Bi-CAT(肾上腺素和去甲肾上腺素)ELISA预期用途和原理及测试程序说明

来宝网 2024/9/25点击173次

在人类中，儿茶酚胺类物质如肾上腺素（epinephrine）、去甲肾上腺素（norepinephrine）和多巴胺是交感神经系统的神经递质，参与许多生理过程。交感神经系统使身体处于高度警戒状态，也被称为身体的战斗或逃跑反应。此外，儿茶酚胺及其代谢产物表明了身体对急性和慢性压力的适应。

艾美捷Bi-CAT(肾上腺素和去甲肾上腺素)ELISA（ALP-17-BCTHU-E02.1）内容：

1.密封箔-即用型

内容：密封箔，包装在可重新密封的袋中

体积：2x4箔

2.洗涤缓冲液浓缩液-浓缩50倍

内容：含有非离子洗涤剂和生理pH值的缓冲液

体积：2x20mL/瓶，紫色瓶盖

3.酶结合物-即用型

内容：山羊抗兔免疫球蛋白，与过氧化物酶结合

体积：2x12mL/瓶，红色瓶盖

4.底物-即用型

内容：含有3,3',5,5'-四甲基联苯胺的显色底物，底物缓冲液和过氧化氢

体积：2x12mL/瓶，黑色瓶盖

5.终止液-即用型

内容：0.25M硫酸

体积：2x12mL/瓶，灰色瓶盖

6.肾上腺素微孔板条-即用型

内容：1x96孔（12x8）预涂抗原微孔板，包装在可重新密封的蓝色袋中，含干燥剂

7.去甲肾上腺素微孔板条-即用型

内容：1x96孔（12x8）预涂抗原微孔板，包装在可重新密封的黄色袋中，含干燥剂

8.肾上腺素抗血清-即用型

内容：含有蛋白质（牛）和非汞防腐剂的兔抗肾上腺素抗体，蓝色

体积：1x6mL/瓶，蓝色瓶盖

9.去甲肾上腺素抗血清-即用型

内容：含有蛋白质（牛）和非汞防腐剂的兔抗去甲肾上腺素抗体，黄色

体积：1x6mL/瓶，黄色瓶盖

10.调整缓冲液-即用型

内容：TRIS缓冲液

体积：1x4mL/瓶，绿色瓶盖

Bi-CAT(肾上腺素和去甲肾上腺素)ELISA预期用途和原理：

Bi-CAT酶免疫测定用于人血浆和尿液中肾上腺素（epinephrine）和去甲肾上腺素（norepinephrine）的定量测定。仅限研究使用，不用于诊断程序。

肾上腺素（epinephrine）和去甲肾上腺素（norepinephrine）通过使用顺式二醇特异性亲和凝胶进行提取，然后进行酰化，并随后进行酶促转化。竞争ELISA试剂盒使用微孔板格式。抗原绑定到微孔板的固相上。酰化的标准品、对照品和样品与固相结合的分析物竞争有限的抗体结合位点。系统达到平衡后，通过洗涤去除游离抗原和游离抗原-抗体复合物。使用TMB作为底物，通过抗兔IgG-过氧化物酶结合物检测固相上结合的抗体，产生颜色反应。在450nm处监测反应。通过将未知样品的吸光度与已知标准浓度的标准曲线进行比较，实现未知样品的定量。建议手动处理ELISA。自动化实验室设备的验证是用户的责任。

