Biotium-稳态ATP HTS活性检测试剂盒，超过3-4个数量级的出色线性

来宝网 2024/12/6点击114次

Biotium-Steady-ATP HTS 活性测定试剂盒是一种基于ATP的高灵敏度发光细胞活性测定。由于ATP是代谢活跃细胞的指标，可以根据可用的ATP量评估活细胞的数量。这种测定使用Chemostable Luciferase和优化的裂解/测定缓冲液，在细胞ATP存在的情况下产生稳定的发光信号。Steady-ATP 提供卓越的灵敏度和宽动态范围，用于确定活细胞数量，以评估细胞增殖或化合物的细胞毒性潜力。

艾美捷Biotium-稳态ATP HTS活性检测试剂盒：

货号：30138-1 - 30138-3

凋亡/活性标记：代谢活性

对于活细胞或固定细胞：需要细胞裂解

测定类型/选项：高通量测定，均相测定，发光（持续型）

检测方法/读数：光微孔板读取器或单管发光仪

来源：在大肠杆菌中生产的重组Chemostable Luciferase

储存条件：储存在-35°C至-5°C

试剂盒组分：

Steady-ATP™底物

Steady-ATP™缓冲液

一种敏感且稳健的发光细胞活性测定

特点：

便捷的单步测定混合

优化的信号稳定性，半衰期超过5小时。

出色的线性，超过3-4个数量级。

非常适合用于高通量筛选平台。

与CellTiter-Glo 相比，性能相当，成本更低。

Steady-ATP 测定是ATP-Glo 生物发光细胞活性测定试剂盒（货号30020）的新型改进替代品。这种均相测定程序涉及将Steady-ATP 测定混合液直接添加到培养基中的细胞中，无需洗涤或更换培养基。这种测定结合了使用工程化的Chemostable Luciferase，其化学稳定性和热稳定性增强，能够在ATP存在的情况下氧化D-Luciferin，产生光。

Chemostable Luciferase与优化的缓冲液相结合，旨在保护细胞裂解后ATP不被降解，产生的发光信号半衰期超过5小时。信号在线性范围内超过3-4个数量级。延长的半衰期为使用连续或批量处理板的高通量筛选（HTS）平台提供了灵活性，无需试剂注入器。

稳健的信号半衰期 ≥5小时

图：在两种常见细胞系中进行稳定的ATP™检测。HeLa细胞在含有10%BGS的DMEM中生长和检测，而Jurkats在含有10%FBS的RPMI 1640中生长和测定。将HeLa（每孔6000个细胞）和Jurkats（每孔12000个细胞）加入96孔板中，并使其平衡至室温。在每个孔中加入等体积的Steady ATP™试剂后，将平板放置在Biotek®Synergy H1微孔板读数器中，并快速轨道振荡混合2分钟。每5分钟读取一次发光，持续5小时，每次读取前进行5秒的轨道振荡。数值代表四个重复实验的平均值±标准差。

Biotium致力于开发和生产用于生物医学研究的荧光指示剂及其他特殊生化产品。其产品被广泛应用于细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液流动检测及大规模药物筛选等众多领域。艾美捷科技是Biotium的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

https://www.amyjet.com/brand/Biotium.shtml

Biotium-Glo Plate 2.0蓝色LED照明器，高效激活v-PCR染料

Biotium-多功能蓝色LED灯箱，可用于PMAxx™或PMA在存活率PCR中的光解；或开发可见的DNA凝胶染色DNAzure。Glo-Plate™ 2.0 蓝色LED照明板是一种轻巧的多用途LED光盒，为透明微孔板、较大的试管和其他透明容器中的样品提供均匀照明。Glo-Plate™ 2.0中的LED设计用于在活性PCR（v-PCR）应用中对PMAxx™或PMA处理的样品进行最佳光解。

