ProFoldin可溶性蛋白质折叠柱--蛋白质研究的得力助手

来宝网 2025/1/17点击78次

可溶性蛋白质折叠柱是一种专门用于蛋白质折叠研究的实验工具。它采用先进的设计理念和优质的材料制作而成，具有高效、稳定、便捷的特点。该折叠柱内部结构精密，能够为蛋白质提供一个理想的折叠环境，促进蛋白质在温和的条件下进行正确的折叠，从而恢复其天然的三维结构和生物活性。

在蛋白质科学研究中，蛋白质折叠是一个关键环节，而可溶性蛋白质折叠柱的出现，为研究人员提供了一种有效的手段来探索蛋白质折叠的机制、影响因素以及折叠过程中的动态变化等。通过使用该折叠柱，可以对各种可溶性蛋白质进行折叠实验，有助于深入理解蛋白质的功能与结构之间的关系，为相关疾病的诊断、治疗以及药物研发等提供重要的理论依据和实验支持。

艾美捷ProFoldin旋转柱蛋白折叠筛试剂盒:

代码：SFC01-10

标签：蛋白质科学（蛋白质折叠）

本品包括10个离心柱#1-10、160微升的溶液A和600微升的溶液B。

大型制备蛋白折叠柱组

PFC01 PFC02 PFC03 PFC04 PFC05 PFC06 PFC07 PFC08 PFC09 PFC10

在筛选试剂盒（SFC01-10）确定了最佳折叠条件后，该大型装置专为大规模（5-10mg）制备蛋白质折叠实验而设计。该柱组包括4个相同的制备蛋白折叠柱和试剂。每列的缓冲条件与屏幕套件中的10列中的一列相同。

ProFoldin旋转柱蛋白折叠筛试剂盒文献参考：

Kuznetsova VE et al, Genome-wide Analysis of Substrate Specificities of the Escherichia coli Haloacid Dehalogenase-like Phosphatase Family, J. Biol. Chem. VOL. 281, NO. 47, pp. 36149–36161 (2006).

Cha J et al, Characterization of the β-Lactam Antibiotic Sensor Domain of the MecR1 Signal Sensor/Transducer Protein from Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus, Biochemistry, 46 (26), pp 7822–7831 (2007).

Hao X et al, Overexpression and Purif ication of Membrane Transport Protein with Native Functions, Chinese J. Bioch. Mol. Biol. 23:12, 1051-1058 (2007).

Thomas J et al, Acyl Carrier Protein Phosphodiesterase (AcpH) of Escherichia coli Is a Non-Canonical Member of the HD Phosphatase/Phosphodiesterase Family Biochemistry, 46, 129-136 (2007).

ProFoldin专注于蛋白质科学领域的研究与开发。ProFoldin提供一系列与蛋白研究相关的产品和服务，包括蛋白除盐、蛋白折叠、膜蛋白提取、聚合酶、高通量检测试剂和荧光染料等。其中蛋白折叠柱和试剂、膜蛋白提取试剂盒为特色产品，成为了广大科研工作者研究蛋白尤其是膜蛋白有力的科研工具。

艾美捷科技是ProFoldin的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

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ProFoldin-96孔蛋白折叠板操作步骤说明

ProFoldin 96孔蛋白质折叠板为蛋白质折叠筛选提供了96种多样化的条件。这96种折叠条件包括不同的pH值、盐浓度和添加剂。每次实验使用母板中的100微升溶液。每个母板的每个孔中都含有500微升溶液，可用于多次折叠各种蛋白质的实验。每种条件下使用约20微克的盐酸胍溶解的包涵体蛋白。一旦确定了折叠条件，就可以为特定条件（孔位）提供制备规模折叠的制备折叠溶液。

艾美捷ProFoldin-96孔蛋白折叠板：

代码：PFS096

组成：一个含有96种蛋白质折叠溶液的96孔板，母板的每个孔中都有500微升溶液；1.4毫升包涵体溶解剂；4毫升中和剂和一个透明的96孔板。

蛋白质折叠操作步骤：

样品准备：请参阅包涵体制备的协议。蛋白质浓度约为10毫克/毫升。

板准备：将板以1000xg的速度离心1分钟，使所有溶液都收集到孔底。轻轻取下板盖，将100微升溶液转移到透明板中。在4℃下预孵育板，并在整个蛋白质折叠过程中将试剂保持在4℃。

