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Glucagon ELISA：定量分析胰高血糖素在血糖调节中的作用

Glucagon ELISA是一种用于定量测定胰高血糖素（Glucagon）的酶联免疫吸附测定技术。胰高血糖素是一种由胰腺产生的多肽激素，具有29个氨基酸，在葡萄糖代谢和维持血糖平衡中起着关键作用。这种ELISA试剂盒能够特异性地检测人、小鼠、大鼠等不同物种的血清、血浆或细胞培养上清液中的胰高血糖素水平。

该试剂盒具有高灵敏度和强特异性，能够与胰高血糖素特异性结合，而与人脑源性神经营养因子（BDNF）、β-神经生长因子（β-NGF）、神经生长因子3（NT-3）、神经生长因子4（NT-4）、睫状神经营养因子（CNTF）等没有交叉反应。此外，与大鼠胰高血糖素有35%的交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%，这表明其具有良好的重复性和可靠性。

本试剂盒仅供专业使用，仅供实验室使用。

艾美捷Glucagon ELISA（ALP-48-GLUHU-E01）组成部分：

1. 抗体包被板

2. 胰高血糖素标准品

3. 标记抗原

4. SA-HRP溶液

5. 底物缓冲液

6. OPD片

7. 终止溶液

8. 缓冲液（A）

9. 缓冲液（B）

10. 浓缩洗涤液

11. 粘附膜

Glucagon ELISA特性：

该试剂盒以敏感的定量能力和高分析特异性为特点。此外，它不受血浆样本中其他组分的影响，且无需样本预处理。本试剂盒中使用的胰高血糖素标准品是一种高纯度的合成产品（纯度高于98%），生物素标记的胰高血糖素经过HPLC纯化。

胰高血糖素ELISA试剂盒分析特异性：

该ELISA试剂盒对胰高血糖素具有高分析特异性，并且对肠道高血糖素、GLP-1和GLP-2没有交叉反应。

Glucagon ELISA检测原理：

本ELISA试剂盒用于测定大鼠、小鼠或人血浆样本中的胰高血糖素，基于一种竞争性酶免疫分析，使用一种高特异性的抗胰高血糖素抗体和生物素-亲和素系统。96孔板用兔抗胰高血糖素抗体包被。将胰高血糖素标准品或样本和生物素标记的胰高血糖素抗原加入孔中进行竞争性免疫反应。孵化和板洗涤后，加入HRP标记的链霉亲和素（SA-HRP），在孔的表面形成HRP标记的链霉亲和素-生物素标记的胰高血糖素-抗体复合物。最后，通过邻苯二胺二盐酸盐（OPD）测定HRP酶活性，并计算大鼠、小鼠或人胰高血糖素的浓度。

材料：

设备需求（不提供）：

1. 能够读取在490纳米处的吸光度2.5的微孔板阅读器。

2. 能够以100转每分钟的速度摇动的微孔板振荡器。

3. 微孔板洗涤装置及带抽吸系统的分配器。

4. 用于8孔或12孔的微量移液管和多通道移液管及其吸头。

5. 用于制备标准溶液的试管。

6. 1000毫升的量筒。

7. 蒸馏水或去离子水。

样本处理：

血浆样本的准备

推荐使用含EDTA-2Na的血液采集管来收集血浆样本，并应立即添加抑肽酶（每1毫升血液添加500kIU）。强烈建议在采集后尽快测试血浆样本。如果需要延后测试，应将样本分装到试管中，并在-30°C或更低温度下冷冻（推荐-70°C以下），在分析前解冻。避免样本反复冻融。

试剂准备：

1. 标准溶液的准备：取标准品（冻干的大鼠/小鼠/人胰高血糖素，每瓶10ng）用1毫升缓冲液（A）进行溶解，得到浓度为10000 pg/mL的标准溶液。取0.5毫升溶解后的标准溶液，并用1.0毫升缓冲液（A）稀释，得到3333 pg/mL的标准溶液。按相同稀释比例依次制备出其他浓度的标准溶液（1111, 370, 123, 和 41 pg/mL）。以缓冲液（A）作为0 pg/mL的对照。

2. 标记抗原溶液的准备：用6毫升缓冲液（B）溶解标记的抗原。

3. 底物溶液的准备：将1片OPD片溶解在12毫升底物缓冲液中。应在使用前立即准备。

4. 洗涤溶液的准备：用蒸馏水或去离子水将50毫升浓缩洗涤溶液稀释至1000毫升。

5. 其他试剂：其他试剂直接使用。

https://www.amyjet.com/products/ALP-11-GLUHU-E01.shtml

mFluor Violet 450小麦胚芽凝集素(WGA)探针实验方案说明

AAT Bioquest 的小麦胚芽凝集素（WGA）能与N-乙酰葡萄糖胺和唾液酸结合，是目前研究较多且有用的凝集素之一。小麦胚芽凝集素可用于标记细胞膜（如：活细胞、固定细胞、组织切片、酵母、革兰氏阳性细菌及真菌等 ），从而进行荧光成像和分析。也可用于免疫荧光（IF）、免疫组织化学（IHC）和流式细胞术（FC）。