样品收集和储存：

血浆

应该将全血收集到含有EDTA作为抗凝剂的离心管中，并在收集后立即按照制造商的说明进行离心。

如果出现溶血、黄疸或脂血的样品，参见2.2.1节。

储存：在2-8°C下最长储存6小时，较长时间（最长6个月）在-20°C下储存。

应避免反复冻融。

尿液

可以使用自发尿液或24小时尿液，收集在含有10-15毫升6M盐酸的瓶中。

如果使用24小时尿液，请记录收集的尿液总量。

储存：在2-8°C下最长储存48小时，在室温下最长储存24小时，较长时间（最长6个月）在-20°C下储存。

应避免反复冻融。

避免直接暴露在阳光下。

测试程序：

使用前让所有试剂和样品达到室温，并轻轻倒置充分混合。

标记提取板和微孔板（从框架中取出使用的微孔条应相应标记，以避免混淆）。

建议进行双重测定。

建议在微孔板使用前对微孔条进行编号，以避免混淆。

抗血清的结合、酶结合物的结合以及酶的活性都与温度有关。

温度越高，吸光度值越高。

不同的孵育时间对吸光度也有类似的影响。

酶免疫测定过程中的最佳温度在20-25°C之间。

注意：使用振幅约为3毫米、大约600转/分钟的微孔板振荡器是强制性的。

不同设置的振荡可能会影响结果。

注意：如果出现溢出，在使用设置为405纳米的微孔板读取器读取孔中溶液的吸光度，需在10分钟内完成。

典型标准曲线示例，请勿用于计算！

Bi-CAT(肾上腺素和去甲肾上腺素)ELISA文献参考：

(1) Kim et al. Vitamin C prevents stress-induced damage on the heart caused by the death of

cardiomyocytes, through the down-regulation of the excessive production of

catecholamine, TNF-α, and ROS production in GULO(-I-) Vit C-Insufficient mice. Free

Radical Biology and Medicine, 65:573-583 (2013)

(2) Bada et al. Peripheral vasodilatation determines cardiac output in exercising humans: insight

from atrial pacing. The Journal of Physiology, 590(8):2051-2060 (2012)

(3) Parks et al. Employment and work schedule are related to telomere length in women.

Occupational & Environmental Medicine 68(8):582-589 (2011)

https://www.amyjet.com/products/ALP-17-BCTHU-E02.1.shtml

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皮质酮(小鼠/大鼠)ELISA使用说明&文献参考

皮质酮是由肾上腺皮质在垂体激素ACTH的控制下通过负反馈机制分泌的。由于缺乏酶C17-羟化酶，它在大鼠中是循环中最多的类固醇，因为啮齿动物无法合成人类主要的糖皮质激素——皮质醇。

皮质酮在啮齿动物中具有广泛的活性。它调节碳水化合物、蛋白质和脂肪的代谢。它还对造血系统有影响，并且会减少淋巴细胞和嗜酸性粒细胞的总数，但程度小于皮质醇。与皮质醇相比，皮质酮的抗炎活性非常小。

夜行性动物如大鼠的皮质酮水平表现出明显的昼夜变化，在一天的后半部分达到峰值，随后在早晨降至最低点（1），并且被认为在睡眠-觉醒周期中起重要作用（2）。这与白天活动的哺乳动物相反，在它们身上，糖皮质激素的峰值浓度出现在早晨。已经观察到，在基础和压力条件下，与雄性大鼠相比，雌性大鼠的皮质酮释放增加（6）。

测定大鼠体内的皮质酮对于进行神经生理学研究的设施、学术机构以及拥有药物研究部门的制药公司都有兴趣。影响内分泌系统的药物可以增加或减少肾上腺皮质的皮质类固醇产量。因此，大鼠血清中的皮质酮是潜在治疗剂副作用的理想指标。在大鼠身上看到的同样的效果通常也在人类身上看到。大鼠的血浆皮质酮通常与ACTH测量一起用作压力指标（3,4）。慢性压力对下丘脑-垂体-肾上腺皮质系统功能的影响是年龄依赖的。最近的研究表明，衰老增加了大脑中皮质酮的基础水平，但并没有增加压力诱导的水平（5）。