艾美捷Biotium-Glo Plate 2.0蓝色LED照明器：

货号：E90007

规格：

尺寸（长x宽x高）：9.88 x 7.12 x 1.22英寸（25.1 x 18.1 x 3.1厘米）

光板尺寸（长x宽）：5.7 x 5.7英寸（14.5 x 14.5厘米）

电压输入：100~240V（包含转换器）

在微孔板中均匀光活化v-PCR样品

特点：

为微孔板、试管和凝胶提供均匀照明

高效激活v-PCR染料，如PMAxx™和PMA

计时器提供5-45分钟的照明时间

适用于DNAzure Blue核酸凝胶染色剂的显影

两年保修

活性PCR与PMAxx™或PMA等染料需要在样品间进行一致且最大的光活化以产生准确结果。虽然PMA-Lite 2.0™ LED光解设备可以用于此应用，但该设备一次只能照亮多达18个微量离心管，为处理微孔板中较大样品量的研究人员留下较少的选择。Glo-Plate™ 2.0蓝色LED照明板提供由LED灯照亮的平面，顶部配有扩散器，允许在透明微孔板中对PMAxx™或PMA处理的样品进行均匀和最佳光活化。该设备也可用于15毫升或50毫升试管和其他透明容器中样品的光活化。

DNAzure的优秀光源

Glo-Plate™ 2.0蓝色LED照明板也是用于显影DNAzure Blue核酸凝胶染色剂染色的凝胶的优秀光源。DNAzure是一种新型DNA凝胶染色剂，在光暴露期间将可见蓝色染料沉淀到DNA上，产生高度敏感且稳定的可见蓝色DNA带，肉眼可见。这对于凝胶切割特别有利。

新2.0设计包括用户友好的触摸屏界面！

Glo-Plate™ 2.0蓝色LED照明板是已停产的Glo-Plate™蓝色LED照明板（货号E90004）的新型改进版本。新的2.0设计提供了与原始Glo-Plate™蓝色LED照明板相同的坚固和均匀光活化性能，同时还具有方便的触摸显示屏，允许用户轻松设置、重置和监控设备的运行时间。

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Biotium-Ulex Europaeus凝集素I（UEA I）偶联物：6种CF染料或生物素的选择

欧洲刺柏凝集素I（UEA I）能够与含有α-连接的岩藻糖残基的许多糖蛋白和糖脂结合，例如ABO血型群糖缀合物。UEA I特别与血型H型2抗原相互作用，这种抗原在O型血的个体中表达，而在A型或B型血的个体中表达较少。这种凝集素是人内皮细胞的已知标记物，已用于区分血管肉瘤和上皮性肿瘤。UEA I也是未完全分化的胃泌素细胞的标记物。该凝集素可用于组织切片的染色。

Biotium提供与生物素结合的UEA I以及6种明亮且光稳定的CF 染料选择：

人内皮细胞和未完全分化的胃泌素细胞的标记物

与含有α-连接的岩藻糖残基的糖蛋白和糖脂结合

适用于组织切片的免疫荧光染色

6种CF 染料或生物素的选择

在10 mM HEPES pH 7.5，0.15 M NaCl，0.08% 叠氮化钠，0.1 mM CaCl2中以1 mg/mL供应

注意：CF 染料UEA I结合物含有叠氮化钠，不适合体内使用或活细胞培养

艾美捷Biotium-Glo Plate 2.0蓝色LED照明器：

货号：29133 - 29113

探测细胞定位：膜/细胞表面

用于活细胞或固定细胞：适用于固定细胞，适用于活/完整细胞

细胞通透性：膜不通透

固定选项：染色前固定（甲醛），染色后固定（甲醛），染色前固定（甲醇），染色后固定（甲醇），染色后通透

颜色：绿色，红色，远红，近红外

找到合适的染色剂：

UEA I和其他凝集素是识别糖蛋白上特定糖基的碳水化合物结合蛋白。这些靶标的存在和分布因细胞类型和组织而异。因此，其他细胞表面染色剂或其他凝集素结合物，如曼陀罗凝集素（DSL），番茄凝集素（Tomato），菜豆凝集素（PHA-L），小麦胚芽凝集素（WGA）结合物，Concanavalin A（Con A）和花生凝集素（PNA）结合物，可能会产生更好的表面染色效果，可能更适合您的细胞类型。凝集素结合物可用于选择性染色活细胞的细胞表面，并能承受固定和通透处理。当细胞在染色前被固定和通透处理后，荧光凝集素会染色细胞表面和分泌途径中的细胞器。凝集素可能对活细胞有毒或刺激性，这取决于细胞类型。