艾美捷mFluor Violet 450小麦胚芽凝集素(WGA)探针：

货号：AAT-25500

Ex(nm) 406

Em(nm) 445

溶    剂 Water

存储条件 在-15℃以下保存，避光防潮

优势：

1.应用广泛；

2.不受膜电位控制；

3.用于细胞膜表面的标记，有助于膜结构的成像

图：将HeLa 细胞用浓度为 10 µg/mL 的 mFluor™ Violet 450小麦胚芽凝集素 (WGA) 探针染色 30 分钟。使用配备紫罗兰滤光片组的荧光显微镜获取的图像。

mFluor Violet 450小麦胚芽凝集素(WGA)探针实验方案：

样品分析方案

溶液配制

储备溶液配制：

mFluor 450 小麦胚芽凝集素 (WGA) 缀合物储备液 (200X)

将 500 µL ddH2O 添加到粉末小瓶中，制成 2 mg/mL 的储备溶液。

注意：重新配制的缀合物溶液可在 2-8 °C 下短期储存，或在 -20 °C 下长期储存。

工作溶液配制：

mFluor 450 小麦胚芽凝集素 (WGA) 缀合物工作溶液 (1X)

将 5 μL 200X WGA 储备溶液添加到 1 mL HHBS 缓冲液中。

注意：不同细胞系的优化染色浓度可能不同。 活细胞的推荐起始浓度为 5-10 µg/mL。

操作方案

活细胞染色：

1. 用 HHBS 缓冲液清洗细胞两次。

2. 添加 100 µL mFluor 450-WGA 工作溶液。

3. 将细胞与 WGA 工作溶液在 37°C 下孵育 10-30 分钟。

4. 用 HHBS 缓冲液清洗细胞两次。

5. 使用 Ex/Em = 406/445 nm在荧光显微镜上成像细胞。

固定细胞染色：

1. 用含4%甲醛的PBS溶液固定细胞。

注意：对于固定细胞膜染色，建议在没有透化步骤的情况下进行染色。固定后透化步骤会导致细胞内区室染色，如高尔基体和内质网 (ER) 结构染色。

2. 添加 100 µL mFluor 450-WGA 工作溶液。

3. 在室温下，用 WGA 工作溶液孵育细胞 10-30 分钟。

4. 用 HHBS 缓冲液清洗细胞两次。

5. 使用Ex/Em = 406/445 nm在荧光显微镜上成像细胞。

https://www.amyjet.com/products/AAT-25500.shtml

RecombiMAb anti-mouse CD40抗体：研究CD40/CD154相互作用的关键试剂

RecombiMAb anti-mouse CD40抗体是一种重组嵌合型单克隆抗体，它与小鼠CD40（也称为Bp50）反应。CD40是一种48 kDa的I型跨膜糖蛋白，属于肿瘤坏死因子受体（TNFR）超家族。这种抗体的可变结构域序列与原始FGK4.5克隆号相同，但恒定区序列已经从大鼠IgG2a变为小鼠IgG2a，且不包含Fc突变。

CD40在抗原呈递细胞（APCs）上广泛表达，例如树突状细胞、B细胞、巨噬细胞和单核细胞，以及非免疫内皮细胞、基底上皮细胞和一系列肿瘤细胞。CD40与其配体CD154结合后，作为共刺激分子激活B细胞、树突状细胞、单核细胞和其他APCs。它在B细胞活化、分化、增殖和免疫球蛋白同种型转换以及树突状细胞成熟中起着重要作用。激动性CD40单克隆抗体已被证明可以激活APC并促进抗肿瘤T细胞反应。FGK4.5单克隆抗体是一种激动性抗体，已被证明可以激活表达CD40的APC，也可用于体外和体内抑制CD40/CD154相互作用。

艾美捷RecombiMAb anti-mouse CD40抗体：

货号 BXC-CP133

亚型：小鼠IgG2a，κ

推荐同型对照：InVivoPlus小鼠IgG2a同型对照，未知特异性

推荐稀释缓冲液：InVivoPure pH 7.0稀释缓冲液

偶联：未偶联。可通过抗体偶联服务进行偶联。

免疫原：重组小鼠CD40融合蛋白

报告应用：体内CD40激活*

体外B细胞刺激/激活*

*报告为原始大鼠IgG2a FGK4.5抗体

配方：PBS，pH 7.0

不含稳定剂或防腐剂

内毒素：<1EU/mg (<0.001EU/μg)

由LAL凝胶凝集试验确定

聚集：<5%

由SEC确定

纯度：>95%

由SDS-PAGE确定

无菌：0.2微米过滤

生产：在无动物设施中从CHO细胞上清液中纯化

纯化：Protein G

分子量：150 kDa

小鼠病原体检测：

Ectromelia/Mousepox Virus: Negative

Hantavirus: Negative

K Virus: Negative

Lactate Dehydrogenase-Elevating Virus: Negative

Lymphocytic Choriomeningitis virus: Negative

Mouse Adenovirus: Negative

Mouse Cytomegalovirus: Negative

Mouse Hepatitis Virus: Negative

Mouse Minute Virus: Negative

Mouse Norovirus: Negative

Mouse Parvovirus: Negative

Mouse Rotavirus: Negative

Mycoplasma Pulmonis: Negative

Pneumonia Virus of Mice: Negative

Polyoma Virus: Negative

Reovirus Screen: Negative

Sendai Virus: Negative

Theiler’s Murine Encephalomyelitis: Negative

在实验应用方面，RecombiMAb anti-mouse CD40抗体可用于体内CD40激活和体外B细胞刺激/激活。该抗体的推荐同型对照为InVivoPlus mouse IgG2a isotype control，未知特异性（#BP0085），推荐抗体稀释液为InVivoPure pH 7.0 Dilution Buffer。储存条件为4°C，不宜冷冻保存。