小鼠/大鼠皮质酮ELISA是一种竞争性免疫测定方法，用于定量小鼠和大鼠血清或血浆中皮质酮的测定。仅供研究使用。不是为了用于诊断程序

艾美捷皮质酮（小鼠/大鼠）ELISA（ALP-55-CORMS-E01）检测原理：

小鼠/大鼠皮质酮ELISA试剂盒是一种固相酶联免疫吸附试验（ELISA），基于竞争性结合原理。未知量的皮质酮样品中存在一定量的与辣根结合的皮质酮过氧化物酶竞争皮质酮抗血清的结合位点微孔板。在摇床上孵育后，将微孔板洗涤四次。添加后底物溶液皮质酮的浓度与光学测量密度。

提供的试剂：

1. 微孔板

12 x 8（可拆分）条，共96孔；孔涂有兔抗皮质酮多克隆抗体。

2. 校准品0

1瓶，0.3 mL，即用型。

3. 校准品（校准品1-5）

5瓶，每瓶0.3 mL，即用型；浓度：15, 50, 185, 640, 2250 ng/mL。

孵育缓冲液

4. 1瓶11 mL，即用型。

5. 酶结合物

1瓶，7 mL，即用型；皮质酮与辣根过氧化物酶结合。

6. 底物溶液

1瓶，22 mL，即用型；

含有四甲基联苯胺（TMB）和过氧化氢的缓冲基质。

7. 终止液

1瓶，7 mL，即用型；含有2N盐酸溶液。

8. 洗涤液

1瓶，50 mL（10倍浓缩）；参见“试剂的准备”。

需要但未提供的材材料

• 离心机

• 能够进行450 nm终点测量的微孔板读取器

• 转速超过600 rpm的微孔板混合器

• 漩涡混合器

• 校准的可变精度微量移液器（10 µL, 50 µL, 100 µL, 200 µL, 1000 µL）

• 吸水纸

• 蒸馏水或去离子水

• 计时器

• 半对数图表纸或用于数据整理的软件

试剂准备

使用前所有试剂应处于室温。

洗涤液：将50 mL的10倍浓缩洗涤液用450 mL去离子水稀释至最终体积500 mL。

稀释后的洗涤液在室温下至少稳定3个月。

储存条件

在2°C至8°C下储存，未开封的试剂可保持稳定直至过期日期。不要使用超过该日期的试剂。开封后的试剂必须储存在2°C至8°C。首次开封后，如果使用和储存得当，试剂可稳定30天。微孔板必须储存在2°C至8°C。确保铝箔袋密封严实。

典型校准器曲线示例：

以下数据仅用于说明，不应用于计算以下结果

皮质酮（小鼠/大鼠）ELISA文献参考：

1. D´Agostino J, Vaeth GF & Henning SJ (1982): Diurnal rhythm of total and free

concentration of serum corticosterone in the rat. Acta Endocrinologica 100, Vol. 1, 85-90.

2. Vázquez-Palacios G et al. (2001): Further definition of the effect of corticosterone on the

sleep-wake pattern in the male rat. Pharmacol. Biochem. Behav. 70: 305-310.

3. De Souza EB & van Loon GR (1982): Stress induced inhibition of the plasma

corticosterone response to a subsequent stress in the rat: A nonadrenocorticotropinmediated mechanism. Endocrinology 110, 1: 23-33.

4. Kant GJ, Leu JR, Anderson SM & Mougey EH (1987): Effects of chronic stress on plasma

corticosterone, ACTH and prolactin. Physiology & Behaviour 40, 6: 775-779.

5. Garrido P, de Blas M, Del Arco A, Segovia G & Mora F (2010): Aging increases basal but

not stress-induced levels of corticosterone in the brain of the awake rat. Neurobiol Aging.