稀释：将上述2微升蛋白质溶液稀释到每个孔中的溶液中。然后在4℃下孵育板4小时。

中和：将8微升中和剂与每个孔中的溶液混合。在4℃下孵育板过夜。

折叠产物分析

溶解度：未折叠的蛋白质会形成肉眼可见的沉淀，可通过在405纳米（OD405）处的光散射测量来检测。溶解的蛋白质可以通过SDS - PAGE进行分析。为此，将板以1000xg的速度离心10分钟，然后将每个孔中的10微升上清液与10微升水和7微升4xSDS - PAGE上样缓冲液混合。

活性测试：使用活性测定（催化或结合活性）来检查蛋白质活性。在测定中将折叠产物稀释10到20倍。例如，如果测定反应体积为100微升，则在每次反应中加入5到10微升的折叠产物。

对于功能未知或无可用测定的蛋白质：折叠良好的蛋白质可以通过离子交换、亲和或凝胶排阻色谱柱在天然缓冲液中进行纯化。CD或SEC - MALS分析仅适用于纯化的蛋白质样品。

ProFoldin-96孔蛋白折叠板相关产品：

旋转柱蛋白质折叠筛选试剂盒 SFC01 - 10

稀释膜蛋白折叠筛选试剂盒 MPS10 - 20

旋转柱膜蛋白折叠筛选试剂盒 MFC01 - 20

膜蛋白提取试剂盒 MPE01 - 12S

易用蛋白质测定试剂 EPA001

核酸去除试剂盒 NAR911

蛋白质稳定性和聚集测定试剂盒 PSA200

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ProFoldin-旋转柱膜蛋白折叠筛选试剂盒，助力膜蛋白折叠实验

旋转柱膜蛋白折叠试剂盒是专为使用旋转柱从包涵体折叠膜蛋白而设计的。旋转柱膜蛋白折叠筛选试剂盒（MFC01 - 20）包含20个蛋白质折叠旋转柱，代表20种不同的条件，含有各种去污剂和脂质，可形成胶束或双层胶束。这种胶束或双层胶束环境有助于折叠受体、离子通道和其他膜蛋白。筛选试剂盒中的折叠蛋白样品用于SDS - PAGE和活性测试。根据测试结果，选择最佳条件（即柱编号）用于制备性折叠。对于膜蛋白的规模化折叠，请使用大规模制备性膜蛋白折叠柱套装（MFC01至MFC20）。

每个旋转柱膜蛋白折叠筛选试剂盒包含160微升试剂A、160微升试剂B、1.1毫升试剂C以及20个预装填的旋转柱，用于20种不同的蛋白质折叠条件。

每个小规模制备性膜蛋白折叠柱套装#1至#20包含用于柱#1至10的160微升试剂A或用于柱#11至20的试剂B、1.1毫升试剂C以及10个相同的预装填旋转柱，这些旋转柱是筛选试剂盒中20种条件中选定的折叠条件。

艾美捷ProFoldin-离心柱膜蛋白折叠筛选试剂盒：

代码：MFC01-20

组成：旋转柱膜蛋白折叠筛套件 #MFC01-20

小型制备膜蛋白折叠柱组#1至#20 #MFC01S至MFC20S

蛋白质折叠操作步骤：

请参阅包涵体制备的协议。蛋白质浓度约为2 - 5毫克/毫升。

样品准备：为柱#1至10准备装载样品A，为柱#11至20准备装载样品B。要准备装载样品A，将130微升溶解的包涵体与130微升试剂A混合。要制备装载样品B，将130微升溶解的包涵体与130微升试剂B混合。

柱准备：使用台式微量离心机将柱以3200转/分钟的速度离心30秒。取下柱底部的尖端和盖子。将柱放入1.5毫升微量离心管中。将柱以1400转/分钟的速度离心2分钟，然后将每个柱转移到一个干净的标记好的1.5毫升微量离心管中。

蛋白质折叠：将25微升装载样品A加载到#1至10的每个柱上；将25微升装载样品B加载到#11至20的每个柱上。将柱以3200转/分钟的速度离心4分钟。丢弃柱，将洗脱液在4℃下孵育2小时。然后向每个洗脱液中加入50微升试剂C，并将溶液在4℃下孵育过夜。将溶液以14000转/分钟的速度离心5分钟，并收集上清液进行分析。

折叠产物分析：

SDS - PAGE ：使用SDS - PAGE检查每种折叠条件下的蛋白质溶解度。要制备SDS - PAGE样品，将每个柱中的10微升折叠产物与10微升水和7微升4倍SDS - PAGE上样缓冲液混合。