这种抗体的临床前研究对于开发新型免疫治疗策略具有重要意义，尤其是在激活抗肿瘤免疫反应方面。通过使用RecombiMAb anti-mouse CD40抗体，研究人员可以更深入地了解CD40在免疫调节中的作用，以及如何利用这一靶点来设计更有效的治疗方案。

https://www.amyjet.com/products/BXC-CP133-1mg.shtml

WIESLAB补体系统替代途径：定性测定人血清中功能性替代补体途径

Wieslab补体系统替代途径试剂盒（WIESLAB Complement System Alternative Pathway）是一种酶免疫测定法，用于定性测定人血清中功能性替代补体途径。仅供体外诊断使用。

概述和解释：

补体系统在慢性、自身免疫和感染性疾病中发挥着重要作用。补体激活有三个途径（图1），即经典途径、替代途径和最近发现的MBL途径。

补体活性受损会导致人类易患重复性暴发性或严重感染，并可能促进自身免疫疾病的发展。补体的不适当激活会导致慢性炎症和组织损伤。

艾美捷Wieslab补体系统替代途径试剂盒（WIESLAB Complement System Alternative Pathway）（#COMPLAP330）的测定原理：

Wieslab 补体测定结合了补体激活的溶血测定原理和使用特定于补体激活产生的新抗原的标记抗体。产生的新抗原量与补体途径的功能活性成正比。

在补体系统AP试剂盒中，微孔板条的孔被特定的替代途径激活剂包被。患者血清在含有特定阻断剂的稀释液中稀释，以确保只有替代途径被激活。在孔中孵育稀释的患者血清期间，补体通过特定包被被激活。

然后洗涤孔，并使用特定的碱性磷酸酶标记抗体检测在MAC形成期间表达的新抗原的C5b-9。

在进一步洗涤步骤后，通过与碱性磷酸酶底物溶液孵育获得特定抗体的检测。补体激活量与颜色强度相关，并以吸光度（光密度（OD））来衡量。

试剂盒组件和试剂储存：

一个框架，带有无色分离孔（12x8），密封在带有干燥剂的铝箔包装中。孔被LPS包被。

35毫升AP稀释液（Dil AP），标为红色。

13毫升含有碱性磷酸酶标记的C5b-9抗体的结合物（蓝色）。

13毫升即用型底物溶液。

30毫升30倍浓缩的洗涤溶液。

0.2毫升阴性对照（NC），含有人血清。（应按患者血清样本稀释）。

0.2毫升阳性对照（PC），含有冻干人血清，见下文“阳性对照的重组”。

试剂盒中的所有试剂都已准备好使用，除了洗涤溶液和对照品。试剂应储存在2-8°C，除了阳性对照。阳性对照必须储存在-20°C。

所需但未提供的物料或设备：

带有405纳米滤光片的微孔板读取器。

带有一次性吸头的精密移液器。

用于条带的清洗器、吸水纸、管子和一个计时器。

操作程序：

仅取出所需数量的孔，小心重新密封铝箔包装。在分析前让所有溶液平衡至室温（20-25°C）。

洗涤溶液的准备

如果浓缩洗涤溶液瓶中观察到盐晶体，将瓶子置于37°C水浴中直到晶体溶解，然后再稀释洗涤溶液。将30毫升30倍浓缩洗涤溶液稀释在870毫升蒸馏水中。当储存在2-8°C时，稀释后的洗涤溶液稳定直到试剂盒的有效期。

阳性对照的重组：

轻轻敲击所有冻干物料至瓶底并取下盖子。立即向冻干物料中加入200微升蒸馏水。重新盖上盖子。让瓶子在冰上放置5分钟，然后轻轻摇晃或偶尔涡旋直到完全溶解。按患者血清样本的方式稀释重组对照品。重组对照品如果保持在2-8°C或冰上，可在使用前储存长达4小时。它可以在-70°C下冷冻并解冻一次。

血清：

通过在37°C水浴中短暂放置并轻轻混合，部分解冻冷冻血清。部分解冻后，立即将管子放入冰浴中，并在冰上放置直到完全解冻。在涡旋混合器上短暂混合。

血清稀释：

用AP稀释液（红色标签）按1/18的比例稀释血清（340微升稀释液+20微升血清）。稀释后的血清在分析前可以放置在室温下最多60分钟。

样品孵育：

根据图示，每个途径按重复孔加入100微升的空白（Dil AP）、阳性对照（PC）、阴性对照（NC）和稀释的患者血清（P）。在+37ºC下孵育60-70分钟。

预期结果：

体外补体序列的激活导致补体成分的消耗，这反过来导致它们浓度的降低。因此，补体蛋白或补体活性的测定用于指示补体系统是否已被免疫和/或病理机制激活。当怀疑补体激活性疾病或可能存在遗传性缺陷时，使用功能性和免疫化学补体测量来评估患者。通过功能性测定（如Wieslab 补体试剂盒）评估的补体活性水平考虑了成分的合成、降解和消耗速率，并提供了途径完整性的度量，与免疫化学方法相对，后者专门测量各种补体成分的浓度。当发现补体成分或补体功能水平降低时，临床医生会考虑缺陷或正在进行的免疫过程，导致成分分解增加和补体水平降低。补体水平的增加通常是急性期反应的非特异性表现。