2010 Apr 21.

6. Handa RJ, Burgess LH, Kerr JE, O'Keefe JA (1994): Gonadal Steroid Hormone Receptors

and Sex Differences in the Hypothalamo-Pituitary-Adrenal Axis. Hormon. Behav. 28 (4):

464-76.

https://www.amyjet.com/products/ALP-55-CORMS-E01.shtml

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胰弹性蛋白酶ELISA使用方案及注意事项说明

胰腺弹性蛋白酶ELISA用于定量测定胰腺人体粪便样本中的弹性蛋白酶。在美国境内用于体外诊断美国和加拿大作为诊断胰腺外分泌功能不全的辅助工具。

艾美捷胰弹性蛋白酶ELISA（30-PANHU-E01）检测原理：

该ELISA用于定量测定粪便中的胰蛋白酶。在第1次孵育步骤中，样品中的胰蛋白酶与固定在微孔板表面的单克隆抗体结合。为了去除所有未结合的物质，进行洗涤步骤。在第二次孵育步骤中，加入一种过氧化物酶标记的结合物（小鼠抗胰蛋白酶抗体），该结合物特异性识别已结合的胰蛋白酶。经过另一次洗涤步骤以去除所有未结合的物质后，固相与底物四甲基联苯胺（TMB）孵育，TMB与过氧化物酶反应。随后加入酸性终止液以停止反应。颜色由蓝色变为黄色。黄色的强度与胰蛋白酶的浓度成正比。通过使用标准品获得的值生成吸光度单位（在450 nm处的光密度，OD）与浓度的剂量反应曲线。

供应的材料：

需要但未提供的材材料：

• 用于分发高达1000 µL的精密移液器（带一次性吸头）

• 用于分发高达1000 µL的可重复或多通道移液器

• 用于试剂准备的量筒和移液器

• 用于试剂准备的蒸馏水/去离子水

• 微孔板洗涤器或洗涤瓶

• 能够以550转/分钟、2毫米轨道的微孔板振荡器

• 微孔板读取器

• 用于样品准备的漩涡混合器

• 覆盖微孔板的箔片

• 计时器

胰弹性蛋白酶ELISA注意事项：

1. 试剂盒组分中使用的人源材料经过检测，结果为人类免疫缺陷病毒（HIV）、乙型肝炎病毒（HBV）和丙型肝炎病毒（HCV）阴性。然而，出于安全原因，所有试剂盒组分应被视为潜在的传染性物质。

2. 试剂盒中的试剂含有作为防腐剂的叠氮钠或ProClin。叠氮钠或ProClin对健康和环境有害。酶促颜色反应的底物也可能引起皮肤和/或呼吸道刺激。必须避免与这些物质接触。可在ALPCO应要求提供的安全数据表中找到进一步的安全信息。

3. 终止液由稀释后的硫酸组成，是一种强酸。尽管已经稀释，但仍需谨慎处理。它可能导致灼伤，应戴手套、眼睛保护和适当的防护服操作。任何溢出应立即用大量水擦拭。不要吸入蒸汽，避免吸入。

4. 10倍浓缩洗涤缓冲液含有表面活性剂，如果接触到眼睛，可能会引起严重的眼部刺激。

警告：引起严重的眼部刺激

如果进入眼睛：用水小心冲洗几分钟。如果可能且容易的话，取出隐形眼镜。继续冲洗。如果眼部刺激持续，请寻求医疗建议/关注。

5. 避免与皮肤直接接触。

6. 本产品不可内服。使用本产品时，避免吃东西、喝水或吸烟。不要使用嘴部移液任何试剂。

9. 此试剂盒中的试剂是批次特定的，不得替换。

10. 不要使用试剂盒标签上标明的过期日期之后的试剂。

11. 不建议对测试程序进行变更，可能会影响测试结果。

储存条件：

试剂盒应储存在2-8°C。如果储存得当，试剂盒在盒子标签上的过期日期前是稳定的。

胰弹性蛋白酶ELISA试剂准备：

所有试剂在使用前必须平衡至室温。只准备足够使用的条数的试剂。体积小于100 μL的试剂在使用前应离心，以避免体积损失。

控制品（1级和2级）和标准品以冻干形式提供，并在标签上标明的有效期内，在2-8°C下是稳定的。重悬细节在特定批次的数据表中给出。重悬后的标准品和控制品不稳定，无法储存。