图：使用CF 488A欧洲刺柏凝集素I（UEA-I）对人和大鼠脑切片进行染色。人大脑皮层或大鼠脑冷冻切片用PFA固定，用Triton X-100通透，然后要么不染色，要么用5 ug/mL的CF 488A UEA-I结合物（绿色）在PBS中染色15分钟，然后在PBS中冲洗。人脑切片用EverBrite™ TrueBlack硬质封片介质配NucSpot 640（核，品红色）封片，而大鼠脑切片用EverBrite™硬质封片介质配NucSpot 640（核，品红色）封片。UEA-I染色模式与其在人脑中脑血管的报道定位一致，但UEA-I结合物在大鼠脑中没有显示出特异性染色。比例尺：50微米。

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Biotum-菜豆白凝集素（PHA-L）偶联物，刺激淋巴细胞和T细胞增殖

菜豆（红腰豆）凝集素（植物血凝素；PHA）是一系列凝集素家族，每个由四个亚基组成。有两种不同类型的亚基。“E”（红细胞凝集素）亚基导致红细胞凝集，而“L”（淋巴细胞）亚基可以触发淋巴细胞凝集和有丝分裂活性。这些亚基结合产生五种同种凝集素。菜豆白细胞凝集素（PHA-L）有四个“L”型亚基，不会引起红细胞凝集，但是一种强大的有丝分裂原，能触发淋巴细胞凝集。该凝集素可用于组织切片的染色。Biotium提供与生物素结合的PHA-L以及6种明亮且光稳定的CF 染料选择：

用于刺激淋巴细胞和T细胞增殖

适用于组织切片的免疫荧光染色

6种CF 染料或生物素的选择

在10 mM HEPES pH 7.5，0.15 M NaCl，0.08% 叠氮化钠，0.1 mM CaCl2中以1 mg/mL供应

注意：CF 染料PHA-L结合物含有叠氮化钠，不适合体内使用或活细胞培养。

艾美捷Biotium-菜豆白凝集素（PHA-L）偶联物：

货号：29134 - 29119

探测细胞定位：膜/细胞表面

用于活细胞或固定细胞：适用于固定细胞，适用于活/完整的细胞

细胞通透性：不可穿透膜

固定选项：染色前固定（甲醛），染色后固定（甲醛），染色前固定（甲醇），染色后固定（甲醇），染色后通透

颜色：绿色，红色，远红色，近红外

找到合适的染色剂：

PHA-L和其他凝集素是识别糖蛋白上特定糖基的碳水化合物结合蛋白。这些靶标的存在和分布因细胞类型和组织而异。因此，其他细胞表面染色剂或其他凝集素结合物，如曼陀罗凝集素（DSL），番茄凝集素（Tomato），欧洲刺柏凝集素I（UEA I），小麦胚芽凝集素（WGA）结合物，Concanavalin A（Con A）和花生凝集素（PNA）结合物，可能会产生更好的表面染色效果，可能更适合您的细胞类型。凝集素结合物可用于选择性染色活细胞的细胞表面，并能承受固定和通透处理。当细胞在染色前被固定和通透处理后，荧光凝集素会染色细胞表面和分泌途径中的细胞器。凝集素可能对活细胞有毒或刺激性，这取决于细胞类型。

相关产品：

细菌活性和革兰氏染色试剂盒

活细菌革兰氏染色试剂盒

Concanavalin A（Con A）CF染料结合物

CF染料PNA凝集素（花生）

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鬼笔环肽结合物

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AAT Bioquest-Amplite比色次氯酸(次氯酸)检测试剂盒解决方案