活性测试：使用活性测定（催化或结合活性）来检查蛋白质活性。在测定中将折叠产物稀释10到20倍。例如，如果测定反应体积为100微升，则在每次反应中加入5到10微升的折叠产物。测定缓冲液中可能包含1毫摩尔十二烷基麦芽糖苷作为去污剂。

注意：如果没有可用的活性测定，色谱行为可以用作蛋白质折叠状态的指标。折叠良好的膜蛋白可以在含有适当去污剂（例如，1毫摩尔十二烷基麦芽糖苷）的缓冲液中进行纯化。CD或SEC - MALS分析仅适用于纯化的蛋白质样品。

包涵体溶解：

估计纯化包涵体中的蛋白质含量。加入溶解缓冲液（20毫摩尔Tris - HCl，pH 8.0，8摩尔尿素，10毫摩尔DTT）的体积，使蛋白质浓度约为10毫克/毫升。通过在室温下用溶解缓冲液搅拌包涵体2到4小时来完成溶解。大部分沉淀应被溶解。

将溶解材料以30000转/分钟的速度离心45分钟。保留上清液作为溶解的包涵体。

ProFoldin-离心柱膜蛋白折叠筛选试剂盒相关产品：

膜蛋白：

大规模制备性膜蛋白折叠柱套装 MFC01至MFC20

稀释膜蛋白折叠筛选试剂盒 MPS10 - 20

可溶性蛋白：

旋转柱蛋白质折叠筛选试剂盒 SFC01 - 10

96孔蛋白质折叠板 PFS096

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ProFoldin-膜蛋白提取试剂盒常见的问题解决方案

膜蛋白的纯化需要将蛋白质从细胞膜中溶解（提取）出来。常见的问题有：（1）感兴趣的膜蛋白无法高效地从膜中提取出来；（2）蛋白质以非活性形式被提取。ProFoldin的膜蛋白提取溶液通过使用多种非变性去污剂和合成脂质类似物，包括烷基糖苷、酰基 - N - 甲基葡糖酰胺、胆汁酸盐、烷基胺氧化物、烷基聚乙烯、两性去污剂和合成磷脂胆碱衍生物，为从细胞膜中高效提取和稳定膜蛋白提供了最佳条件。

艾美捷ProFoldin-膜蛋白提取试剂盒：

膜蛋白提取试剂盒（#MPE01 - 12S）包含0.5毫升的12种溶液，用于筛选和微量制备性提取细胞膜中的膜蛋白（最多1.5毫克）。

膜蛋白提取试剂盒Plus（#MPE01 - 12P）包含5毫升的12种溶液，用于筛选和中等规模制备性提取细胞膜中的膜蛋白（最多16毫克）。

膜蛋白提取溶液（#MPE01至MPE12）提供40毫升的特定溶液，用于大规模制备性提取细胞膜中的膜蛋白（最多130毫克）。

MPE01 MPE02 MPE03 MPE04 MPE05 MPE06

MPE07 MPE08 MPE09 MPE10 MPE11 MPE12

膜蛋白提取溶液中的去污剂列表：

烷基糖苷 MPE01，MPE02

酰基 - N - 甲基葡糖酰胺 MPE04

胆汁酸盐 MPE06

烷基胺氧化物 MPE07

烷基聚乙烯 MPE03，MPE05，MPE11

两性去污剂 MPE08，MPE09，MPE12

磷脂胆碱衍生物 MPE10

ProFoldin-膜蛋白提取试剂盒文献参考：

Bonander N et al, Production, purification and characterization of recombinant, full-length human claudin-1, PLoS One. 8(5):e64517 (2013).

Welsh MJ et al, Transgenic pig models of cystic fibrosis, US patent 20140255975A1, Sep 11, 2014.

Vega MC, Advanced Technologies for Protein Complex Production and Characterization. Springer Cham Heidelberg, New York. p148, (2016).