洗涤缓冲液浓缩液（10倍）在使用前必须用蒸馏或去离子水1:10稀释（100 mL 洗涤缓冲液 + 900 mL 蒸馏/去离子水），并混合均匀。由于浓缩液中盐浓度高，可能会有晶体出现。在使用前，晶体必须在室温或37°C水浴中重新溶解。洗涤缓冲液在标签上标明的有效期内在2-8°C下是稳定的。1倍工作洗涤液（1:10稀释的洗涤缓冲液）可以在2-8°C下储存在封闭的烧瓶中，有效期为1个月。

提取缓冲液浓缩液（2.5倍）在使用前必须用蒸馏或去离子水1:2.5稀释（100 mL 提取缓冲液 + 150 mL 蒸馏/去离子水），混合均匀。由于浓缩液中盐浓度高，可能会有晶体出现。在使用前，晶体必须在37°C水浴中重新溶解。提取缓冲液在标签上标明的有效期内在2-8°C下是稳定的。1倍工作提取缓冲液（1:2.5稀释）可以在2-8°C下储存在封闭的烧瓶中，有效期为4个月。

结合物浓缩液（101倍）必须在1倍工作洗涤液中1:101稀释（100 µL 结合物浓缩液 + 10 mL 1倍工作洗涤液）。如果运行半板，准备8 mL的结合物（80 µL + 8 mL 1倍工作洗涤液）。结合物在标签上标明的有效期内在2-8°C下是稳定的。制备好的结合物（1:101稀释的结合物）不稳定，无法储存。

所有其他测试试剂都可以直接使用。当储存在2-8°C时，测试试剂在标签上标明的有效期内是稳定的。

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抗-HAV ELISA定性/定量测试分析&结果评估

抗甲型肝炎ELISA是一种检测甲型肝炎抗体的酶免疫测定法人血清中的病毒。仅供研究使用。不用于诊断程序。

艾美捷抗-HAV ELISA定性/定量（22-HAVHU-E01）检测原理：

抗HAV ELISA是一种假性竞争酶免疫测定。血清或血浆样品被加入到预先涂有灭活HAV抗原的微孔板孔中，并在37°C下孵育2小时。抗-HAV抗体与抗原结合。然后加入结合物（过氧化物酶标记的抗-HAV），并在37°C下再次孵育1小时。抗原的自由结合位点被结合物结合。多余的结合物从板上洗去，加入底物并在室温下孵育30分钟。结合的结合物将底物的颜色改变为蓝色。通过加入终止液来终止反应。颜色变为黄色。在微孔板读取器上测量有色反应产物的吸光度。吸光度与抗-HAV滴度成反比。用于定量测定时，请使用所包含的血清标准品来准备滴定曲线。

结果评估：

首先，使用选定的参考波长（>590 nm）确定的吸光度从450 nm的每个吸光度值中减去，无论选择的评估方法如何。之后，从所有值中减去空白的吸光度（A1/A2）。得到的测量值是所有进一步分析的基础。

抗-HAV ELISA定性/定量测试分析：

为了在人血清样品中定性测定抗-HAV抗体，产品开发过程中创建了一种方法，该方法能够以98.3%（n=801）的灵敏度区分阳性和阴性样品。为此，根据以下公式从阳性对照和阴性对照的信号计算截止值：

截止值 = （阳性对照的平均吸光度 + 阴性对照的平均吸光度） / 2

平均吸光度值高于截止值的样品为阴性。

吸光度值低于截止值的样品为阳性。吸光度在截止值的±10%附近的样品应重新测定。

表1显示了一个示例性测试结果。阴性和阳性对照之间的吸光度差异大于0.4（1.390至0.24）。截止值的计算结果如下：

截止值 = (NK + PK) / 2 = (1.390 + 0.024) / 2 = 0.707

因此，截止值是0.707。这样，所有信号高于这个值的样品被归类为阴性（不含抗-HAV抗体），所有信号低于0.707的样品被评估为阳性（含抗-HAV抗体）。

血清样品1的吸光度大于截止值，因此它是阴性的。血清样品2的吸光度小于截止值，因此它是阳性的。血清样品3的吸光度在0.778 - 0.636（0.707的±10%）范围内，必须在上述示例中重复测定。

