抗1-甲基腺苷抗体小瓶。

3. 二抗，HRP偶联物（1000倍）（编号230003）：一个20微升装的小瓶。

4. 测定稀释液（编号310804）：一个50毫升瓶。

5. 10倍洗涤缓冲液（编号310806）：一个100毫升瓶。

6. 底物溶液（编号310807）：一个12毫升琥珀色瓶。

7. 终止液（编号310808）：一个12毫升瓶。

8. 1-甲基腺苷标准品（编号50992C）：一个10微升装的5毫克/毫升1-甲基腺苷（溶于DMSO）小瓶。

盒子2（蓝冰运输）

1. 1-甲基腺苷偶联物（1000倍）（部件编号50993D）：一个10微升装的1-甲基腺苷-BSA偶联物（溶于PBS）小瓶。

未提供的材料：

1. 1-甲基腺苷样本，如尿液、血清、血浆或从细胞或组织中提取的RNA

2. RNA提取试剂盒、核酸酶P1、碱性磷酸酶

3. pH 5.2的醋酸钠；pH 7.5的Tris缓冲液

4. 10 kDa分子量截止（MWCO）离心过滤器（例如Amicon Ultra 0.5毫升）

储存条件：

收到后，将抗1-甲基腺苷抗体和1-甲基腺苷标准品分装并储存于-20摄氏度，1-甲基腺苷偶联物（1000倍）储存于-80摄氏度，以避免反复冻融。将所有其他组分储存于4摄氏度。

结果示例：

下图展示了典型的1-甲基腺苷ELISA结果。以下数据仅供参考，不应用于解释实际结果。

图上：1-甲基腺苷ELISA标准曲线

图下：人尿液、血浆和血清中的1-甲基腺苷水平。根据测定协议说明测试未稀释的人类样本。

1-甲基腺苷(m1A)ELISA试剂盒文献参考：

1. Borek, E., et al. (1977) Cancer Res. 37: 3362-3366.

2. Chen, W., et al. (2016) Sci Rep. 6: 31080.

3. Davis, G.E., et al. (1977) Clin. Chem. 23: 1427-1435.

4. Dominissini, D., et al. (2016) Nature 530: 441-446.

5. Macon, J.B., et al. (1968) Biochemistry 7(10): 3453-3458.

6. Seidel, A., et al. (2006) Br. J. Cancer 94: 1726-1733.

https://www.amyjet.com/products/MET-5099.shtml

S-腺苷甲硫氨酸(SAM)ELISA试剂盒：快速定量分析生物样本中的SAM

S-腺苷甲硫氨酸（SAM）是一种甲基供体，参与将甲基转移至DNA、蛋白质、磷脂、RNA和神经递质。分解和再生SAM的反应被称为SAM循环。SAM依赖的甲基化酶使用SAM作为底物，生成S-腺苷同型半胱氨酸（SAH），随后SAH被S-腺苷同型半胱氨酸水解酶进一步分解为同型半胱氨酸和腺苷。同型半胱氨酸可以通过蛋氨酸合成酶重新生成蛋氨酸，最终再次生成SAM。

SAM甲基基团的转移将SAM转化为SAH，后者是一种强效的甲基化抑制剂。因此，SAM/SAH比值被用作衡量细胞甲基化潜力的指标。研究表明，冠状动脉疾病患者的全血SAM水平低于正常人。内皮依赖性血管舒张与SAM水平的增加相关。此外，在非糖尿病个体中，高SAM水平与颈动脉内膜中层厚度的减少有关。

艾美捷S-腺苷甲硫氨酸(SAM)ELISA试剂盒（#MET-5152）是一种竞争性酶免疫分析方法，用于检测和定量血浆、血清、裂解液或其他生物液体样本中的SAM。该试剂盒对游离SAM的检测灵敏度限为0.625纳摩尔/升。每套试剂盒提供的试剂足以进行多达96次测定，包括标准曲线和未知样本。