次氯酸根阴离子（ClO-）及其质子化形式次氯酸（HClO）是生物系统中的关键活性氧（ROS）。次氯酸盐（次氯酸）的不受控制的产生会导致组织损伤和疾病，包括关节炎、肾功能衰竭和癌症。此外，次氯酸钠（NaClO）已被广泛用作漂白剂，用于我们日常生活中的表面清洁、除臭和水消毒。接触大量次氯酸钠会导致中毒，症状包括严重的呼吸问题、胃部刺激、皮肤和眼睛发红和疼痛。因此，对次氯酸盐（次氯酸）的高选择性和高灵敏度检测具有毒理学和环境重要性。Amplite®比色次氯酸盐（次氯酸）检测试剂盒提供了一种灵敏的基于吸收的检测方法，用于高特异性地测量次氯酸盐。在与次氯酸盐（次氯酸盐）发生选择性反应后，无色Oxirite™次氯酸盐传感器会产生强烈的颜色产物。颜色信号可以通过吸收微孔板阅读器在~580nm处测量。使用此比色次氯酸（次氯酸）检测试剂盒，可以检测到痕量的次氯酸盐。

艾美捷AAT Bioquest-Amplite比色次氯酸(次氯酸)检测试剂盒（#13845）方案概要：

1. 准备次氯酸工作溶液（50 µL）

2. 添加次氯酸标准品或待测样品（50 µL）

3. 在室温下孵化3-5分钟

4. 在OD为555 ± 5 nm时监测吸光度增加

重要在实验开始前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶。

仪器：吸光度微孔板读取器

吸光度：555 ± 5 nm

推荐板：透明底部

图：使用Amplite比色次氯酸/次氯酸检测试剂盒在96孔透明底板中测量次氯酸盐。孵育3-5分钟后检测到低至0.5uM的次氯酸钠（NaClO）。

样品实验方案：

表1. 在96孔透明底部微孔板中次氯酸标准品和待测样品的布局。H = 次氯酸标准品（H1 - H7，0.001%至1%），BL = 空白对照，TS = 待测样品。

BL BL TS TS

H1 H1 ... ...

H2 H2 ... ...

H3 H3

H4 H4

H5 H5

H6 H6

H7 H7

表2. 每个孔的试剂组成。

孔体积试剂

H1-H7 50 µL 系列稀释（0.001%至1%）

BL 50 µL 测定缓冲液（组分B）

TS 50 µL 待测样品

如表1和表2所示，在96孔透明底部微孔板中准备次氯酸标准品（H）、空白对照（BL）和待测样品（TS）。对于384孔板，每个孔使用25 µL试剂代替50 µL。

向次氯酸标准品、空白对照和待测样品的每个孔中添加50 µL次氯酸工作溶液，使每个孔的次氯酸测定总体积为100 µL。对于384孔板，每个孔中添加25 µL工作溶液，总体积为50 µL/孔。

在避光的条件下，室温下孵化反应3-5分钟。

使用吸光度板读取器在OD = 555 ± 5 nm时监测吸光度增加。

部分文献参考：

Concentration-dependent effect of sodium hypochlorite on stem cells of apical papilla survival and differentiation

Authors: Martin DE, De Almeida JF, Henry MA, Khaing ZZ, Schmidt CE, Teixeira FB, Diogenes A.

Journal: J Endod (2014): 51

Effect of hypochlorite oxidation on cholinesterase-inhibition assay of acetonitrile extracts from fruits and vegetables for monitoring traces of organophosphate pesticides

Authors: Kitamura K, Maruyama K, Hamano S, Kishi T, Kawakami T, Takahashi Y, Onodera S.

Journal: J Toxicol Sci (2014): 71

A simple yet effective chromogenic reagent for the rapid estimation of bromate and hypochlorite in drinking water

Authors: Zhang J, Yang X.

Journal: Analyst (2013): 434

Use of pyrogallol red and pyranine as probes to evaluate antioxidant capacities towards hypochlorite

Authors: Perez-Cruz F, Cortes C, Atala E, Bohle P, Valenzuela F, Olea-Azar C, Speisky H, Aspee A, Lissi E, Lopez-Alarcon C, Bridi R.

Journal: Molecules (2013): 1638

Effect of hypochlorite-based disinfectants on inactivation of murine norovirus and attempt to eliminate or prevent infection in mice by addition to drinking water

Authors: Takimoto K, Taharaguchi M, Sakai K, Takagi H, Tohya Y, Yamada YK.