Wieslab 补体系统AP可以帮助检测与替代途径相关的补体缺陷，如下表所示：使用Wieslab 补体系统筛选，可以更完整和深入地功能性评估所有三个补体途径。

WIESLAB补体系统替代途径文献参考：

Walport M, Complement (First of two parts) N Engl J Med 2001, 344, 1058-1066.

Walport M, Complement (Second of two parts) N Engl J Med 2001, 344, 1140-1144.

Roos A, Bouwman L, Munoz J et al., Functional characterization of the lectin pathway of

complement in human serum. Mol Immunol 2003, 39, 655-668.

Nordin Frediksson G, Truedsson L, Sjöholm A. New procedure for detection of complement

deficiency by ELISA. J Imm Meth 1993, 166, 263-270.

M.A. Seelen et al, Functional analysis of the classical, alternative and MBL pathways of the

complement system: standardization and validation of a simple ELISA. J Imm Meth 2005,

296,187-198

https://www.amyjet.com/products/COMPLAP330.shtml

WIESLAB补体系统经典途径：精准检测免疫功能状态

研究目的：

Wieslab 补体系统经典途径是一种酶免疫测定法，用于定性或半定量测定人血清中功能性经典补体途径，其结果不得用于临床诊断或患者管理。

概述和解释

补体系统在慢性、自身免疫和感染性疾病中发挥着重要作用。补体激活有三个途径（图1），即经典途径、替代途径和凝集素途径。

补体活性受损会导致人类易患重复性暴发性或严重感染，并可能促进自身免疫疾病的发展。补体的不适当激活会导致慢性炎症和组织损伤。

体外补体序列的激活导致补体成分的消耗，这反过来导致它们浓度的降低。因此，补体蛋白或补体活性的测定用于指示补体系统是否已被免疫和/或病理机制激活。当怀疑补体激活性疾病或可能存在遗传性缺陷时，功能性和免疫化学补体测量都用于评估个体。通过功能性测定（如Wieslab®补体试剂盒）评估的补体活性水平考虑了成分的合成、降解和消耗速率，并提供了途径完整性的度量，与免疫化学方法相对，后者专门测量各种补体成分的浓度。

艾美捷WIESLAB补体系统经典途径（WIESLAB Complement System Classical Pathway）（#COMPLCP310）的测定原理：

Wieslab 补体经典途径测定结合了补体激活的溶血测定原理和使用特定于补体激活产生的新抗原的标记抗体。产生的新抗原量与补体途径的功能活性成正比。

在补体CP试剂盒中，微孔板条的孔被经典途径的特定激活剂包被。这与样本稀释缓冲液组成和血清稀释水平相结合，确保只有经典途径被激活。

在孔中孵育稀释的血清期间，补体通过特定包被被激活。然后洗涤孔，并使用特定的碱性磷酸酶标记抗体检测在MAC（膜攻击复合物）形成期间形成的C5b-9新抗原上的C5b-9复合物。

在进一步洗涤步骤后，通过与碱性磷酸酶底物溶液孵育获得特定抗体的检测。补体激活量与颜色强度相关，并以吸光度（光密度（OD））来衡量。

样本收集：

血液样本应使用无菌静脉穿刺技术收集，并使用标准程序获得血清。建议至少收集5毫升全血。让血液在血清管中凝固60-65分钟，室温（20-25°C）。离心血液样本，并将无细胞血清转移到干净的管中。血清必须正确处理以防止体外补体激活。血清应密封在紧紧封闭的管中冷冻在-70°C或更低的温度下，以便于长期储存或在干冰上运输。样本不应多次冷冻和解冻。

不要使用黄疸、乳糜和溶血的血清。不能使用热灭活血清。

不能使用血浆。CLSI提供了储存血液样本的建议（血液样本处理和处理程序的批准标准-程序，H18A，1990年）。

试剂盒组件和试剂储存：

一个框架，带有无色分离孔（12x8），涂有人类IgM，密封在带有干燥剂的铝箔包装中。

2 x 35毫升CP稀释液（Dil CP），标为蓝色。

13毫升含有碱性磷酸酶标记的C5b-9抗体的结合物（蓝色）。

13毫升即用型底物溶液。

30毫升30倍浓缩的洗涤溶液。

0.2毫升阴性对照（NC），含有人血清（应按个体血清样本稀释）。

冻干阳性对照（PC），含有冻干人血清，需在0.2毫升蒸馏水中重组，见下文“阳性对照的重组”。

冻干活性对照（AC），用于半定量应用，含有冻干人血清（与PC来源不同），见“半定量应用程序下的活性对照重组”。

阳性对照和活性对照应到达后储存在-20°C。

请注意：AC的重组体积在分析证书（CoA）（XXX微升）和AC标签上标明。

试剂盒中的所有试剂都已准备好使用，除了洗涤溶液和对照品。试剂应储存在2-8°C，除了阳性对照和活性对照。重组的阳性对照和活性对照应储存在-70°C，并且只能解冻一次。