相关产品：

1. MET-5151-C：S-腺苷甲硫氨酸（SAM）和S-腺苷同型半胱氨酸ELISA组合试剂盒

2. MET-5090：腺苷测定试剂盒（荧光法）

3. MET-5158：蛋氨酸测定试剂盒（荧光法）

4. MET-5163：ATP测定试剂盒（荧光法）

5. MET-5125：丙酮酸测定试剂盒（比色法）

S-腺苷甲硫氨酸(SAM)ELISA试剂盒组成：

盒子1（室温运输）

1. 96孔蛋白结合板（部件编号231001）：一个96孔条板。

2. 二抗，HRP偶联物（1000倍）（部件编号230003）：一个20微升小瓶。

3. 测定稀释液（部件编号310804）：一个50毫升瓶。

4. 10倍洗涤缓冲液（部件编号310806）：一个100毫升瓶。

5. 底物溶液（部件编号310807）：一个12毫升琥珀色瓶。

6. 终止液（部件编号310808）：一个12毫升瓶。

盒子2（干冰运输）

1. SAM偶联物（100倍）（部件编号267201）：一个100微升小瓶。

2. SAM标准品（部件编号51521D）：一个40微升小瓶，含有1.2微摩尔/升稳定形式的游离S-腺苷甲硫氨酸。

3. 抗SAM抗体（500倍）（部件编号267202）：一个15微升小瓶。

未提供的材料：

1. 磷酸盐缓冲液（PBS）

2. 含0.1%牛血清白蛋白（BSA）的PBS

储存条件：

收到后，将SAM偶联物和SAM标准品储存于-80摄氏度。将试剂盒中的其他组分储存于4摄氏度。

试剂准备：

- SAM偶联物包被板：确定所需孔数，将SAM偶联物在PBS中稀释1:100。向96孔蛋白结合板的每个孔中加入100微升1倍SAM偶联物。在4摄氏度下孵育过夜。移除稀释后的SAM偶联物，用纸巾吸干孔中的多余液体。用200微升PBS洗涤孔3次，并用纸巾吸干多余液体。向每个孔中加入200微升测定稀释液，并在室温下封闭1小时。将板转移到4摄氏度，直到开始测定。

 注意：SAM偶联物包被板不能长期稳定保存。建议在包被后24小时内使用。

- 1倍洗涤缓冲液：用去离子水将10倍洗涤缓冲液稀释至1倍。搅拌至均匀。

- 抗SAM抗体和二抗HRP偶联物：使用前，用测定稀释液将抗SAM抗体稀释1:500，二抗HRP偶联物稀释1:1000。不要储存稀释后的溶液。

样本准备：

以下建议仅供参考，可根据用户实验设计进行调整以优化结果。

- 血浆：用肝素或EDTA收集血液，并在4摄氏度下以1000×g离心10分钟。移取血浆并立即进行测定，或在-80摄氏度下保存，最长可达三个月。正常血浆样本应在进行ELISA前立即用含0.1% BSA的PBS稀释2-10倍。

- 血清：收集血清，并在4摄氏度下以1000×g离心10分钟。立即进行测定，或在-80摄氏度下保存，最长可达三个月。正常血清样本应在进行ELISA前立即用含0.1% BSA的PBS稀释2-10倍。

- 组织匀浆：称重并在冰上将组织在每克组织5-10毫升冷PBS中匀浆。在4摄氏度下以10,000×g离心15分钟。移取上清液并置于冰上。将未使用的上清液在-80摄氏度下保存，最长可达三个月。

- 细胞裂解液：通过在4摄氏度下以2000×g离心10分钟收集细胞。在冰上用1-2毫升冷PBS超声处理或匀浆细胞沉淀。在4摄氏度下以10,000×g离心15分钟。移取上清液并置于冰上。将上清液分装后用于测定。将未使用的上清液在-80摄氏度下保存，最长可达三个月。

- 其他生物液体：在4摄氏度下以1000×g离心10分钟，并回收上清液。立即进行测定，或在-80摄氏度下保存，最长可达三个月。

结果示例：

下图展示了SAM ELISA试剂盒的典型结果。以下数据仅供参考，不应用于解释实际结果。

图上：SAM标准曲线。

图下：人血清和血浆中SAM的检测。

S-腺苷甲硫氨酸(SAM)ELISA试剂盒文献参考：

1. Hirsch S, Ronco AM, Guerrero-Bosagna C, de la Maza MP, Liva L, Barrera G, Llanos M, Alliende

MA, Silva F, and Bunout D (2008) Nutrition. 11-12:1103-1109.

2. Pey AL, Majtan T, Sanchez-Ruiz JM, and Kraus JP (2013) Biochem J. 449: 109-121

3. Yi P, Melnyk S, Pogribna M, Pogribny IP, Hine RJ, and James SJ (2000) J. Biol. Chem.275:29318-29323.

4.Stabler SP and Allen RH (2004) Clin. Chem. 50: 365-372.