Journal: Exp Anim (2013): 237

AAT Bioquest 致力于光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术。帮助科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学，免疫学，细胞生物学和分子生物学等领域。艾美捷科技是AAT Bioquest 的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

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AAT Bioquest-Hydroethidine二氢乙锭，活性氧物种的有效探针

氢乙啶作为测量活性氧物种的探针有效地工作。染料自由进入细胞并脱氢为乙锭化合物。该探针已被广泛用于NK细胞，并作为鉴定肿瘤中增殖和缺氧细胞的重要染料。已经使用中性粒细胞和内皮细胞以及HL60细胞和巨噬细胞进行了研究。这种探针的一个主要优点是它能够区分超氧化物和过氧化氢。荧光发射发生在600nm左右。

氢乙锭[二氢乙锭]的化学结构

艾美捷AAT Bioquest-Hydroethidine二氢乙锭：

货号 15200

单位尺寸 25 毫克

分子量 315.41

溶剂 DMSO

激发（纳米） 500

发射（纳米） 582

预期用途仅用于研究（RUO）

风险短语 R20, R21, R22

储存冷冻（< -15°C）；尽量减少光照暴露

荧光微孔板读取器

激发 520 纳米

发射 600 纳米

截止 550 纳米

推荐板实心黑色

库存溶液的准备：

除非另有说明，所有未使用的库存溶液应在制备后分成单次使用的小份，并储存在-20°C。避免反复冻融。

羟乙基啶[二氢乙基啶]库存溶液：

配制5-10 mM的DMSO库存溶液。注意：未使用的DMSO库存溶液应分装到单次使用的小瓶中，并储存在-20°C。避光保存。

工作溶液的准备：

羟乙基啶[二氢乙基啶]染料工作溶液：

在生理缓冲液（如PBS、HBSS、HEPES）中配制5-20 µM的染料工作浓度。注意：您的应用的最佳工作浓度必须通过实验确定。

样品实验方案：

将等体积（例如100 µL的细胞在生长介质中）的染料工作溶液加入到细胞中，然后在室温或37°C下孵化细胞5至60分钟。

在将细胞暴露于实验诱导因素之前，确定加载细胞的样本的基线荧光强度。

阴性对照应按以下方式评估：

检查染料和缓冲液/介质的无细胞混合物的荧光，无论是否含有诱导剂。在没有细胞外酯酶和其他氧化酶的情况下，随时间荧光的逐渐增加可能与自发水解、大气氧化和/或光诱导氧化有关。

检查未经处理（对照）的加载细胞的荧光，这些细胞一直在生长介质或缓冲液中维持。在健康细胞中，氧自由基被细胞酶和/或天然抗氧化剂清除。在染料加载恢复期之后，健康细胞应表现出在实验期间相对稳定的低水平荧光；然而，可能观察到荧光的逐渐增加（由于自氧化）或减少（由于细胞中染料的丢失或光漂白）。在没有任何刺激或诱导的情况下，健康、未经处理的细胞中荧光的突发可能表明细胞死亡的进展或其他氧化事件。

阳性对照可以用叔丁基过氧化氢（TBHP）刺激至约100 µM的最终浓度（根据细胞的敏感性和反应增减剂量）。

文献参考：

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The confounding effects of light, sonication, and Mn(III)TBAP on quantitation of superoxide using hydroethidine

Authors: Zielonka J, Vasquez-Vivar J, Kalyanaraman B.

Journal: Free Radic Biol Med (2006): 1050

Pulse radiolysis and steady-state analyses of the reaction between hydroethidine and superoxide and other oxidants

Authors: Zielonka J, Sarna T, Roberts JE, Wishart JF, Kalyanaraman B.

Journal: Arch Biochem Biophys. (2006)

Generation of superoxide anion by equine spermatozoa as detected by dihydroethidium

Authors: Burnaugh L, Sabeur K, Ball BA.

Journal: Theriogenology. (2006)

Analysis of dihydroethidium-derived oxidation products by HPLC in the assessment of superoxide production and NADPH oxidase activity in vascular systems

Authors: Fern, undefined and es DC, Wosniak J, Pescatore LA, Bertoline MA, Liberman M, Laurindo F, Santos CX.

Journal: Am J Physiol Cell Physiol. (2006)

Mechanistic similarities between oxidation of hydroethidine by Fremy's salt and superoxide: stopped-flow optical and EPR studies

Authors: Zielonka J, Zhao H, Xu Y, Kalyanaraman B.