所需但未提供的物料或设备：

带有405纳米滤光片的微孔板读取器。

带有一次性吸头的精密移液器。

用于条带的清洗器、吸水纸、管子和一个计时器。

程序 定性应用：

仅取出所需数量的孔，小心重新密封铝箔包装。在分析前让所有溶液平衡至室温（20-25°C）。不要在不同批次的试剂之间混合。

洗涤溶液的准备

如果浓缩洗涤溶液瓶中观察到盐晶体，将瓶子置于37°C水浴中直到晶体溶解，然后再稀释洗涤溶液。

将30毫升30倍浓缩洗涤溶液稀释在870毫升蒸馏水中。当储存在2-8°C时，稀释后的洗涤溶液稳定直到试剂盒的有效期。

预期结果：

当发现补体成分或补体功能水平降低时，临床医生会考虑缺陷或正在进行的免疫过程，导致成分分解增加和补体水平降低。

对于定性测定，正常分布已确定为阳性对照的69-129%，见表1。在此范围内的结果表明经典途径的功能正常。建议每个实验室确认或建立自己服务人群的参考范围。

低于69-129%范围的值表明要么由于经典补体途径容量的消耗导致增加的激活，要么基因决定的低活性。

低于5%的值强烈表明由于过度激活或经典途径的遗传性缺陷导致的完全缺乏。为了确定导致活性降低的补体因子，需要进一步分析补体蛋白。

阴性结果，即怀疑缺乏，应始终通过测试新的、仔细处理的样本来验证，以确保没有发生体外补体激活。

补体水平的增加通常是急性期反应的非特异性表现。

Wieslab 补体系统经典途径可以帮助检测与经典途径相关的补体缺陷，如下表所示：使用Wieslab 补体系统筛选，可以更完整和深入地功能性评估所有三个补体途径。

WIESLAB补体系统经典途径文献参考：

Walport M. Complement (First of two parts). N Engl J Med 2001; 344:1058-66.

Walport M. Complement (Second of two parts). N Engl J Med 2001; 344:1140-44.

Roos A et al. Functional characterization of the lectin pathway of complement in human serum.

Mol Immunol 2003; 39:655-68.

Fredriksson GN et al. New procedure for detection of complement deficiency by

ELISA. Analysis of activation pathways and circumvention of rheumatoid factor influence.

J Immunol Meth 1993; 166:263-70.

Seelen MA et al. Functional analysis of the classical, alternative and MBL pathways of the

complement system: standardization and validation of a simple ELISA. J Immunol Meth 2005;

296:187-98.

Salvador-Morales C, Sim RB. Handbook of Immunological Properties of Engineered

Nanomaterials. 2013, 1st Ed, World Scientific Publishing (ISBN: 978-4390-25-5).

Tudoran R & Kirschfink M. Modern Complement analysis: indications, methods and outlook.

LaboratoriumsMedizin 2012; 36(3):--.

Botto M et al. Complement in human disease: Lessons from complement deficiencies. Mol

Immunol 2009; 46:2774-83.

Mollnes TE et al. Complement analysis in the 21st century. Mol Immunol 2007; 44:3838-49.

Nilsson B, Nilsson Ekdahl K. Complement Diagnostics: Concepts, Indications, and Practical

Guidelines. Clin Develop Immunol; 2012, Art ID 962702

https://www.amyjet.com/products/COMPLCP310.shtml

补体凝集素/MBL途径检测试剂盒：助力科研的补体系统功能测定

研究目的：

Wieslab 补体系统MBL途径试剂盒是一种酶免疫测定法，用于定性测定人血清中MBL补体途径，其结果不得用于临床诊断或患者管理。

概述和解释

补体系统在慢性、自身免疫和感染性疾病中发挥着重要作用。补体激活有三个途径（图1），即经典途径、替代途径和凝集素途径。

补体活性受损会导致人类易患重复性暴发性或严重感染，并可能促进自身免疫疾病的发展。补体的不适当激活会导致慢性炎症和组织损伤。

体外补体序列的激活导致补体成分的消耗，这反过来导致它们浓度的降低。因此，补体蛋白或补体活性的测定用于指示补体系统是否已被免疫和/或病理机制激活。当怀疑补体激活性疾病或可能存在遗传性缺陷时，功能性和免疫化学补体测量都用于评估个体。通过功能性测定（如Wieslab®补体试剂盒）评估的补体活性水平考虑了成分的合成、降解和消耗速率，并提供了途径完整性的度量，与免疫化学方法相对，后者专门测量各种补体成分的浓度。

艾美捷补体凝集素/MBL途径检测试剂盒（WIESLAB Complement System MBL Pathway）（#COMPLMP320）的测定原理：

Wieslab 补体测定结合了补体激活的溶血测定原理和使用特定于补体激活产生的新抗原的标记抗体。产生的新抗原量与补体途径的功能活性成正比。

在补体系统MP试剂盒中，微孔板条的孔被MBL途径的特定激活剂包被。受试者血清在含有特定阻断剂的稀释液中稀释，以确保只有MBL途径被激活。在孔中孵育稀释的受试者血清期间，补体通过特定包被被激活。