表1：定性抗-HAV测定结果示例。

测试有效，因为符合以下条件：

阴性对照（NK）和阳性对照（PK）之间的消光差>0.4

半定量测试分析：

抗体滴度计算

除了使用定义的标准计算抗体含量（mIU/mL）外，还可以通过测定抗体滴度进行半定量分析。在这种ELISA中，使用不同稀释度的未知样品。根据预期的抗体水平，对样品进行稀释。对于这些稀释，使用包含10%阴性血清（VPN）的稀释液。为了确定（截止值）的滴度，使用以下公式：

截止值 = （阳性对照的平均吸光度 + 阴性对照的平均吸光度） / 2

吸光度直接低于截止值的血清稀释度代表抗体滴度。

抗-HAV ELISA定性/定量文献参考：

1) Flehmig, B.: Hepatitis A. Baillière`s Clinical Gastroenterology, Vol.4 No. 3, p. 707,1990.

2) Ambrosch, F. et al.: Comparison of HAV-Antibodies Induced by Vaccination,Passive Immunization, and Natural Infection. Viral Hepatitis and Liver Disease. S.98 (1990). (Editors: Hollinger, Lemon, Margolis, published by Williams and Wilkins, Baltimore; ISBN 0-683-04120-7).

3) Delem, A. et al.: Characterization of the immune response of volunteers vaccinated with a killed vaccine against hepatitis A. Vaccine, Vol. 11, Issue 4, S.479 (1993).

4) Heinricy, U. et al.: Schedule-dependent Immune Response to Hepatitis A Vaccination. Viral Hepatitis and Liver Disease. S. 108 (1990). (Editors: Hollinger,Lemon, Margolis, published by Williams and Wilkins, Baltimore; ISBN 0-683-04120-7).

https://www.amyjet.com/products/ALP-22-HAVHU-E01.shtml

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高灵敏度皮质醇ELISA(唾液)检测原理及测定程序方案

用于通过酶免疫测定法定量测定人唾液中的皮质醇。仅供研究使用。不用于诊断程序。

艾美捷皮质醇ELISA(唾液)（11-CORHU-E01-SLV）检测原理：

皮质醇唾液ELISA是一种竞争性免疫测定。标准品、对照品和样品中存在的皮质醇与酶标记的抗原（HRP结合物）在微孔板上的有限数量的抗皮质醇抗体结合位点之间发生竞争。经过洗涤步骤去除未结合的物质后，添加TMB（酶）底物，并与HRP反应形成与存在的皮质醇量成反比的蓝色产物。孵育后，通过添加终止液终止酶反应，颜色由蓝变黄。在450nm处的微孔板读取器上测量吸光度。使用一组校准品绘制校准曲线，从而可以直接读取样品和对照品中的皮质醇量。

样品收集和储存：

避免在吃正餐后1小时内或在饮酒后12小时内收集样本。酸性或高糖食物可能会通过降低样品pH值和影响细菌生长来影响测定性能。为了尽量减少这些因素，在收集样本前10分钟彻底漱口。不要使用血液污染的样本。

每份重复测定需要大约1毫升唾液。在收集样本前10分钟彻底漱口。在不用力或诱导的情况下，将4-5毫升唾液收集到一个干净的玻璃管中（可以使用Sarstedt的Salivette）。唾液样本可以在2-8°C下储存长达24小时，或者在分析将在以后进行的情况下，储存在-10°C或更低的温度下。处理时，将所有人类样本视为可能的生物危害物质，并采取适当的预防措施。