Journal: Free Radic Biol Med (2005): 853

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AAT Bioquest-2’,7’-二氯四氟乙烷双乙酸盐样品实验方案

DCFH-DA，2'，7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯（也称为2'，5'-二氯荧光素二乙酸酯），被细胞酯酶水解成2'，7'-二氢二氯荧光素（也称为2'，7'二氯荧光素），然后主要被H2O2氧化成2'。2'，7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯可能对细胞内氧化应激期间可能增加的广泛氧化反应有反应性。该探针广泛用于监测细胞氧化还原过程。

艾美捷AAT Bioquest-2’,7’-二氯四氟乙烷双乙酸盐：

货号 15204

单位尺寸 25 毫克

分子量 487.29

溶剂 DMSO

激发（纳米）505

发射（纳米） 526

预期用途仅用于研究（RUO）

储存冷冻（< -15°C）；尽量减少光照暴露

激发 FITC滤光片组

发射 FITC滤光片组

推荐板黑色壁，透明底部

仪器规格 FITC滤光片组

库存溶液的准备：

除非另有说明，所有未使用的库存溶液应在制备后分成单次使用的小份，并储存在-20°C。避免反复冻融。

2',7'-二氯二氢荧光素二醋酸酯库存溶液：

在DMSO中配制1-10 mM的工作溶液。注意：未使用的DMSO库存溶液应分装到单次使用的小瓶中，并储存在-20°C。避光保存。

工作溶液的准备：

2',7'-二氯二氢荧光素二醋酸酯工作溶液：

在生理缓冲液如PBS、HBSS、HEPES缓冲液中配制1-10 µM的工作溶液。注意：您的应用的最佳工作浓度必须通过实验确定。

样品实验方案：

以下程序提供一般指导，并应根据您的特定应用进行修改。

从生长介质中取出细胞，将染料工作溶液加入细胞中，并在室温或37°C下孵化细胞5至60分钟。

去除染料工作溶液；用预热的HBSS冲洗，并加入预热的HBSS或生长介质，并在最佳温度下孵化。最佳恢复时间可能有很大差异，因为一些细胞类型通常表现出低水平的酯酶活性。

在将细胞暴露于实验诱导因素之前，确定加载细胞的样本的基线荧光强度。6. 阴性对照应按以下方式评估：

检查未染色细胞在绿色通道的自发荧光。

对于流式细胞术，确保细胞在染料加载和处理后前向和侧向散射不变。细胞尺寸的变化可能与处理或毒性反应导致的起泡或收缩有关。

检查有无诱导剂的染料和缓冲液/介质的无细胞混合物的荧光。在没有细胞外酯酶和其他氧化酶的情况下，随时间荧光的逐渐增加可能与自发水解、大气氧化和/或光诱导氧化有关。

检查未经处理（对照）的加载细胞的荧光，这些细胞一直在生长介质或简单缓冲液中维持。在健康细胞中，氧自由基被细胞酶和/或天然抗氧化剂清除。在染料加载恢复期之后，健康细胞应表现出在实验期间相对稳定的低水平荧光；然而，可能观察到荧光的逐渐增加（由于自氧化）或减少（由于细胞中染料的丢失或光漂白）。在没有任何刺激或诱导的情况下，健康、未经处理的细胞中荧光的突发可能表明细胞死亡的进展或其他氧化事件。

阳性对照可以用H2O2或叔丁基过氧化氢（TBHP）刺激至约100 µM的最终浓度（根据细胞的敏感性和反应增减剂量）。

文献参考：

Mitochondrial localization of reactive oxygen species by dihydrofluorescein probes

Authors: Diaz G, Liu S, Isola R, Diana A, Falchi AM.

Journal: Histochem Cell Biol (2003): 319

Kinetic analysis of fluorescein and dihydrofluorescein effluxes in tumour cells expressing the multidrug resistance protein, MRP1

Authors: Saengkhae C, Loetchutinat C, Garnier-Suillerot A.