然后洗涤孔，并使用特定的碱性磷酸酶标记抗体检测在MAC（膜攻击复合物）形成期间表达的新抗原上的C5b-9。

在进一步洗涤步骤后，通过与碱性磷酸酶底物溶液孵育获得特定抗体的检测。补体激活量与颜色强度相关，并以吸光度（光密度（OD））来衡量。

警告和注意事项：

仅供研究使用。不用于诊断程序。

试剂盒中用于制备对照品的人血清成分已经过FDA批准的方法检测人类免疫缺陷病毒1型和2型（HIV 1&2）、丙型肝炎（HCV）以及乙型肝炎表面抗原，结果均为阴性。因为没有测试方法可以完全保证HIV、HCV、乙型肝炎病毒或其他传染性因子的缺失，所以样本和基于人类的试剂应被视为可能传播传染性因子进行处理。

疾病控制和预防中心以及国家卫生研究院建议在生物安全等级2下处理潜在的传染性因子。

样本收集：

血液样本应使用无菌静脉穿刺技术收集，并使用标准程序获得血清。建议至少收集5毫升全血。让血液在血清管中在室温（20-25°C）下凝固60-65分钟。离心血液样本，并将无细胞血清转移到干净的管中。血清必须正确处理以防止体外补体激活。

血清应密封在紧紧封闭的管中冷冻在-70°C或更低的温度下，以便于长期储存或在干冰上运输。样本不应多次冷冻和解冻。

避免使用黄疸、乳糜和溶血的血清。

不能使用热灭活血清。不能使用血浆。

NCCLS提供了储存血液样本的建议（血液样本处理和处理程序的批准标准，H18A，1990年）。

试剂盒组件和试剂储存

一个框架，带有无色分离孔（12x8），密封在带有干燥剂的铝箔包装中。孔已用甘露糖包被。

35毫升MP稀释液（Dil MP），标为绿色。

13毫升含有碱性磷酸酶标记的C5b-9抗体的结合物（蓝色）。

13毫升即用型底物溶液。

30毫升30倍浓缩的洗涤溶液。

0.2毫升阴性对照（NC），含有人血清（应按受试者血清样本稀释）。

0.2毫升阳性对照（PC），含有冻干人血清，见下文“阳性对照的重组”。

试剂盒中的所有试剂都已准备好使用，除了洗涤溶液和对照品。试剂应储存在2-8°C，除了阳性对照。

阳性对照应储存在-20°C。

所需但未提供的物料或设备：

带有405纳米滤光片的微孔板读取器。

带有一次性吸头的精密移液器。

用于条带的清洗器、吸水纸、管子和一个计时器。

结果计算：

从NC、PC和样本中减去空白（稀释液）的吸光度。阳性对照的吸光度应大于1，阴性对照的吸光度应小于0.2。

阴性和阳性对照可以以半定量的方式用来计算补体活性。

计算样本、PC和NC的平均OD405nm值，并按以下方式计算%补体活性：(样本-NC)/(PC-NC)x100。阴性和阳性对照旨在监测试剂的显著失败。阳性对照不能确保在测定截止值处的精确度。建议每个实验室建立自己的参考水平和缺陷的截止值。

阴性结果，即缺陷，应始终通过测试新样本来验证，以确保没有发生体外补体激活。

受试者结果：

体外补体序列的激活导致补体成分的消耗，这反过来导致它们浓度的降低。因此，补体蛋白或补体活性的测定用于指示补体系统是否已被免疫和/或病理机制激活。当怀疑补体激活性疾病或可能存在遗传性缺陷时，功能性和免疫化学补体测量都用于评估患者。通过功能性测定（如Wieslab 补体试剂盒）评估的补体活性水平考虑了成分的合成、降解和消耗速率，并提供了途径完整性的度量，与免疫化学方法相对，后者专门测量各种补体成分的浓度。当发现补体成分或补体功能水平降低时，临床医生会考虑缺陷或正在进行的免疫过程，导致成分分解增加和补体水平降低。补体水平的增加通常是急性期反应的非特异性表现。

Wieslab 补体系统MBL途径可以帮助检测与MBL途径相关的补体缺陷，如下表所示：使用Wieslab 补体系统筛选，可以更完整和深入地功能性评估所有三个补体途径。

补体凝集素/MBL途径检测试剂盒文献参考：

Walport M, Complement (First of two parts) N Engl J Med 2001, 344, 1058-1066.

Walport M, Complement (Second of two parts) N Engl J Med 2001, 344, 1140-1144.

Roos A, Bouwman L, Munoz J et al. , Functional characterization of the lectin pathway of complement in

human serum. Mol Immunol 2003, 39, 655-668.

Nordin Frediksson G, Truedsson L, Sjöholm A. New procedure for detection of complement deficiency

by ELISA. J Imm Meth 1993, 166, 263-270.