皮质醇ELISA(唾液)样品预处理和储存：

收集后，必须按照以下程序对样本进行预处理：

1. 将样本冷冻至少2小时。

2. 解冻样本。

3. 使用漩涡混合器混合并离心样本10分钟，速度为2000x g。

4. 小心地移除上清液，并转移到一个新的标记管中。上清液将在测试的测定程序中使用。

校准品和试剂盒对照品不需要预处理；它们是以即用格式提供的。

将预处理后的唾液样本储存在2-8°C下长达24小时，或者如果分析将在以后进行，则冷冻在-10°C或更低的温度下。储存的样本在使用前应检查以确保不含沉淀物。如果有沉淀物，按照样本预处理部分的步骤3-4进行操作。处理时，将所有人类样本视为可能的生物危害物质。

质量控制：

在评估测试结果的有效性时，应评估以下标准：

1. 最高浓度的校准品达到QC证书中所述的%结合可接受范围。%结合 = （校准品的OD/校准品A的OD）x 100。

2. 试剂盒对照品获得的值在QC证书中所述的可接受范围内。

3. 使用的任何外部对照品的结果符合可接受的范围。

皮质醇ELISA(唾液)测定程序：

注意：所有将要测试的样品在使用前必须经过预处理。（参见“样品预处理和储存”部分）。校准品和试剂盒对照品不需要预处理，因为它们是即用型的。

所有试剂和样品在使用前必须达到室温，并轻轻倒置混合。校准品、对照品和样品应以双份进行测定。一旦开始程序，所有步骤都应不间断地完成。

1. 准备1X工作溶液的HRP结合物和洗涤缓冲液。

2. 从微孔板框架中取出将要使用的微孔条数量，并将其放回带有干燥剂的袋子中。重新密封袋子，并将任何未使用的条放回冰箱。

3. 将每个校准品、对照品和样品的50 µL分别准确移液到预先确定的孔中，并进行双份测定。

4. 向每个孔中加入100 μL的1X工作HRP结合物溶液。（建议使用多通道移液器。）

5. 在室温下，使用微孔板振荡器（轨道振荡器（直径3mm）设置为600转/分钟或往复振荡器（行程长度1.5”）设置为每分钟180次振荡）孵育45分钟。

6. 使用自动微孔板洗涤器（首选）或按以下说明手动洗涤微孔板：

自动：使用自动微孔板洗涤器，进行3周期洗涤，每个孔使用300 μL的1X工作洗涤缓冲液（3 x 300 μL）。一个周期包括抽吸所有孔，然后用300 μL的1X工作洗涤缓冲液填充所有孔。在最后一次洗涤周期后，抽吸所有孔，然后用力将微孔板拍在吸水纸上以去除残留液体。

手动：手动洗涤时，进行3周期洗涤，每个孔使用300 μL的1X工作洗涤缓冲液（3 x 300 μL）。一个周期包括通过将孔的内容迅速排空到废液容器中来抽吸所有孔，然后使用多通道移液器向每个孔中移液300 μL的1X工作洗涤缓冲液。在最后一次洗涤周期后，通过将内容迅速排空到废液容器中来抽吸所有孔，然后用力将微孔板拍在吸水纸上以去除残留液体。

7. 向每个孔中加入150 μL的TMB底物（建议使用多通道移液器）。

8. 在室温下，使用微孔板振荡器（轨道振荡器（直径3mm）设置为600转/分钟或往复振荡器（行程长度1.5”）设置为每分钟180次振荡）孵育15-20分钟。

9. 向每个孔中加入50 μL的终止液（建议使用多通道移液器），按照添加TMB底物时相同的顺序和速度。轻轻拍打微孔板框架以混合孔中的内容。

10. 在添加终止液后20分钟内，使用设定为450 nm的吸光度微孔板读取器测量光密度（吸光度）。

典型表格数据：

仅样本数据。不用于计算结果。

https://www.amyjet.com/products/ALP-11-CORHU-E01-SLV.shtml

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PROGEN-神经丝200 kDa，牛--蛋白质标准品，纯化牛神经丝