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Quantabio-PerfeCTa多重qPCR超混合试剂--进行高灵敏度的4目标检测实验

Quantabio-PerfeCTa多重qPCR超混合试剂是一种2倍浓缩、即用型反应混合物，包含了除引物、探针和DNA模板之外的所有必要成分，用于高多重实时定量PCR。该试剂配方突破了多重qPCR的界限，能够在单次扩增反应中实现多达5个目标的无偏扩增。在多重PCR中，低丰度目标在共扩增过程中常被高丰度参考目标抑制，这会显著影响单个检测的灵敏度。PerfeCTa多重qPCR超混合试剂（低ROX）提供具有异常广泛的线性检测范围和检测限（LOD）灵敏度的检测性能，其多重qPCR性能可与单重检测性能相媲美，无需对单个引物检测进行严格的滴定。这种超混合试剂的关键成分是超纯的AccuStart™热启动Taq DNA聚合酶，该聚合酶在初始PCR变性步骤之前被完全抑制。在95℃热激活时，抗体迅速且不可逆地变性，释放出一个完全活跃的高产量Taq DNA聚合酶突变体。这使得引物延伸具有特异性和高效性，同时具备在常温下进行反应装配的便利性。

艾美捷Quantabio-PerfeCTa多重qPCR超混合试剂（#95063-01K）组成：

2倍浓缩的超混合试剂，包含：

1、含有为多重qPCR优化的MgCl₂、dATP、dCTP、dGTP和dTTP的反应缓冲液。

2、超纯的AccuStart热启动Taq DNA聚合酶。

3、参考染料（如适用）。

4、专有的性能增强添加剂和稳定剂。

储存与操作：

收到后，请将各组分存放在-25℃至-15℃的恒温冰柜中，并避免光照。

Quantabio-PerfeCTa多重qPCR超混合试剂特点：

1、AccuStart II热启动Taq DNA聚合酶具有严格、超纯和高产量的特点，可实现最大检测灵敏度和目标精确度。

2、使用cDNA或基因组DNA模板，具有广泛的线性检测范围。

3、能够进行高灵敏度的4目标检测实验，并带有共同扩增的、强大的内部阳性对照。

4、支持使用专有的防泡沫技术进行高效的涡旋混合。

5、PerfeCTa多重qPCR超混合试剂适用于分子生物学应用。本品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。

Quantabio致力于应用科学、转化医学以及生命科学研究中要求极为严苛的分子检测应用领域，提供先进的 DNA 和 RNA 扩增试剂；专注于克隆、聚合酶链式反应（PCR）、实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）以及下一代测序（NGS）等应用。

艾美捷科技是Quantabio的合作特约伙伴，为科研工作者提供优质的产品与服务。

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Quantabio-PerfeCTa SYBR Green快速混合试剂：2倍浓缩，即用型反应混合物

Quantabio-PerfeCTa SYBR Green FastMix是一种2倍浓缩、即用型的反应混合物，包含了除引物和DNA模板之外的所有成分。这种经过严格优化的主混合物含有专有的缓冲液技术、稳定剂和AccuFast Taq DNA聚合酶，能够在加速或常规热循环条件下为SYBR Green检测提供最大的检测精度、灵敏度和PCR效率。基于染料的检测方法对高度特异性的扩增至关重要，因为双链DNA染料会结合任何扩增子，包括非目标引物延伸和引物二聚体。AccuFast热启动Taq DNA聚合酶含有一种专有的超纯单克隆抗体混合物，这种混合物在初始PCR变性步骤之前严格抑制引物延伸，并允许在热循环之前在常温下进行设置和多天储存。AccuFast能够快速释放完全活性的酶，以支持加速热循环条件。

艾美捷Quantabio-PerfeCTa SYBR Green快速混合试剂（#95071-012）组成：

单管、2倍浓缩的试剂包含：

1、含有分子级MgCl₂、dATP、dCTP、dGTP和dTTP优化浓度的反应缓冲液。

2、AccuStart II Taq DNA聚合酶。

3、SYBR Green I染料。

4、专有的酶稳定剂和性能增强添加剂。

5、校准的参考染料（如适用）。

储存与操作：

收到后，请将各组分存放在-25℃至-15℃的恒温冰柜中，并避免光照。

解冻后，使用前请充分混匀。

Quantabio-PerfeCTa SYBR Green快速混合试剂特点：

1、2倍浓缩的试剂减少了移液步骤，简化了反应装配过程，并提高了准确性。

2、超纯的AccuStart酶技术提供了卓越的检测灵敏度和特异性——严格控制的、高产量的Taq DNA聚合酶突变体由多表位抗体热启动。

3、专有的防泡沫配方支持高效的涡旋混合。

4、FastMix配方既支持快速热循环条件，也支持标准热循环条件。

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Quantabio-PerfeCTa qPCR快速混合物UNG：更经济，实验室通量更高