M.A. Seelen et al, Functional analysis of the classical, alternative and MBL pathways of the complement

system: standardization and validation of a simple ELISA. J Imm Meth 2005, 296, 187-198.

https://www.amyjet.com/products/COMPLMP320.shtml

Svar Life Science补体途径活性分析：补体系统筛选试剂盒

研究目的：

Wieslab 补体系统筛选试剂盒是一种酶免疫测定法，用于定性测定人血清中功能性经典、MBL和替代补体途径，其结果不得用于临床诊断或患者管理。

补体活性受损会导致人类易患重复性暴发性或严重感染，并可能促进自身免疫疾病的发展。补体的不适当激活会导致慢性炎症和组织损伤。

艾美捷补体系统筛选试剂盒（WIESLAB Complement System Screen）（#COMPL300）的测定原理：

Wieslab 补体测定结合了补体激活的溶血测定原理和使用特定于补体激活产生的新抗原的标记抗体。产生的新抗原量与补体途径的功能活性成正比。

微孔板条的孔被经典途径、MBL途径或替代途径的特定激活剂包被。受试者血清在含有特定阻断剂的稀释液中稀释，以确保只有相应的途径被激活。在孔中孵育稀释的受试者血清期间，补体通过特定包被被激活。

然后洗涤孔，并使用特定的碱性磷酸酶标记抗体检测在MAC（膜攻击复合物）形成期间表达的新抗原上的C5b-9。

在进一步洗涤步骤后，通过与碱性磷酸酶底物溶液孵育获得特定抗体的检测。补体激活量与颜色强度相关，并以吸光度（光密度（OD））来衡量。

试剂盒组件和试剂储存：

一个框架，带有分离孔（4x8x3），密封在带有干燥剂的铝箔包装中。4条蓝色经典途径（CP）条带，涂有人类IgM。4条绿色MBL途径（MP）条带，涂有甘露糖。4条无色替代途径（AP）条带，涂有LPS。

10毫升CP稀释液（Dil CP），标为蓝色。

10毫升MP稀释液（Dil MP），标为绿色。

10毫升AP稀释液（Dil AP），标为红色。

13毫升含有碱性磷酸酶标记的C5b-9抗体的结合物（蓝色）。

13毫升即用型底物溶液。

30毫升30倍浓缩的洗涤溶液。

0.2毫升阴性对照（NC），含有人血清（应按受试者血清样本稀释）。

0.2毫升阳性对照（PC），含有冻干人血清，见下文“阳性对照的重组”。

试剂盒中的所有试剂都已准备好使用，除了洗涤溶液和对照品。试剂应储存在2-8°C，除了阳性对照。阳性对照应储存在-20°C。

所需但未提供的物料或设备：

带有405纳米滤光片的微孔板读取器。

带有一次性吸头的精密移液器。

用于条带的清洗器、吸水纸、管子和一个计时器。

结果计算：

从NC、PC和样本中减去空白（稀释液）（每个途径）的吸光度。

阳性对照的吸光度应大于1，阴性对照的吸光度应小于0.2。

阴性和阳性对照可以以半定量的方式用来计算补体活性。计算样本、PC和NC的平均OD405nm值，并按以下方式计算%补体活性：(样本-NC)/(PC-NC)x100。阴性和阳性对照旨在监测试剂的显著失败。阳性对照不能确保在测定截止值处的精确度。建议每个实验室建立自己的参考水平和缺陷的截止值。

阴性结果，即缺陷，应始终通过测试新样本来验证，以确保没有发生体外补体激活。

受试者结果：

体外补体序列的激活导致补体成分的消耗，这反过来导致它们浓度的降低。因此，补体蛋白或补体活性的测定用于指示补体系统是否已被免疫和/或病理机制激活。当怀疑补体激活性疾病或可能存在遗传性缺陷时，功能性和免疫化学补体测量都用于评估患者。通过功能性测定（如Wieslab 补体试剂盒）评估的补体活性水平考虑了成分的合成、降解和消耗速率，并提供了途径完整性的度量，与免疫化学方法相对，后者专门测量各种补体成分的浓度。当发现补体成分或补体功能水平降低时，临床医生会考虑缺陷或正在进行的免疫过程，导致成分分解增加和补体水平降低。补体水平的增加通常是急性期反应的非特异性表现。

三种Wieslab 补体测定的组合可以帮助检测补体缺陷，如下表所示：

补体系统筛选试剂盒文献参考：

Walport M, Complement (First of two parts) N Engl J Med 2001, 344, 1058-1066.

Walport M, Complement (Second of two parts) N Engl J Med 2001, 344, 1140-1144.

Roos A, Bouwman L, Munoz J et al. , Functional characterization of the lectin pathway of complement

in human serum. Mol Immunol 2003, 39, 655-668.

Nordin Frediksson G, Truedsson L, Sjöholm A. New procedure for detection of complement deficiency

by ELISA. J Imm Meth 1993, 166, 263-270.

https://www.amyjet.com/products/COMPL300.shtml

EpiNext CUT&LUNCH RIP试剂盒，更快速、更高效的替代ChIP和CUT&RUN

背景信息：

体内富集与蛋白质复合的RNA，然后进行qPCR和/或下一代测序，为研究表观转录组范围内的蛋白质-RNA相互作用提供了一个有利的工具。长期以来用于实现这一目标的主要方法是传统的RIP（RNA免疫沉淀）后跟PCR（RIP-PCR）或测序（RIP-Seq）。这些方法已被广泛使用，但无法实现高分辨率，需要交联，并且存在重复性差和过程复杂的问题。特别是，这些方法耗时（从8小时到2天）且成本高昂。