PROGEN-神经丝200 kDa，牛，250µg：作为1D和2D SDS凝胶电泳、免疫测定和免疫接种的蛋白标准。

艾美捷PROGEN-神经丝200 kDa，牛，250µg：

货号 62010

数量 250 微克

储存在2-8°C下冻干；在-20°C下重悬（避免冻融循环）

预期用途仅限研究使用

来源牛脊髓

分子量 200 kDa

等电点 pI 5.5

纯度大于95%（由SDS凝胶电泳确定）

重悬用200微升蒸馏水重悬（最终体积250微升）。

最终溶液：10 mM 磷酸钠，pH 7.5，2 mM 二硫苏糖醇（DTT），6 M 尿素，10 mM 甲酰胺氯化物，1 mM 乙二胺四乙酸（EDTA）；

蛋白浓度：1 mg/ml（根据Bradford法测定）

PROGEN-神经丝200 kDa，牛主要特点：

纯化牛神经丝200 kDa

蛋白质标准品

PROGEN-神经丝200 kDa，牛，250µg文献参考：

Weber K, Shaw G, Osborn M, Debus E and Geisler N: Neurofilaments, a subclass of intermediate filaments: Structure and expression. Cold Spring Harbor Symp Quant Biol 48, 717 ff (1983)

Dahl D, Crosby CJ, Gardner EE and Bignami A: Purification of the glial fibrillary acidic protein by anion-exchange chromatography. Analyt Biochem 126, 165 ff (1982)

PROGEN，体外诊断试剂的制造商和供应商。主要产品线：经过质检验证的抗体、体外诊断产品、抗体噬菌体展示技术、密度梯度分离液和AAV(腺相关病毒）检测试剂盒等。

艾美捷科技是PROGEN的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

https://www.amyjet.com/brand/PROGEN.shtml

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PROGEN-波形蛋白，重组人，凝胶电泳、免疫测定和免疫接种蛋白标准

PROGEN-波形蛋白，重组人，100µg：

免疫印迹、免疫和免疫测定的蛋白质标准。

细丝重构：波形蛋白溶解在9.5 M尿素缓冲液中（见上文）后，通过逐步透析所得多肽溶液至4 M尿素的浓度，然后透析至低盐条件（50 mM NaCl、2 mM二硫苏糖醇、10 mM Tris-HCl，pH 7.4），获得原细丝和细丝复合物。

出于免疫目的，溶液可以进一步用PBS（磷酸盐缓冲盐水，如Dulbecco's PBS）透析。

-Hatzfeld M.和Franke W.W.（1985）。J.细胞生物学。101, 1826-1841

-Hatzfeld M.等人（1987）。J.分子生物学。197, 237-255

艾美捷PROGEN-波形蛋白，重组人，100µg：

货号：62215

数量：100 微克

储存：在2-8°C下冻干；在-20°C下重悬（避免冻融循环）

预期用途：仅限研究使用

来源：人重组，大肠杆菌中产生

分子量：57 kDa

等电点：pI 5.3

纯度：大于95%（由SDS凝胶电泳确定）

重悬：用70微升蒸馏水重悬（最终体积100微升）。

最终溶液：30 mM Tris/HCl pH 8，9.5 M 尿素，2 mM 二硫苏糖醇（DTT），2 mM 乙二胺四乙酸（EDTA），10 mM 甲酰胺氯化物；

蛋白浓度：1 mg/ml

应用：作为1D和2D SDS凝胶电泳、免疫测定和免疫接种的蛋白标准

PROGEN-波形蛋白，重组人主要特点：

重组人波形蛋白

蛋白质标准品

PROGEN-波形蛋白，重组人文献参考：

Weber K, Shaw G, Osborn M, Debus E and Geisler N: Neurofilaments, a subclass of intermediate filaments: Structure and expression. Cold Spring Harbor Symp Quant Biol 48, 717 ff (1983)

Dahl D, Crosby CJ, Gardner EE and Bignami A: Purification of the glial fibrillary acidic protein by anion-exchange chromatography. Analyt Biochem 126, 165 ff (1982)

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