Quantabio-PerfeCTa qPCR FastMix, UNG是一种2倍浓缩、即用型的反应混合物，包含了除引物、探针和模板之外的所有成分，适用于不需要内参染料的实时定量PCR系统。专有的缓冲液和稳定剂经过特别优化，能够在使用快速PCR循环时间和减少反应体积时，与TaqMan或TaqMan MGB探针化学配合，提供最大的PCR效率、灵敏度和强大的荧光信号。这使得在常规或快速升温速率的qPCR系统上，试剂更加经济，实验室通量更高。这种FastMix的增强特异性抑制了同源序列之间的交叉反应，提高了在SNP应用中的检测和区分能力。这种FastMix的关键成分是AccuFast™ Taq DNA聚合酶。这种热启动Taq含有专有的单克隆抗体混合物，这些抗体会与聚合酶结合，并在初始PCR变性步骤之前使其保持非活性状态（在室温下超过48小时）。与Quantabio的AccuStart™ Taq DNA聚合酶类似，这些抗体在初始PCR变性步骤中会被不可逆地失活。然而，与其他抗体热启动聚合酶不同，AccuFast Taq在95℃时能够瞬间激活。在60℃时，完全活性的、未修饰的Taq DNA聚合酶的快速恢复对于高效的延伸动力学至关重要。在60℃时，长达200bp的片段扩增可在不到20秒内完成。此外，这种FastMix中的dNTP混合物用dUTP代替了dTTP。加入的尿嘧啶-N-糖基化酶（UNG）可以防止来自先前含dU的PCR的残留污染的扩增。

艾美捷Quantabio-PerfeCTa qPCR快速混合物UNG（#95076-012）组成：

2倍反应缓冲液，含有优化浓度的MgCl₂、dNTPs、AccuFast Taq DNA聚合酶、UNG和稳定剂。

储存与操作：

收到后，请将各组分存放在-25℃至-15℃的恒温冰柜中，并避免光照。

Quantabio-PerfeCTa qPCR快速混合物UNG特点：

1、快速循环协议

2、含有UNG，以消除遗留污染的放大

PerfeCTa qPCR FastMix UNG试剂盒适用于分子生物学应用。本品不用于诊断、预防或治疗疾病。

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Quantabio-qScript一步法SYBR Green RT-qPCR试剂盒，50倍浓缩的qScript一步法逆转录酶

qScript One-Step SYBR Green RT-qPCR Kit是一种方便且高灵敏度的解决方案，用于RNA模板的定量RT-PCR（RT-qPCR），使用SYBR Green I染料检测和基因特异性引物。

Quantabio-qScript一步法SYBR® Green RT-qPCR试剂盒是一种方便且高灵敏度的解决方案，用于RNA模板的定量RT-PCR（RT-qPCR），采用SYBR Green I染料检测和基因特异性引物。cDNA合成和PCR扩增在同一管中进行，无需在操作过程中打开管盖。专有的反应缓冲液经过特别配制，旨在最大化逆转录酶和Taq DNA聚合酶的活性，同时最小化引物二聚体和其他非特异性PCR产物的潜在风险。这种试剂与快速和标准qPCR循环协议均兼容。

精确扩增对于采用SYBR Green I技术的RT-qPCR的成功至关重要，因为这种染料会结合扩增过程中产生的所有双链DNA。这种一步法试剂含有超纯的AccuStart热启动Taq DNA聚合酶，在初始PCR变性步骤之前完全处于抑制状态。在95℃热激活时，抗体迅速且不可逆地变性，释放出完全活性的高产量Taq DNA聚合酶。

艾美捷Quantabio-qScript一步法SYBR Green RT-qPCR试剂盒（#95087-200）组成：

1、50倍浓缩的qScript一步法逆转录酶——优化的50倍配方的重组MMLV逆转录酶，用于一步法RT-PCR。

2、一步法SYBR Green主混合液（2倍）——含有dNTPs、氯化镁、AccuStart Taq DNA聚合酶、稳定剂和SYBR Green I染料的2倍反应缓冲液。

3、无核酸酶水。

储存与操作：

收到后，请将各组分存放在-25℃至-15℃的恒温冰柜中。

Quantabio-qScript一步法SYBR Green RT-qPCR试剂盒特点：

1、敏感的RNA检测：采用性能优异的RNase H（+）M-MLV逆转录酶进行RNA检测。

2、精确的目标扩增：严格的超纯抗体热启动确保精确的目标扩增。

3、灵活的热循环条件：灵活的化学缓冲液支持传统或加速的热循环条件。

qScript One-Step SYBR Green RT-qPCR Kit适用于分子生物学应用。本品不打算用于诊断、预防或治疗疾病。

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