CUT&LUNCH（目标下裂解和均匀释放独特核酸复合物）是EpigenTek最近开发的一项技术，旨在为研究体内DNA-蛋白质相互作用提供一种比ChIP和CUT&RUN更快速、更高效的替代方法。这一创新技术现已被整合到新的CUT&LUNCH RIP试剂盒（货号：P-2037-24）中，用于超快速、高度特异地富集目标蛋白-RNA复合物。

RNA免疫沉淀（RIP）被广泛用于分析蛋白质和RNA之间的相互作用，但无法实现高分辨率，再现性差，过程漫长复杂。使用EpiNext CUT&LUNCH RNA免疫沉淀（RIP）试剂盒，您可以比以往更快地对靶蛋白/RNA复合物进行高度特异性富集。

CUT&LUNCH RIP整合了当前RIP检测和CUT&RUN的所有优势，是富集RNA结合蛋白特异性RNA复合物最快且最便捷的方法。

1、快速协议：在不到2小时内完成您的检测。

2、低背景：选择性消除非特异性蛋白-RNA复合物。

3、高特异性和分辨率：仅回收抗体结合的复合物。

4、性价比高：每反应的价格不到竞争对手RIP产品的一半。

不要因为漫长的协议而耽误时间。用CUT&LUNCH RIP简化您的研究，夺回您的时间——没有减速，只有流程化的成功。

艾美捷EpiNext CUT&LUNCH RIP试剂盒具有以下优势和特点：

1、极快速的三步协议：直接从完整的细胞开始，无需裂解和交联。整个检测过程可以在1小时50分钟内完成，最小化RNA损伤和解离的RNA结合组分的丢失，保持原生蛋白质-RNA结构。

2、提高特异性和最小化背景：独特的核酸裂解酶通过在目标蛋白/RNA复合物两端切割或移除RNA序列，确保低序列偏好，不影响目标蛋白占据的RNA。释放的非特异性蛋白-RNA复合物被选择性消除，只回收抗体结合的复合物。因此，可以通过高分辨率映射可靠地实现和识别目标蛋白富集区域。

3、低输入材料：强大的未结合RNA裂解和免疫捕获都在同一个管中处理。这种方法使用细胞和组织，并允许最大限度地保护目标蛋白，最小化样本损失。结果，输入的细胞数量可以少至20,000个细胞，不到传统RIP所需最小量的5%。

4、广泛的适用性：适用于各种物种的培养细胞以及新鲜和冷冻组织中的不同RNA结合蛋白，同时保持检测的特异性和灵敏度。

5、高度便捷：试剂盒包含所有必需组分，使EpiNext CUT&LUNCH RNA免疫沉淀（RIP）试剂盒既方便又经济。

EpiNext CUT&LUNCH RIP试剂盒极速三步：

起始材料：

起始材料可以包括各种哺乳动物细胞样本，如培养瓶或培养板中的培养细胞、原代细胞、从血液、体液中分离的稀有细胞群体、新鲜/冷冻组织，以及从整个细胞群体中分选的特定细胞和胚胎细胞等。

原理与程序：

该试剂盒提供了所有必要的试剂，以富集RNA结合蛋白特异性RNA复合物，通过qRT-PCR或NGS从各种细胞样本中分析蛋白质-RNA相互作用。在这个检测中，细胞被渗透处理，并用针对感兴趣蛋白的RIP级抗体处理。然后，一种独特的核酸裂解酶混合物选择性地切割目标蛋白区域周围的RNA序列，移除非特异性RNA-蛋白复合物。只有抗体结合的复合物被选择性保留。捕获的蛋白/RNA复合物中的RNA片段被纯化，可以直接用于qRT-PCR或cDNA库构建，以分析蛋白质和RNA之间的相互作用。

CUT&LUNCH RIP试剂盒 Epigen Tek：

工作流程便利性：方便 总共只有20步 不需要交联或超声处理

所需细胞数量：50,000-1,000,000

富集目标范围：细胞质和核RNA-蛋白质复合物

序列分辨率：高 独特的切割酶混合物在两端切割RNA，非常接近目标蛋白相互作用位点

正/负对照比率：>200

检测时间长度：1小时50分钟

富集RNA的下游应用：qRT-PCR, RIP-chip, RIP-Seq

每次检测反应的价格：低

RIP试剂盒 供应商A：

工作流程便利性：不太方便 超过50步 需要固定和超声处理（需要用户自行优化）

所需细胞数量：15,000,000

富集目标范围：核RNA-蛋白质复合物

序列分辨率：较低 超声波基础的剪切产生不同长度的片段

正/负对照比率：>120

检测时间长度：1-2天

富集RNA的下游应用：qRT-PCR

每次检测反应的价格：高

RIP试剂盒 供应商M：

工作流程便利性：不太方便 总共40步。不需要交联或超声处理。

所需细胞数量：20,000,000

富集目标范围：细胞质和核

序列分辨率：低 RNA未被剪切

正/负对照比率：>200

检测时间长度：8小时-2天

富集RNA的下游应用：qRT-PCR, RIP-chip, RIP-Seq

每次检测反应的价格：非常高

https://www.amyjet.com/featured/P-2037-24.shtml