Journal: Biochem Pharmacol (2003): 969

Dihydrofluorescein diacetate is superior for detecting intracellular oxidants: comparison with 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, 5(and 6)-carboxy-2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, and dihydrorhodamine 123

Authors: Hempel SL, Buettner GR, O'Malley YQ, Wessels DA, Flaherty DM.

Journal: Free Radic Biol Med (1999): 146

A rapid diagnostic test for the viability of early cattle and rabbit embryos using diacetyl-fluorescin

Authors: Schilling E, Dopke HH.

Journal: Naturwissenschaften (1978): 658

Determination of fluorescin sodium in ophthalmic solutions

Authors: Robertson EJ, Patel JA.

Journal: Am J Hosp Pharm (1968): 598

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AAT Bioquest-荧光法NADP/NADPH比率检测试剂盒,红色荧光解决方案

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）是细胞中发现的两种重要辅因子。NADH是NAD+的还原形式，NAD+是NADH的氧化形式。它通过酯键在腺苷酸的2'位添加磷酸基团形成NADP。NADP用于合成代谢生物反应，如脂肪酸和核酸合成，这些反应需要NADPH作为还原剂。传统的NAD/NADH和NADP/NADPH测定是通过监测340 nm处的NADH或NADPH吸收来完成的。这种方法灵敏度低，干扰大，因为该测定是在紫外范围内进行的，需要昂贵的石英微孔板。AAT Bioquest的Amplite®NADP/NADPH比值检测试剂盒为灵敏检测NADP、NADPH及其比值提供了一种方便的方法。系统中的酶在酶循环反应中特异性识别NAD/NADH。无需从样品混合物中纯化NADP/NADPH。酶循环反应显著提高了检测灵敏度。此外，该测定的背景非常低，因为它在红色可见光范围内运行，大大减少了生物样本的干扰。该检测方法具有高灵敏度和低干扰性。Amplite荧光NADP/NADPH检测试剂盒可采用方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，易于自动化，无需分离步骤。

图：Syn、Syn/PFP、沼泽红蜘蛛和沼泽红蜘蛛/PFP的NADPH/NADP+和ATP含量。使用Amplite荧光分析试剂盒15264发现NADP+/NADPH比值。来源：温宇等，《科学进展》第9卷（11）：eadf6772。2023年3月。

艾美捷AAT Bioquest-荧光法NADP/NADPH比率检测试剂盒,红色荧光：

货号 15264

单位尺寸 250次测试

预期用途仅用于研究（RUO）

风险短语 R20, R21, R22

UNSPSC 12352200

吸光度 576 ± 5 nm

推荐板透明底部

激发 540 nm

发射 590 nm

截止 570 nm

推荐板实心黑色

组分A：NADP/NADPH循环酶混合物

2瓶（冻干粉）

组分B：NADPH传感器缓冲液

1瓶（20 mL）

组分C：NADPH标准品

1瓶（167 µg）

组分D：NADPH提取溶液

1瓶（10 mL）

组分E：NADP提取溶液

1瓶（10 mL）

组分F：NADP/NADPH对照溶液

1瓶（10 mL）

组分G：NADP/NADPH裂解缓冲液

1瓶（10 mL）

方案概要：

准备25 µL的NADPH标准品和/或待测样品

加入25 µL的NADPH或NADP提取溶液

在37°C下孵化15分钟

加入25 µL的NADP或NADPH提取溶液

加入75 µL的NADP/NADPH工作溶液

在37°C下孵化15分钟至2小时

在激发/发射=540/590 nm（截止=570 nm）监测荧光强度

重要说明：

强烈建议与裂解缓冲液（组分G）一起在37°C下孵化细胞，并使用上清液进行实验。

在实验开始前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个。

库存溶液的准备：

除非另有说明，所有未使用的库存溶液应在制备后分成单次使用的小份，并储存在-20°C。避免反复冻融。

NADPH标准溶液（1 mM）

将200 µL的PBS缓冲液加入NADPH标准品（组分C）的小瓶中，制成1 mM（1 nmol/µL）的NADPH标准溶液。

工作溶液的准备

将10 mL的NADPH传感器缓冲液（组分B）加入NADP/NADPH循环酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合，制成NADP/NADPH工作溶液。

注意这种NADP/NADPH工作溶液足够在96孔板中进行125次测定。

文献参考：

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